模拟酶解大豆7S、11S蛋白及其抗氧化活性的研究

以"活性肽搜寻与蛋白模拟水解系统"为工具,选择碱性蛋白酶和中性蛋白酶对大豆7S、11S蛋白进行模拟水解,得到不同水平的抗氧化肽肽段,以重均分子量为手段,评价理论模拟与实验水解的相关性;以还原力、清除二苯代苦味酰基苯肼(DPPH·)自由基能力比较以上蛋白酶水解物的抗氧化活性.结果表明:模拟与实验水解得到的分子量分布在比例以及重均分子量方面有显著相关性(P<0.01);四种酶解产物均具有一定的抗氧化活性,其中,以7S蛋白的碱性蛋白酶产物表现出最高的还原力和DPPH·清除能力(P<0.05).     

豌豆蛋白水解物的分离及其抗氧化活性的研究

将豌豆蛋白用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶水解0.5～6 h,用pH-Stat法测定其水解度;测定水解物的还原能力、清除自由基能力来分析豌豆蛋白水解物的抗氧化作用模式。将4 h的豌豆蛋白碱性蛋白酶水解产物采用葡聚糖凝胶G-25分离豌豆肽,测定各片段的抗氧化活性,以确定豌豆抗氧化肽的分子量。结果得出豌豆蛋白水解产物的自由基清除能力、还原能力都是随着水解时间的延长而增大。底物浓度为7%、水解4 h的豌豆蛋白水解产物与其它水解条件下的水解产物相比,具有较高的抗氧化活性。采用G-25分离豌豆肽的结果表明,抗氧化活性较高的豌豆肽的平均分子量约640Da左右,其抗氧化能力是豌豆肽原液的2倍。     

麦胚抗氧化肽水解用酶的筛选研究

研究了中性蛋白酶AS1.398、Neutrase及碱性蛋白酶Alcalase、Proleather FG-F、Protease S水解麦胚蛋白的进程特性,考察了5种蛋白酶水解物的体外抗氧化活性。结果表明,碱性蛋白酶Proleather FG-F是制备麦胚抗氧化肽的最适水解酶,其酶解物清除超氧阴离子自由基(O2-.)的能力最强,IC50为1.33mg/mL;其酶解物中相对分子质量小于1000的组分所占比例最高,达到68.28%。     

刺参低聚肽的质量评价和抗疲劳作用研究

研究p H渐变条件下采用碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶分步酶解猪皮得到的不同分子量胶原蛋白肽的体内外抗氧化活性。猪皮预处理后,采用碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶分步进行酶解,酶解液经超滤得到M1 k Da、1 kDaM3 kDa、M3 kDa 3个不同分子量肽段,以福林酚比色法测定各组分肽含量,通过测定各组分肽段对DPPH自由基、ABTS+自由基、O2-自由基及OH自由基的清除实验评价各组分肽的体外抗氧化活性,再以不同分子量肽段酶解液对小鼠进行灌胃,以试剂盒测定小鼠灌胃后血清的总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶的活性、总抗氧化能力和微量丙二醛含量评价各组分肽的体内抗氧化活性。综合体内外抗氧化实验数据,各组分肽的抗氧化能力强弱顺序为:小于1 kDa组分1 k Da～3 kDa组分大于3 kDa组分。pH渐变条件下采用碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶分步酶解的各组分猪皮胶原蛋白肽在体内外均有不同程度的抗氧化能力,且分子量越小,抗氧化活性越强,可对机体起到保护作用。     

源于地龙蛋白的抗氧化肽鉴定与构效关系

为探究外源蛋白酶预酶解处理对地龙蛋白胃肠消化程度和胃肠消化后抗氧化活性的影响。该研究利用五种蛋白酶制备了不同的地龙蛋白酶解物,然后通过体外胃肠模拟消化探究这些酶解物的水解度、分子量分布和体外抗氧化活性的变化。五种蛋白酶酶解物中,碱性蛋白酶酶解物的水解度最高,为40.8%,其对DPPH、ABTS自由基的清除能力分别为27.36、175.46 μmol TE/g,ORAC值为0.70 μmol TE/mg。碱性蛋白酶酶解物经胃肠消化后的水解度、DPPH自由基清除率、ORAC值相比于地龙蛋白直接胃肠消化所得产物（EWP）分别提高了94.06%、72.21%及120.00%。GHEWP中鉴定出10 823条分子量<3 ku的肽,通过bioware.ucd.ie进行活性阈值评分筛选出活性评分最高的11个肽进行合成,验证活性,其中ATSGFFVY、HCFVLY、HLASGWY、HRYSDF、HYANMY的综合抗氧化能力较好,量子化学计算结果表明：ATSGFFVY、HCFVLY、HRYSDF、HYANMY的活性位点可能分别位于Tyr-8、Tyr-6、Tyr-3、Tyr-2上;HLASGWY的活性位点可能位于Trp-6上。该研究表明碱性蛋白酶预酶解可提高地龙蛋白的消化程度,增强其胃肠消化产物的抗氧化活性。     

