欧盟批准一种酶制剂作为饲料添加剂

<正>据欧盟网站消息,2017年10月18日欧盟发布(EU)2017/1896条例,修订(EC)No 255/2005,废止(EC)No 668/2003,批准一种酶制剂作为饲料添加剂。据了解,这种酶制剂为黑曲霉(NRRL 25541)产生的1,3(4)-β-葡聚糖内切酶(endo-1,3(4)-beta-glucanase)和1,4-β-木聚糖内切酶(endo-1,4-beta-xylanase)制剂。该制剂作为饲料添加剂后,适用的动物品种有肉鸡、蛋鸡、肉用猪、肉用     

β-1,3-1,4-葡聚糖酶研究进展

β-1,3-1,4-葡聚糖酶(EC 3.2.1.73)是一类内切型糖苷水解酶,广泛存在于各类微生物及植物中,对谷物β-1,3-1,4-葡聚糖的水解具有重要作用。在食品工业及饲料工业有着广阔的应用前景。目前已有GH16、GH17及GH26 3个糖苷水解酶家族的β-1,3-1,4-葡聚糖酶结构得到解析。本文针对β-1,3-1,4-葡聚糖酶的来源、性质、结构、功能及应用的国内外研究现状进行综述。     

内切葡聚糖酶基因cel7b 在里氏木霉中的同源表达

用里氏木霉（Trichoderma reesei ）作为宿主同源表达内切葡聚糖酶基因。运用聚合酶链反应（PCR）技术从里氏木霉cDNA中扩增得到内切葡聚糖酶基因cel7b序列,并将其连接到载体p18-m2上构建重组质粒,将重组质粒转化到里氏木霉菌株中,通过筛选获得表达内切葡聚糖酶的重组里氏木霉工程菌。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测显示,发酵液中重组内切葡聚糖酶的分子质量约48 ku。摇瓶发酵结果显示,内切葡聚糖酶在重组里氏木霉中得到分泌表达,发酵液中的内切葡聚糖酶和滤纸酶活分别达到了726 U/mL和28.7 U/mL,分别为出发菌株酶活的2.9倍和1.1倍。玉米芯进行糖化试验结果显示,重组里氏木霉所产酶液糖化玉米芯的酶解得率为81.4%,比出发菌株提高了6.3%。     

哈茨木霉产水解热凝胶的内切β-1,3-葡聚糖酶的分离纯化

结合多种分离方法,从哈茨木霉(Trichoderma harzianum Rifai ACCC30371)的发酵产物中分离得到一种对不溶性多糖热凝胶具有较高水解活性的内切β-1,3-葡聚糖酶。结果表明,哈茨木霉发酵液经50%饱和度硫酸铵沉淀预处理后,依次经过HiPrep 26/10 desalting层析柱脱盐、QFF阴离子交换层析柱去除杂质蛋白,最终经Superdex 75凝胶柱纯化获得纯度较高的内切β-1,3-葡聚糖酶。最终酶活回收率为6.63%,内切酶比酶活由6.86U/mg提高到133.01U/mg,纯化倍数达到19.39倍。MALDI-TOF-TOF鉴定结果表明,该内切酶与产自绿色木霉的endoglucanase存在较高的同源性。     

雷氏木霉纤维素酶的结构

雷氏木霉(Trichoderma reesei)是目前研究最多的纤维素分解微生物。在其天然的纤维素分解酶复合体系中,已鉴定至少存在两种外切纤维二糖水解酶(exocellobio-hydrolase,CBH)(EC3.2.1.91),一些内切β—1,4—葡聚糖酶(endo—β—1,4—gluca—nase,EG)(EC3.2.1.4),和β—葡萄糖苷酶(β—gluco—sidase)(EC3.2.1.21)。最近通过基因工程技术,单克隆抗体和蛋白质理化分析等,人们对雷氏木霉的纤维素酶的结构及性质有了更进一步的认识。本文介绍的是关于雷氏木霉的纤维素酶的结构的一些最新研究进展。     

微生物木聚糖酶的研究进展

木聚糖是植物半纤维素的主要成分,是仅次于纤维素的第二丰富的可再生资源.木聚糖的结构十分复杂,它的完全降解需要多种水解酶的参与而共同完成,其中β-1,4-内切木聚糖酶(EC 3.2.1.8)能够以内切方式作用于木聚糖主链产生不同长度的木寡糖和少量的木糖,是木聚糖降解酶系中最关键的酶.木聚糖酶在纸浆、食品、饲料等行业上都有广泛的应用.文中综述了木聚糖酶的结构、分类、诱导和生产、应用等.     

