花生蛋白酶水解产物抗氧化活性研究

利用蛋白酶水解花生蛋白并对水解产物的抗氧化活性进行研究.采用中性蛋白酶AS1.398和低温高碱性蛋白酶水解花生蛋白,AS1.398的水解条件为:温度55℃,pH6.5,底物浓度5.0%,酶用量1.0%,水解时间6 h;碱性蛋白酶的水解条件为:温度40℃,pH7.5,底物浓度5.0%,酶用量2.0%,水解时间6 h.在此条件下进行水解、灭酶、离心除去不溶性的成分,水解产物冷冻干燥.酶水解产物的抗氧化活性用油脂的过氧化值进行评价.产物添加到猪油中,65℃恒温保存30 d,每隔一定时间取样测定其过氧化值.Rancimat也用于评价花生蛋白酶水解产物的抗氧化活性,添加不同的酶水解产物后测定样品的氧化诱导期,用诱导期作为花生蛋白酶水解产物的抗氧化活性的评价指标.研究结果表明,花生蛋白酶水解产物具有一定的抗氧化性能.     

有机溶剂分级沉淀分离线性β-1,3-葡寡糖

盐酸水解二甲亚砜中的热凝胶可大规模地制备线性β-1,3-葡寡糖。为了快速高效地分离二甲亚砜中线性β-1,3-葡寡糖,采用不同种类的有机溶剂进行沉淀和分级沉淀。十三种常见有机溶剂中九种可以沉淀热凝胶水解产物,其中二氯甲烷和乙酸乙酯具有较高的应用可行性。二氯甲烷和乙酸乙酯可以分级沉淀分离线性β-1,3-葡寡糖,乙酸乙酯使用体积较小但选择性较差。分级沉淀效果受热凝胶浓度、水含量和离子强度的影响,而不受水解程度的影响。有机溶剂分级沉淀法可以快速高效地终止水解反应和分离水解产物,并可进一步回收二甲亚砜和有机溶剂进行重复利用,对β-1,3-葡寡糖的分离纯化具有重要的指导意义。     

酶法水解滑菇蛋白制备抗氧化肽的工艺优化

本文研究了酶法水解滑菇蛋白制备抗氧化肽的工艺条件,通过水解度与羟自由基(·OH)清除率来综合评价水解产物的抗氧化能力。以·OH清除率为指标,从碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶5种蛋白酶中筛选最适酶。在单因素实验研究酶浓度、底物浓度与水解时间对酶解产物·OH清除率和水解度影响的基础上,通过L_9(4~3)正交实验对水解工艺进行优化。结果得出,碱性蛋白酶活力高于其他4种蛋白酶,能使蛋白质充分水解,正交实验各因素对水解产物·OH清除率的影响程度依次为底物浓度酶浓度水解时间。其中,碱性蛋白酶的最佳水解工艺条件为:底物浓度3.0%、酶浓度3500 U/g、p H9.0、温度55℃、水解时间3.5 h。在此条件下,水解产物的·OH清除率可达82.7%,水解度为23.1%。碱性蛋白酶水解滑菇蛋白制备抗氧化肽的工艺可行,为滑菇蛋白高附加值产品的开发提供技术参考。     

水不溶性条斑紫菜多糖酸水解的研究

小分子多糖水解产物能够克服大分子多糖溶解性差、生物利用率低的不足。文中对水不溶性条斑紫菜多糖的盐酸水解进行研究。结果表明,盐酸水解多糖的最适条件为,酸浓度0.050 mol/L,温度80℃,时间2.0h。水解产物中还原糖占总糖的0.24%,低聚糖产物可能为二糖或三糖。产物的红外光谱分析表明粉状样品是含硫酸基的β-糖苷键连接的吡喃型低聚糖,其具有糖环内醚结构。产物的紫外光谱分析表明粉状样品含有蛋白质,进一步分析表明样品含有蛋白质6.88%、总糖88.92%。     