酶解法制备条浒苔抗氧化肽工艺优化及其消化稳定性研究

本研究旨在优化中性蛋白酶水解条浒苔蛋白制备抗氧化肽的工艺条件,并对水解物的消化稳定性进行表征。以DPPH自由基清除率和水解度(DH)为指标,在单因素实验的基础上采用响应面分析法优化条浒苔抗氧化肽的制备工艺。通过三级膜分离系统将酶解物分离成不同相对分子质量的三个组分,采用体外模拟消化试验测试不同相对分子质量范围组分的消化稳定性。结果表明最佳酶解条件为:温度47℃、pH7.4、加酶量3300 U/g pro、时间3.3 h、固液比1:20 g/mL,在此条件下酶解物的DPPH清除率为84.33%±1.78%,模型预测值为85.53%,经检验,实测值与预测值无显著差异(P=0.444),模型可靠;相对分子质量小于10 kDa的两个组分具有较强的抗氧化活性和消化稳定性,大于10 kDa的组分抗氧化活性明显较低,经过消化酶消化后抗氧化性显著下降。条浒苔蛋白质经中性蛋白酶水解后可获得具有抗氧化活性和消化稳定性的蛋白肽,工艺模型可靠,水解物在食品中具有潜在应用价值。     

草鱼鱼皮不同分子量肽段体外抗氧化性能的研究

采用碱性蛋白酶对草鱼皮进行水解,并将水解产物通过截留分子量为10、5和3 k Da的超滤膜,得到10、5~10、3~5和3 k Da四种不同分子量肽段组分。主要研究了粗蛋白水解产物经截留后不同分子量肽段的体外抗氧化活性及其功能,结果表明相同浓度下3~5和3 k Da肽段组分在清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2'-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基方面比蛋白水解产物或其它肽段组分的效果显著(p0.05),而10 k Da肽段组分与Fe2+螯合能力最强。然而,与还原型的L-谷胱甘肽相比,10、5~10、3~5 k Da肽段组分具有较弱的清除超氧阴离子自由基能力,肽的氨基酸序列在其抗氧化活性中起到关键作用。结果表明,3 k Da肽段组分可作为功能性天然抗氧化剂添加到保健食品中。     

酶解制备苦荞蛋白抗氧化肽及其分离纯化研究

以苦荞麦粉为原料,提取苦荞蛋白,分别采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶对蛋白进行酶解,采用DPPH法比较不同酶解产物的抗氧化活性,从而筛选水解制备苦荞蛋白抗氧化肽的最适酶。以水解度为指标,利用单因素试验和响应面法优化酶解工艺条件。结果表明,不同蛋白酶酶解产物的抗氧化活性大小为:胃蛋白酶胰蛋白酶碱性蛋白酶,其中胃蛋白酶酶解产物的DPPH自由基清除率最高,为68.47%。胃蛋白酶最佳水解工艺条件为:时间2.5 h、温度38℃、pH 2.0,在此条件下苦荞蛋白水解度为32.68%。采用超滤对苦荞蛋白水解物进行分离纯化,结果表明,分子量3 kDa的水解物具有显著的抗氧化活性;经凝胶过滤色谱进一步分离得到3个峰,小分子量峰组分显示出最强的抗氧化活性。     

不同苦荞蛋白酶解产物抗氧化活性研究

以苦荞蛋白作为底物,采用碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以及胃蛋白酶加胰蛋白酶模拟体内蛋白消化,制备苦荞麦蛋白水解物。采用DPPH及ABTS~+·法比较不同的蛋白水解物与水解前苦荞蛋白的体外抗氧化活性。结果表明:不同蛋白酶水解产物水解度由高到低的顺序为:碱性蛋白酶胃蛋白酶~胰蛋白酶胃蛋白酶木瓜蛋白酶胰蛋白酶,其中碱性蛋白酶水解苦荞蛋白水解度达29.95%。苦荞蛋白本身具有一定的抗氧化能力,其中DPPH清除率及ABTS~+·清除率最高分别达71.91%及11.25%,但均显著低于阳性对照Vc。随着水解程度的增加,苦荞蛋白水解产物抗氧化能力逐渐增强。其中,以碱性蛋白酶酶解产物抗氧化活性最高,其DPPH清除率及ABTS~+·清除率最高分别为91.65%(0.5 mg/mL)及16.67%(1 mg/mL),均显著高于原苦荞蛋白。其中,碱性蛋白酶水解产物的DPPH自由基清除率在高浓度(0.5mg/mL)条件下,与阳性对照Vc持平。同时碱性蛋白酶酶解产物抗氧化性(DPPH清除率及ABTS~+·清除率)显著优于其他蛋白酶解产物。因此,苦荞麦蛋白采用碱性蛋白酶解制备苦荞水解产物可作为天然的抗氧化剂。     