里氏木霉产纤维素酶的诱导和合成机理研究进展

纤维素酶是一类诱导酶,诱导剂对纤维素酶的表达是必需的.常用的诱导剂如纤维素、槐糖、乳糖、纤维二糖、山梨糖等.里氏木霉主要表达3种纤维素酶:内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-1,4-葡萄糖苷酶,其中以外切葡聚糖苷酶Ⅰ的合成量最多,其次是内切葡聚糖苷酶和β-1,4-葡萄糖苷酶.纤维素酶的合成和表达是激活原件和抑制因子共同作用的结果:诱导物质和激活元件结合激活细胞内纤维素酶的合成和表达;当纤维素酶的分解产物达到一定水平时,细胞内的抑制因子和启动子结合,阻止纤维素酶的表达.     

β-1,3-1,4-葡聚糖酶研究进展

β-1,3-1,4-葡聚糖酶（EC 3.2.1.73）是一类内切型糖苷水解酶,广泛存在于各类微生物及植物中,对谷物β-1,3-1,4-葡聚糖的水解具有重要作用。在食品工业及饲料工业有着广阔的应用前景。目前已有GH16、GH17及GH26 3 个糖苷水解酶家族的β-1,3-1,4-葡聚糖酶结构得到解析。本文针对β-1,3-1,4-葡聚糖酶的来源、性质、结构、功能及应用的国内外研究现状进行综述。     

拟青霉WPG-1的鉴定及固体发酵产β-1,3-1,4-葡聚糖酶条件的优化

从土壤中筛选出一株高产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的耐热真菌WPG-1,经过鉴定为拟青霉属(Paecilomyces sp.)。通过单因素试验优化拟青霉WPG-1固体发酵产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的发酵条件。结果表明,该菌株产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的最佳条件是:以燕麦粉为碳源,蛋白胨为氮源(氮素含量0.2%),初始水分含量70%,初始p H为自然,培养温度45℃为最佳产酶条件。在优化后的条件下培养5 d产β-1,3-1,4-葡聚糖酶水平高达1 324.49 U/g干基碳源。     

使用分离自啤酒废水的木霉菌TP09固态发酵提纯β-葡聚糖酶

使用木霉TP09固态发酵,提纯并鉴定了β-1,3-葡聚糖酶的部分性质。采用饱和度为70%的（NH4）2SO4及DEAE-琼脂糖凝胶CL-6B柱层析纯化,β-葡聚糖酶相对粗酶溶液纯化了28.7倍,酶回收率为45.2%。经SDS-PAGE分析,该酶分子量近似54.6KD。酶最适反应pH为5.0,最适温度为50℃。在pH3.0～5.0、温度30～70℃酶活相对稳定。Fe^3＋、Mg^2＋、Mn^2＋以及Cu^2＋对该酶有抑制作用,Zn^2＋、Ca^2＋和Fe^2＋则有激活作用。底物选择性研究表明该酶为β-1,3-葡聚糖酶、β-1,4-葡聚糖酶。该酶可作用于含β-1,3、β-1,4糖苷键的底物,对含α-1,4和α-1,6糖苷键的底物无作用。表明分离自啤酒废水的木霉TP09生产的β-1,3-葡聚糖酶可增强不溶性β-1,3-葡聚糖的可溶性,促进了其在免疫疗法中的应用。     

木聚糖酶综述

木聚糖酶是木聚糖降解酶系中最关键的酶,主要包括外切β-1,4-木聚糖酶,内切β-1,4-木聚糖酶和β-木糖苷酶。由于木聚糖酶有多样、催化等特性,在造纸、食品、饲料、纺织、医药、环境和能源等行业被广泛应用,而且随着对木聚糖酶的进一步深入研究,其有进一步扩大应用的可能性。     

使用分离自啤酒废水的木霉菌TP09固态发酵提纯β-葡聚糖酶

使用木霉TP09固态发酵,提纯并鉴定了β-1,3-葡聚糖酶的部分性质。采用饱和度为70％的（NH4）2S04及DEAE--琼脂糖凝胶CL-6B柱层析纯化,β-葡聚糖酶相对粗酶溶液纯化了28．7倍,酶回收率为45．2％。经SDS--PAGE分析,该酶分子量近似54．6KD。酶最适反应pH为5．0,最适温度为50℃。在pH3．0-5．0、温度30℃-70℃之间酶活相对稳定。Fe3＋、Mg2＋、Mn2＋以及Cu2＋对该酶有抑制作用,Zn2＋、Ca2和Fe2＋则有激活作用。底物选择性研究表明该酶为β-1,3、β-1,4-葡聚糖酶。该酶可作用于含β-1,3、β-1,4糖苷键的底物,对含α-1,4和α-1,6糖苷键的底物无作用。以上表明分离自啤酒废水的木霉TP09生产的β-1,3-葡聚糖酶可增强不溶性β-1,3-葡聚糖的可溶性,促进了其在免疫疗法中的应用。     

响应面优化木霉TP-24固态发酵生产β-1,3-葡聚糖酶产酶条件

研究采用响应面法(RSM)对木霉TP-24固态发酵生产β-1,3-葡聚糖酶的培养基组成(碳源酵母粉、氮源NH4NO3和料水比)进行了优化。结果表明,采用以麸皮为基质、添加1.91%酵母粉、1.99%NH4NO3和15.79mL水的培养基中,接种木霉TP-24菌株于30℃发酵4d,β-1,3-葡聚糖酶活力可达到594.37U/g·ssc,比对照产酶水平提高了273.55%。     

