大米蛋白体外消化产物抗氧化活性的研究

为了研究大米清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白体外消化产物的抗氧化活性,用Osborne法从大米粉中提取大米四种蛋白。采用胃-胰蛋白酶分步酶解,选择DPPH·,ABTS+·,·OH自由基清除能力和Fe2+金属离子螯合能力四个指标对消化产物的抗氧化活性进行综合评价。与市售的大豆肽比较,大米四种蛋白经模拟体外消化后具有良好的抗氧化活性。其中醇溶蛋白的消化产物抗氧化活性最好,DPPH·,ABTS+·,·OH自由基清除能力和Fe2+金属离子螯合能力的半抑制浓度分别为30.88 mg/m L、27.61 mg/m L、5.43mg/m L、0.18 mg/m L。大米四种蛋白酶解产物的Fe2+螯合能力半抑制浓度均小于1 mg/m L,具有良好的Fe2+螯合能力。研究结果表明大米四种蛋白的体外消化酶解物具有不同大小的抗氧化活性,分子量集中在181~1000 Da范围内,是一种易于被人体吸收的抗氧化肽。     

三斑海马蛋白肽ACE抑制活性的研究

本文通过三斑海马酶解液的制备、ACE抑制活性肽的分离和体外消化模型的建立研究了三斑海马蛋白肽的ACE抑制活性。利用碱性蛋白酶制备得到具有ACE抑制活性的三斑海马酶解液,经葡聚糖凝胶层析分离纯化后,得到具有较高ACE抑制活性的组分(其IC50为0.91 mg/m L);通过对该组分的氨基酸组成和体外消化模型分析,发现该组分中疏水性氨基酸的含量为50.48%,消化酶作用后,显著提高ACE抑制活性,经判断,该组分中的蛋白肽为前体型抑制剂。     

酶解与体外模拟胃肠消化对脱脂羊奶粉ACE抑制活性的影响

本研究旨在探究商业蛋白酶酶解与体外模拟胃肠消化对高消化率的脱脂羊奶粉释放ACE抑制肽的影响,以评价脱脂羊奶粉酶解必要性及所需酶解程度。采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶和风味蛋白酶对脱脂后的圭山羊奶粉进行酶解反应,并对脱脂羊奶粉及其酶解物进行体外模拟胃肠消化,测定酶解液及模拟胃肠消化液的多肽含量、ACE抑制活性以及分子量分布。研究发现,羊奶粉经过体外模拟胃肠消化后,消化液的多肽含量与ACE抑制率分别达到20.81 mg/mL和62.55%;而经过碱性蛋白酶和风味蛋白酶的适度酶解,其模拟胃肠消化液多肽含量与ACE抑制活性反而下降;经过复合蛋白酶的适度酶解,其模拟胃肠消化液的多肽含量与ACE抑制活性小幅度提高,分别达到22.67 mg/mL和69.29%;经过中性蛋白酶的适度酶解,其模拟胃肠消化液多肽含量与ACE抑制活性均显著提高,分别达到23.76 mg/mL和81.10%。分子量分布结果显示,经过体外模拟胃肠消化后,<1000 Da的小分子肽由酶解液中的70.77%提高到90%。综上,圭山羊奶粉经过体内胃肠消化就可以释放出较多的ACE抑制肽,而经过中性蛋白酶酶解至水解度8%后...     