雪腐镰刀菌和酱油曲霉转化橙皮苷生成橙皮素单葡萄糖苷效果

为比较单一菌种与混合菌种在30 ℃、160 r/min条件下转化橙皮苷生成橙皮素单葡萄糖苷的效果，以橙皮苷为原料，雪腐镰刀菌和酱油曲霉为生产菌种进行液体深层发酵，采用高效液相色谱法和超高效液相色谱-质谱联用仪对单一菌种（雪腐镰刀菌、酱油曲霉）和混合菌种（雪腐镰刀菌-酱油曲霉1∶1）不同时间段发酵液中发酵产物、α-L-鼠李糖苷酶活力以及发酵液pH值进行分析。结果表明：混合菌种与单一菌种转化橙皮苷生成橙皮素单葡萄糖苷差异显著（P＜0.05），混合菌种发酵产生最大酶活力（104.81 U/mL）明显高于单一菌种（24.73、26.17 U/mL），二者发酵均在酸性条件（pH 4～6）下完成。混合菌种较优的发酵效果可为综合开发橙皮提供又一途径，充分利用柑橘加工副产物的同时避免了环境污染等问题的发生。     

低氯丙醇小麦面筋蛋白水解液的酸解工艺优化

以水解度、鲜味氨基酸(天门冬氨酸和谷氨酸)等为指标,利用盐酸、优质谷朊粉制备小麦面筋蛋白水解液,并优化各酸解条件,包括盐酸浓度、水解时间及料液比。同时对酸解植物蛋白过程中易生成的3-氯-1,2-丙二醇的含量进行测定,并组织感官鉴评小组对不同条件下水解液进行感官鉴评,选出综合指标较优的制备条件。在单因素试验基础上,采用响应曲面的3水平设计(Box-Behnken设计),以水解度和谷氨酸含量为指标优化了盐酸浓度、水解时间及料液比等工艺参数。得到最佳酸解工艺条件为盐酸浓度1.6 mol/L,料液比14(g/mL),水解时间4h。还比较了活性炭吸附前后3-氯-1,2-丙二醇的含量,预期得到适合工业大批量生产的优质、安全、鲜味高的低氯丙醇小麦面筋蛋白水解液。     

响应面法优化藜麦麸皮皂苷酸水解工艺

为了提高藜麦麸皮皂苷的抗氧化性,以DPPH·清除率为指标,对其酸水解工艺条件进行了响应面法优化。结果表明:影响藜麦麸皮皂苷酸水解的因素大小顺序为:水解时间水解温度盐酸浓度液液比,优化的最佳工艺条件为:盐酸浓度4.8 mol/L、液液比1∶2(mL/mL)、水解温度80℃、水解时间2.5 h。此工艺条件下,藜麦麸皮皂苷水解产物对DPPH·的清除率为68.84%,较水解前清除率提高了2倍多。酸水解可有效提高藜麦麸皮皂苷清除自由基及抗氧化活性。     

玉米蛋白环（组氨酸-脯氨酸）二肽前体的制备及其鉴定

以玉米蛋白为原料,制备活性环（组氨酸-脯氨酸）二肽（cyclo（His-Pro））前体——His-Pro和Pro-His二肽。分别采用碱性蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶对提取的玉米γ-醇溶蛋白进行单酶和双酶分步水解,筛选出最佳酶解工艺。采用碱性蛋白酶和风味蛋白酶分步水解的水解产物中cyclo（His-Pro）前体的含量比其他水解产物要高。采用响应面和L16（45）正交试验对碱性蛋白酶和风味蛋白酶分步水解γ-醇溶蛋白的工艺进行了优化,最佳水解条件为：底物质量浓度32 mg/mL,先加入12 100 U/g的碱性蛋白酶水解6.5 h,再加入17 000 U/g的风味蛋白酶于pH 7.5、55 ℃条件下水解6 h。采用超高效液相色谱法和电喷雾质谱法对cyclo（His-Pro）前体进行定量和定性分析,结果表明水解产物中含有较高含量的脯氨酸-组氨酸二肽（6.88 mg/g）。     

超声波辅助提取夏橙皮渣果胶研究

以干燥的夏橙皮渣为原料,先用复合磷酸盐碱性溶液浸泡24 h,采用超声波辅助提取法对果胶进行了提取。以果胶提取率为考察指标,研究了盐酸浓度、液料比、水解温度、水解时间、超声波处理时间对果胶提取的影响。结果表明,盐酸浓度为0.15 mol/L、液料比为30 m L/g、水解温度为70℃、水解时间为30 min、超声波处理时间为40 min时,果胶提取率高达20.67%,试验重现性好。     