微生物β-1,4-内切木聚糖酶研究进展

木聚糖是除纤维素之后,自然界中第二丰富的可再生资源,结构十分复杂,需要木聚糖降解酶系的协同作用才能将其完全水解。在木聚糖降解酶系中,β-1,4-内切木聚糖酶是使木聚糖完全水解最关键的酶,主要来源于细菌、真菌、放线菌等微生物,应用领域广,主要表现在食品、饲料、制浆造纸等行业。该文综述了微生物β-1,4-内切木聚糖酶的来源、选育、酶学性质、分类、分子结构、分子生物学及应用等研究进展。     

β-1，4-葡聚糖内切酶基因在大肠杆菌中分泌表达

采用重叠延伸PCR合成技术将乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)分泌蛋白基因序列usp45(81 bp)和瑞氏木霉(Trichoderma reesei)β-1,4-葡聚糖内切酶成熟蛋白序列egl3(657 bp)连接成融合基因usp45-egl3,构建了分泌型重组质粒pMG36e-usp45-egl3及重组大肠杆菌E.coli DH5α/pMG36e-usp45-egl3。分析重组大肠杆菌的表达效果及表达产物降解纤维素的能力。结果表明,重组大肠杆菌DH5α/pMG36e-usp45-egl3经14 h培养能分泌酶活为226 mU/mL的β-1,4-葡聚糖内切酶,并有效地降解了羧甲基纤维素钠。其中分泌的β-1,4-葡聚糖内切酶降解羧甲基纤维素钠生成还原糖的速率为2.35 mg/(h·mL)。     

食品级木聚糖酶的研究与应用

木聚糖酶(1，4-β—D—xylanxylanohydase ，EC．3．2．1．8)属于水解酶类，包括内切、β-木聚糖酶、β-木糖苷酶等。内切β-木聚糖酶作用于木聚糖主链的木聚糖苷键，水解木聚糖随机切断主链内的糖苷键，而生成分子量大小不同的寡糖。β-木糖苷酶主要作用是将木二糖水解成单糖。     

β-1,3-1,4-葡聚糖酶在毕赤酵母中的克隆与表达

β-1,3-1,4-D-葡聚糖酶是一类专一性降解β-1,3-1,4-葡糖苷键中的β-1,4-糖苷键,产生小分子还原糖的水解酶,广泛应用于啤酒工业和饲料工业中.本研究根据毕赤酵母密码子偏好性优化β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因序列,采用PCR法将其插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,经Sac I线性化后电击整合入毕赤酵母X-33基因组,构建重组酵母;经菌落PCR验证和摇瓶筛选,获得一株X-33/pPICZαA-bgl,甲醇诱导96h后,酶活力达308.5U/mL,经SDS-PAGE电泳,实际蛋白分子量约为33ku.β-1,3-1,4-D-葡聚糖酶最适反应pH为5.0,最适反应温度为50℃.     

β-1,3-1,4葡聚糖酶在大肠杆菌中的高效分泌表达

在大肠杆菌中实现β-1,3-1,4-葡聚糖酶的高效分泌表达。将实验室自主开发的信号肽ff53与β-1,3-1,4-葡聚糖酶成熟肽基因(bgl)进行融合连接到p ET-28a(+)上;通过优化诱导表达条件,28℃、8 g/L乳糖诱导10 h,重组菌E.coli BL21/p ET-ff53-bgl发酵液上清中β-1,3-1,4-葡聚糖酶活力达到1093 U/m L,与IPTG诱导的重组菌E.coli BL21/p ET-bgl(583 U/m L)相比,提高了0.87倍。本研究为高密度发酵制备该酶奠定了基础。     

木聚糖酶及其应用研究进展

木聚糖酶是半纤维素的主要一种,它是由β-D-吡喃型木糖单元通过1-4糖苷相连的直链高聚物。分解木聚糖的最主要的酶为β-D-1,4内切木聚糖酶。近十年来,木聚糖酶在饲料、食品、制浆造纸工业中显示了广阔的应用前景。本文重点论述了木聚糖的结构、木聚糖酶的特性及其应用。     

对里氏木霉Rut C-30所产非淀粉多糖酶系的分析

通过里氏木霉RutC 3 0以稻草和麸皮为基质进行固态发酵 ,对其产生的非淀粉多糖酶(NSP酶 )进行分析 ,试验表明里氏木霉RutC 3 0产生的NSP酶系较全 ,分别有纤维素酶、木聚糖酶、β 葡聚糖酶、β 甘露聚糖酶、果胶酶等 5种不同的NSP酶。并探讨了不同碳源及添加不同底物诱导物对里氏木霉RutC 3 0产生的NSP酶系的影响