生物解离大豆蛋白酶解物体外模拟消化抗氧化活性变化

挤压膨化大豆在生物解离过程中,通过酶解（碱性蛋白酶、风味蛋白酶）产生的大豆蛋白酶解物（soybean protein hydrolysate,SPH）有良好的抗氧化活性,因此,需要探索模拟胃肠道（gastrointestinal,GI）消化对蛋白酶解物抗氧化活性的影响。分别以蛋白酶（碱性蛋白酶、风味蛋白酶）酶解得到的SPH和经过模拟GI消化后的产物作为研究对象,采用水解度、氨基酸组成、分子质量分布、氧化自由基吸收能力（oxidative radical absorption capacity,ORAC）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力及2,2’-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt,ABTS）阳离子自由基清除能力对样品抗氧化活性进行分析。结果显示：相对于风味蛋白酶酶解,采用碱性蛋白酶进行酶解时抗氧化活性更高;但是经过模拟GI消化后,风味蛋白酶酶解得到的SPH抗氧化活性更高,ORAC为69.15 μmol/mg、DPPH自由基清除能力为27.29%、ABTS阳离子自由基清除能力为56.21%,肽的相对含量更高,为75.86%,并且肽中具有抗氧化活性的氨基酸含量更高,分子质量小于1 kDa的肽相对含量最高,为17.35%。     

Comparison of bioactive peptides prepared from sheep cheese whey using a food‐grade bacterial and a fungal protease preparation

Novel bacterial (HT) and fungal (FPII) food‐grade protease preparations were evaluated for their ability to hydrolyse sheep cheese whey (SCW) and the generation of bioactive peptides. Both protease preparations hydrolysed the whey proteins to small peptides over 24‐h hydrolysis time, but the time course hydrolysis profiles were different as evaluated by SDS‐PAGE. The HT whey hydrolysate had considerably higher antioxidant and angiotensin‐I converting enzyme (ACE)‐inhibitor activity than the FPII hydrolysate. Neither hydrolysate was cytotoxic towards Vero cells. OFFGEL electrophoresis of the small peptide pool fraction (<15 amino acids) of each hydrolysate indicated differences in the pI distribution of the bioactive peptides. This likely reflects the diverse hydrolytic specificity of the proteases. Although the antioxidant activity of both hydrolysates was not significantly affected by simulated gastrointestinal digestion, the loss of ACE‐inhibitor activity was greater with the FPII hydrolysate.     

酶解与体外模拟胃肠消化对脱脂羊奶粉ACE抑制活性的影响

本研究旨在探究商业蛋白酶酶解与体外模拟胃肠消化对高消化率的脱脂羊奶粉释放ACE抑制肽的影响,以评价脱脂羊奶粉酶解必要性及所需酶解程度。采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶和风味蛋白酶对脱脂后的圭山羊奶粉进行酶解反应,并对脱脂羊奶粉及其酶解物进行体外模拟胃肠消化,测定酶解液及模拟胃肠消化液的多肽含量、ACE抑制活性以及分子量分布。研究发现,羊奶粉经过体外模拟胃肠消化后,消化液的多肽含量与ACE抑制率分别达到20.81 mg/mL和62.55%;而经过碱性蛋白酶和风味蛋白酶的适度酶解,其模拟胃肠消化液多肽含量与ACE抑制活性反而下降;经过复合蛋白酶的适度酶解,其模拟胃肠消化液的多肽含量与ACE抑制活性小幅度提高,分别达到22.67 mg/mL和69.29%;经过中性蛋白酶的适度酶解,其模拟胃肠消化液多肽含量与ACE抑制活性均显著提高,分别达到23.76 mg/mL和81.10%。分子量分布结果显示,经过体外模拟胃肠消化后,<1000 Da的小分子肽由酶解液中的70.77%提高到90%。综上,圭山羊奶粉经过体内胃肠消化就可以释放出较多的ACE抑制肽,而经过中性蛋白酶酶解至水解度8%后...     