大粒车前子多糖酸水解产物的分析

经水提、醇沉、Sevag除蛋白后得到精制大粒车前子多糖（Plantago asiatica L. polysaccharide,PLP）,采用0.3 mol/L三氟乙酸对PLP进行部分酸水解。建立超高效液相色谱-蒸发光散射检测器技术筛选较优水解条件的方法,同时运用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用法分析产物。结果表明：车前子多糖除蛋白后多糖含量为68.56%。在水解温度90 ℃、水解时间1.5 h条件下,能够得到比较多的水解产物,经超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用分析鉴定,水解产物中含有单糖、二糖至低聚六糖,并且存在戊糖和己糖相互连接的片段,但并未发现多个己糖相互连接的片段。     

橙皮苷改性技术研究进展

橙皮苷是重要的黄酮类化合物之一,可抗氧化,防癌,抗病毒,抗细菌,还具有保护心血管的作用,但是由于其水溶性较差,使其应用受到限制。文中介绍国内外橙皮苷改性的几种方法,包括酶处理、高温下酸催化橙皮苷水解、橙皮苷甲基化、磺化和金属离子络合等。     

多宝鱼不同水解物肽段组成及体外抗氧化活性比较

为研究熟化、模拟消化和酶解对多宝鱼肉水解物抗氧化活性的影响,本研究分别采用碱性蛋白酶和胃蛋白酶-胰蛋白酶水解多宝鱼生肉和熟肉,制备生肉碱性蛋白酶水解物、熟肉碱性蛋白酶水解物、生肉体外模拟消化产物和熟肉模拟消化产物,并评价其水解度、相对分子质量分布、氨基酸组成、肽段组成和体外抗氧化活性的差异。结果表明:生肉碱性蛋白酶水解物的水解度最高,为20.18%;4种水解物的分子质量分布差异明显,共有肽段仅有1条,但氨基酸组成没有显著性差异;碱性蛋白酶水解物以肽段小于1000 Da的组分为主,2～4肽的含量达64.57%～51.73%,而模拟消化产物中1000～3000 Da的组分占比超过50%,以多肽(>10)为主,熟化过程会减少小肽(<6)的比例;体外抗氧化活性分析显示,碱性蛋白酶水解物的抗氧化活性均高于模拟消化样品,熟化会降低生肉碱性蛋白酶水解物的抗氧化能力,生肉碱性蛋白酶水解物具有最高的超氧阴离子和羟基自由基清除能力,以及最佳的铁离子还原能力。因此,碱性蛋白酶是优于模拟消化的多宝鱼蛋白水解方式,鱼肉的熟化总体上会降低水解物的抗氧化能力。     

山羊乳酪蛋白酶解物制备及体外抗氧化活性研究

以自由基清除能力、金属离子螯合能力和抗脂质过氧化能力为指标,采用均匀试验研究山羊乳酪蛋白酶解物的制备及其体外抗氧化活性,并且比较自由基清除能力的方法。结果表明：山羊乳酪蛋白适宜的酶解工艺为在60g/kg的底物浓度下,中性蛋白酶和碱性蛋白酶的添加量分别为4000U/g和250U/g,45℃、pH7.5条件下酶解24h。山羊乳酪蛋白经酶解后其体外抗氧化活性显著增强。山羊乳酪蛋白酶解物 ·OH清除率的EC50值是其蛋白的3.59倍,ABTS＋ ·的清除能力是其蛋白的158.72倍,螯合Fe2＋的能力是其蛋白的5.44倍;在亚油酸体系中抗脂质过氧化能力强于TBHQ,与VE相当。清除 ·OH、DPPH自由基、O2－ ·和ABTS＋ ·的方法不能相互替代。     

底物浓度对碱性蛋白酶水解面筋流变特性的影响

本文较系统地研究了Alcalase碱性蛋白酶催化不同浓度小麦面筋蛋白水解过程中酶解产物的表观现象、表观粘度、剪切应力和流变特性。研究结果表明:酶解体系中小麦面筋的浓度越高,p H值下降幅度越少,在反应刚开始的6 h内是p H值变化最明显的区间,固形物浓度越高的样品,越早进入变化平稳的阶段。随着固形物浓度的提升和酶解时间的延长,酶解液的水分活度有下降的趋势,且固形物浓度越大,水分活度下降幅度越大,下降速度越快。在整个反应过程中,各固形物浓度酶解物的表观粘度和剪切应力均会随着酶解时间的延长而不断下降;固形物浓度越大下降趋势越明显,且不同固形物浓度酶解液的表观粘度和剪切应力的大小始终保持40%32%24%16%8%。此外,研究发现Ostwald-dewaele模型可以很好的拟合碱性蛋白酶催化不同固形物浓度小麦面筋蛋白酶解液的流变特性。     

蛋白酶处理对脱脂乳感官品质及游离氨基酸的影响

以新鲜脱脂牛乳为原料,采用分光测色仪、电子舌及氨基酸自动分析仪等分析酶解处理对脱脂牛乳感官品质、游离氨基酸含量及组成的影响。结果表明：经风味蛋白酶处理的脱脂牛乳水解度高,达到24.61%;蛋白酶处理会导致其感官性状的改变,与脱脂牛乳相比,3?种酶解产物L*值均显著（P＜0.05）下降,a*（负值）显著上升（P＜0.05）,风味蛋白酶处理对脱脂牛乳色泽影响大于碱性蛋白酶、复合蛋白酶处理;不同酶解产物滋味轮廓之间存在较大差异,与脱脂牛乳相比其甜味值下降显著,且随酶解时间延长,苦味值上升,甜味值衰退,碱性蛋白酶处理的酶解产物以涩味及涩味回味为主,风味蛋白酶的酶解产物以咸、苦味及苦味回味为主,复合蛋白酶的酶解产物以酸味为主,苦涩等味觉较低,电子舌能较好地区分不同酶解物的滋味差异;酶解处理可使脱脂牛乳中的游离氨基酸及必需氨基酸含量显著增加,苦味氨基酸为主要呈味氨基酸。酶解处理及酶解进程会使脱脂牛乳色泽、滋味及游离氨基酸产生变化,其中风味蛋白酶处理产生的影响大于碱性蛋白酶和复合蛋白酶处理。     

不同蛋白酶对蓝蛤酶解液风味特性的影响

为得到风味良好的蓝蛤酶解液,选用复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶进行单酶酶解,采用固相微萃取-气相色谱-质谱联用、电子鼻、电子舌及氨基酸自动分析仪等对不同酶解液的风味特征进行综合评价,利用滋味活性值评价滋味物质的呈味作用和强度。结果表明,复合蛋白酶酶解液的水解度较高,达到28.02%;不同酶解液的风味轮廓之间存在较大差异,电子鼻、电子舌能较好地区分不同酶解液的气味和滋味差异;鲜味和甜味是蓝蛤酶解液的主要呈味成分,复合蛋白酶组中游离氨基酸总量最高,碱性蛋白酶组中鲜味和甜味氨基酸比例最大。气相色谱-质谱联用分析共检出50 种挥发性物质,其中醛类和醇类物质最丰富,一些具有腥味的醛类在碱性蛋白酶组中相对含量最高,在复合蛋白酶和中性蛋白酶组中相对含量较低,具有增香效果的2-乙基呋喃和2-戊基呋喃在复合蛋白酶组中相对含量较高,复合蛋白酶酶解液的风味较佳。     

五种蛋白酶对牡蛎酶解产物滋味特性的影响

以牡蛎为研究对象,在水解度一致的情况下,探究胰蛋白酶、动物蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶对牡蛎酶解产物感官、肽分子量和游离氨基酸的影响。结果表明:五种酶解产物均具有较强的鲜味。碱性蛋白酶酶解产物在五种酶解产物中整体感官评价最佳。分子量<5 kDa肽比例从大到小是胰蛋白酶(74.99%)、动物蛋白酶(73.44%)、中性蛋白酶(71.53%)、碱性蛋白酶(68.46%)和风味蛋白酶(58.77%)。五种酶解产物中游离氨基酸百分比均呈现出谷氨酸百分比最高、组氨酸百分比最低的特点。游离氨基酸总量从高到低分别为胰蛋白酶(22.816 mg/g)、中性蛋白酶(20.775 mg/g)、风味蛋白酶(20.530 mg/g)、动物蛋白酶(16.287 mg/g)、碱性蛋白酶(16.232 mg/g)。胰蛋白酶、动物蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶酶解产物中TAV大于1的游离氨基酸数量分别为10、8、8、9和11种。5种蛋白酶酶解产物中,TVA值最大的氨基酸均是谷氨酸。     