具有金属螯合活性的蚕豆蛋白酶解物的制备

目的探究蚕豆蛋白酶解物的金属螯合活性,研究其金属螯合活性与其抗氧化活性的关系。方法分别采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶对蚕豆蛋白进行酶解,并测定其水解物的抗氧化活性与金属螯合活性,选用碱性蛋白酶为酶解蚕豆蛋白制取金属螯合肽的最适酶,以酶解产物的水解度、抗氧化活性及金属螯合活性为测定指标获得合适的水解条件。结果 3种蛋白酶的蚕豆蛋白酶解产物都有金属螯合活性和抗氧化活性,碱性蛋白酶为酶解蚕豆蛋白的最适酶,最适酶解时间为4 h时,得到的酶解产物金属离子螯合率为88.22%,抑制羟自由基能力为220.70 U/mg,总还原力为0.03 U/mg。结论蚕豆蛋白酶解物具有一定的金属离子螯合活性与抗氧化活性,水解度对蚕豆蛋白酶解物的金属离子螯合活性及抗氧化活性有明显的影响,蚕豆蛋白酶解物的金属螯合活性与总还原力及抑制羟自由基能力呈现显著的正相关性,相关系数分别为0.925、0.968(P0.01)。     

体外消化对金瓜籽抗氧化肽抗氧化活性的影响

本实验以金瓜籽为原料,以还原力、羟自由基清除率、DPPH自由基清除率为考察指标,采用响应面试验探讨了制备金瓜籽抗氧化肽的工艺参数,并研究了其经体外模拟人体胃肠道消化后的游离氨基酸组成、分子质量分布及抗氧化活性变化。结果表明：制备金瓜籽抗氧化肽的最优工艺条件为底物（金瓜籽粕）质量分数为6%、添加碱性蛋白酶3%、在pH?8.5的体系中55?℃酶解90?min,此条件下所得羟自由基清除率、DPPH自由基清除率、还原力分别为（58.19±0.80）%、（60.27±1.73）%和0.49±0.01;分子质量小于3?kDa、3～5?kDa及大于5?kDa的抗氧化肽经体外模拟胃肠道消化后分别含游离氨基酸41.72%、36.94%和33.93%,其主要为分子质量小于500?Da的肽段,占比分别为73.50%、60.15%和53.30%;与消化前相比,消化产物对羟自由基的清除能力分别提高了26.04%、29.06%和34.43%,还原力分别提高了50.98%、64.53%、67.35%。该研究可为金瓜籽抗氧化肽作为功能性抗氧化剂的生产和应用提供参考。     

鸭血酶解产物亚铁螯合能力的研究及酶解物的组分分析

为了提高鸭血的高值化利用,本研究以鸭血为原料,通过单因素实验以及响应面试验确定了制备具有高亚铁螯合能力的鸭血酶解产物的最优酶解工艺,并分析了最优工艺下鸭血酶解产物的氨基酸组成和分子量分布情况。结果表明:碱性蛋白酶酶解鸭血的最佳酶解工艺为:酶添加量为9800 U/g,酶解温度50℃,pH11,酶解时间为2 h,此条件下亚铁螯合率为65.36%。相对分子质量分布结果显示,分子量在1500 Da以下的多肽组分约占72.01%。氨基酸组成分析发现酶解产物的总氨基酸含量约为76.25%,其中Lys、Glu、Asp、His含量较高,分别占氨基酸总量的10.25%、13.95%、9.67%、8.89%。这些氨基酸对亚铁离子有较强的螯合作用。优化碱性蛋白酶水解鸭血制备具有高亚铁螯合能力的鸭血酶解产物的酶解工艺可靠、合理,酶解产物具有较好的体外亚铁螯合活性。研究结果将为畜禽血液补铁剂的开发提供一定的理论依据。     

In vitro antioxidant activity of protein hydrolysates prepared from corn gluten meal

BACKGROUND: Corn gluten meal (CGM), a major by‐product of corn wet milling, is mainly used as forage in China. Because of its particular amino acid composition, in which there are large amounts of hydrophobic amino acids such as leucine, alanine and phenylalanine, CGM protein was thought to be a good resource to obtain antioxidant peptides. CGM protein was hydrolysed with a biochemical grade alcalase and the derived hydrolysates were assessed for their antioxidant properties in different in vitro assay systems, including inhibiting activity on lipid peroxidation, by reducing power, hydroxyl radical scavenging activity, and DPPH radical scavenging activity. The effects of concentration and molecular weight (MW) of hydrolysates on antioxidant activity were investigated. RESULTS: The results showed that CGM hydrolysates were effective antioxidants, and there was a dose‐dependent relationship between hydrolysate concentration and antioxidant activity; the highest antioxidant activity was found in peptides 500–1500 Da, and the antioxidant activity of peptides below 500 Da or peptides above 1500 Da were all lower than that of total hydrolysates. CONCLUSIONS: The finding showed that the antioxidant activity of CGM hydrolysates was related to molecular weight and hydrolysate concentration, and the active antioxidant fraction should be in the peptides fraction of 500–1500 Da. CGM protein hydrolysates can be a source of natural antioxidant and used as a food additive. Copyright © 2008 Society of Chemical Industry     