乳清分离蛋白酶解制备抗氧化和ACE抑制活性产物

以乳清分离蛋白为原料,通过对肽浓度、游离氨基酸含量及水解度的研究,探讨了碱性蛋白酶Alkaline、中性蛋白酶NPU、肽酶AX和风味蛋白酶Flavourzyme对乳清蛋白酶解的影响。在优化碱性蛋白酶Alkaline水解条件的基础上,考察了中性蛋白酶NPU、风味酶Flavourzyme添加时间,获得了复合酶分步酶解工艺:酶解温度55℃,加入1.5% Alkaline([E/S]),维持pH8.5酶解10 min,待pH7.2时加入1% NPU([E/S]),酶解240 min,加入1% Flavourzyme([E/S])继续酶解20 min。在此条件下,肽浓度达到60 g/L以上,游离氨基酸含量为4348 mg/kg。获得的酶解产物基本无苦味。酶解物分子量主要分布在<1 kDa(69.62%)。酶解产物具有ABTS自由基清除和ACE抑制活性,IC₅₀值分别为1.02(0.377 μmol Trolox当量/mg)和1.38 mg/mL。综上,采用复合酶酶解乳清分离蛋白可获得具有抗氧化活性和ACE抑制活性产物,为乳清酶解物在功能食品或保健品领域的运用提供科学参考。     

溶剂提取对青稞中不同形态多酚组成及抗氧化活性的影响

为研究不同极性溶剂对青稞全谷物中不同形态酚类化合物含量、组成及抗氧化性的影响,建立适宜于青稞全谷物中多酚提取的方法。以4?个不同品种青稞为原料,比较4?种不同溶剂及酸法、碱法分别对青稞中游离酚和结合酚含量、组成与抗氧化活性的影响。结果表明,所有提取试剂中80%丙酮溶液提取的游离态总酚含量（139.79～235.96?mg/100?g）及总黄酮含量（9.88～15.52?mg/100?g）最高,酸法提取的青稞结合态总酚含量是碱法的1.9～3.1?倍,结合态黄酮含量是碱法的1.3～2.9?倍;80%丙酮溶液提取物中检测到8～18?种青稞游离酚类化合物,且酚类化合物含量显著高于其他溶剂,绿原酸、苯甲酸、儿茶素、槲皮素、芦丁是其主要的游离酚类化合物。与碱法相比,酸法能释放出更多的结合酚类化合物类型及含量,没食子酸、p-香豆酸、丁香酸、苯甲酸、藜芦酸、橙皮苷是其主要的结合酚类化合物;参试青稞80%丙酮溶液提取物显示出最高的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力（852.56～1?484.18?μmol/100?g）,2,2’-联氮-双-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate),ABTS）自由基清除能力（358.93～518.09?μmol/100?g）及铁离子还原能力（ferric ion reducing antioxidant power,FRAP）（1?250.55～2?041.16?μmol/100?g）。酸法水解参试青稞结合酚DPPH自由基清除能力、FRAP、ABTS＋?清除能力分别是碱法水解的7.6～10.3、1.2～1.8?倍和1.1～1.3?倍。因此,80%丙酮溶剂和酸法分别是青稞中游离酚与结合酚的适宜提取溶剂,且本研究表明青稞全谷物中富含丰富的酚类物质,是一种潜在的天然抗氧化剂来源。     

酶解脱脂蚕蛹蛋白过程中鲜味规律研究

以缫丝蚕蛹为实验材料,分析碱性蛋白酶和风味蛋白酶复配酶解脱脂蚕蛹蛋白规律。结果表明:酶解脱脂蚕蛹蛋白的最适底物质量浓度为8?g/100?m L、酶解温度为50℃、总酶添加量为1?g/100?g(以脱脂蚕蛹粉计)、酶解时间为9 h;酶解过程中促进了糖的释放,可溶性氮主要是以肽氮形式存在,酶解产物的分子质量主要集中在小于1 k D;在酶解产物中主要的游离氨基酸分别为苏氨酸、组氨酸、亮氨酸、酪氨酸、赖氨酸、半胱氨酸,占总游离氨基酸含量的60%左右,对酶解液的滋味产生一定的影响;在酶解产物中肽类氨基酸主要是鲜甜味氨基酸,占总肽类氨基酸的50%左右,其中亲水性氨基酸与碱性氨基酸含量的比值约为1;通过对酶解产物鲜味的相关性分析,肽类氨基酸的含量与酶解产物的鲜味有较好的线性相关性。