酶解公犊奶牛肉制备抗氧化活性肽口服液的工艺优化

为提高公犊奶牛肉的附加值,研究酶解公犊奶牛肉制备抗氧化性活性肽的最佳工艺。采用中性蛋白酶和碱性蛋白酶等5 种酶对公犊奶牛肉进行酶解,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率为评价指标,筛选出酶解产物抗氧化性最高的最适蛋白酶。用最适蛋白酶对公犊奶牛肉进行酶解,通过单因素试验,研究不同酶解时间、酶解温度、酶解pH值和酶添加量对酶解产物抗氧化性的影响,然后再用响应面分析法对酶解条件进行优化。结果表明：中性蛋白酶为最佳的蛋白酶,最优酶解条件为加酶量0.61 g/100 mL、pH值6.80、酶解温度54 ℃、酶解时间2.92 h。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法对酶解产物进行分析,结果表明,公犊奶牛肉中的蛋白质分子被成功水解为分子质量小于7 kDa的小分子多肽和游离氨基酸;通过感官评价方法研制出一款澄清透明、淡黄色、具有牛肉风味的抗氧化活性肽口服液。     

Physicochemical and bitterness properties of enzymatic pea protein hydrolysates

ABSTRACT:  The effects of different proteolytic treatments on the physiochemical and bitterness properties of pea protein hydrolysates were investigated. A commercial pea protein isolate was digested using each of 5 different proteases to produce protein hydrolysates with varying properties. After 4 h of enzyme digestion, samples were clarified by centrifugation followed by desalting of the supernatant with a 1000 Da membrane; the retentates were then freeze-dried. Alcalase and Flavourzyme™ produced protein hydrolysates with significantly higher ( P < 0.05) degree of hydrolysis when compared to the other proteases. Flavourzyme, papain, and alcalase produced hydrolysates that contained the highest levels of aromatic amino acids, while trypsin hydrolysate had the highest levels of lysine and arginine. Papain hydrolysate contained high molecular weight peptides (10 to 178 kDa) while hydrolysates from the other 4 proteases contained predominantly low molecular weight peptides (≤ 23 kDa). DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) free radical scavenging activity of the Flavourzyme hydrolysate was significantly ( P < 0.05) the highest while alcalase and trypsin hydrolysates were the lowest. Inhibition of angiotensin converting enzyme (ACE) activity was significantly higher ( P < 0.05) for papain hydrolysate while Flavourzyme hydrolysate had the least inhibitory activity. Sensory analysis showed that the alcalase hydrolysate was the most bitter while papain and α-chymotrypsin hydrolysates were the least. Among the 5 enzymes used in this study, papain and α-chymotrypsin appear to be the most desirable for producing high quality pea protein hydrolysates because of the low bitterness scores combined with a high level of angiotensin converting enzyme inhibition and moderate free radical scavenging activity.     

Separation of iron-binding protein from whey through enzymatic hydrolysis

Whey protein concentrate (WPC) was hydrolyzed by nine proteolytic enzymes to examine the effectiveness of the hydrolysates to bind iron. Degree of WPC hydrolysis was higher with pancreatin (13.91%), alcalase (13.60%), and flavourzyme (12.80%) compared with other enzymes (esperase, neutrase, papain, pepsin, protease and trypsin). Tricine sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and reverse-phase high performance liquid chromatography analyses revealed maximum hydrolysis of α-LA and β-LG with alcalase. Molecular masses of peptides derived from alcalase hydrolysate were smaller than 6.5 kDa. Iron-binding by alcalase hydrolysate was the highest (97.6%) of all other hydrolysates. Using ion-exchange chromatography alcalase hydrolysate was eluted at a 0.25 m NaCl gradient concentration with higher iron-binding ability. This eluted fraction had higher Lys (18.09%), Ala (17.24%), and Phe (16.58%) contents. Alcalase showed noticeably better effectiveness than other enzymes to produce a hydrolysate for the separation of iron-binding peptides derived from WPC.