鱼鳞明胶ACE抑制肽的制备及其活性研究

利用Alcalase 2.4L酶解鱼鳞明胶制备具有血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性的降血压肽,通过超滤处理富集得到具有较高活性的ACE抑制肽,并对该组分进行分子量分布、氨基酸组成分析及抗消化性研究。结果表明:水解明胶6 h所得水解物的ACE抑制活性最高,其IC50为0.56 mg/mL,水解度为15.54%;超滤膜处理分离后,分子量小于5 kDa的多肽组分Ⅱ的ACE抑制活性最高,其回收率达90%以上;多肽中对ACE抑制活性贡献大的脯氨酸、羟脯氨酸、色氨酸等疏水性氨基酸的保存率高;体外消化实验显示,该抑制肽在胃肠道消化酶作用下能保持较好的ACE抑制活性。     

富硒辣木籽蛋白降压肽的酶法制备、硒含量及稳定性研究

目的:开发富硒辣木籽蛋白资源。方法:以富硒辣木籽蛋白粉为原料,通过单因素和响应面优化得到富硒辣木籽蛋白降压肽的酶解工艺条件,并对最优酶解物的ACE抑制活性、硒含量和稳定性进行分析。结果:富硒辣木籽蛋白的最优酶解工艺为酶解时间3 h,酶解温度34 ℃,pH 8,底物浓度7%,酶底比0.3%。此条件下水解所得降压肽的ACE的半抑制浓度为1.956 mg/mL;该降压肽中硒含量为1.394 mg/kg,是原料蛋白的1.1倍;并且该降压肽(5 mg/mL)具有良好的热稳定性和酸碱稳定性,在体外经胃肠道酶系消化酶解后,依然能保持良好的ACE抑制活性。结论:富硒辣木籽蛋白降压肽具有较强的ACE抑制活性和良好的稳定性。     

三斑海马蛋白ACE抑制肽的制备及其二级结构的研究

以三斑海马为原料,经碱性蛋白酶酶解,获得富含血管紧张素转化酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)抑制肽的酶解液。酶解液经透析、Sephadex G-25凝胶过滤色谱和反相高效液相色谱得到进一步分离纯化。结果表明,透析产物的IC50值为(0.44±0.26)mg/mL,相比酶解液(0.81±0.12)mg/mL,其ACE抑制活性更强。透析产物经Sephadex G-25凝胶柱分离纯化后,得到3种组分,其中组分F2的ACE抑制活性最强,IC50值为(0.11±0.08)mg/mL。F2经反相高效液相色谱进一步分离后,得到6个具有ACE抑制活性的组分峰,其中组分F2-4的ACE抑制活性最强,IC50值为(0.005 7±0.000 9)mg/mL。经过3步分离纯化后,成功从三斑海马蛋白中分离得到一种活性较强ACE抑制肽:ProAla-Gly-Pro-Arg-Gly-Pro-Ala(PAGPRGPA),多肽分子量为721.39 Da。圆二色谱分析多肽二级结构表明其主要含无规则卷曲。因此,从三斑海马蛋白中分离得到的多肽可能成为营养保健品和抗高血压药品及相关疾病的一种有益成分,且对海马蛋白资源的开发利用具有重要意义。     

条斑紫菜蛋白酶解物降血压活性

研究了以条斑紫菜为原料,采用木瓜蛋白酶制备紫菜蛋白活性寡肽,以ACE抑制率为评价指标,研究不同水解条件下酶解液的降血压活性,优化酶解工艺条件并测定酶解物的分子量。优化后的木瓜蛋白酶酶解工艺条件为pH7.5,温度50℃,底物浓度30 mg/mL,酶添加量600 U/g,在此条件下,水解4 h的酶解产物抑制活性达30%以上,ACE抑制肽的半抑制浓度IC50值为4.48 mg/mL。将制备的酶解液进行层析分析,测得具有降血压活性的紫菜蛋白酶解产物是相对分子质量小于2 000的活性肽。     

超声、微波联合预处理大米蛋白制备ACE抑制肽工艺优化

采用碱性蛋白酶酶解经过超声、微波预处理后的大米蛋白,以提高酶解产物大米肽的血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性。结果表明,超声波功率、作用时间、微波加热温度和搅拌速度对ACE活性都有一定影响,主次因素为超声波功率、搅拌速度、作用时间、微波加热温度,最优参数为超声波功率500W、搅拌速度500r/min、作用时间20min、微波加热温度55℃。在该最优条件下,大米肽粗品的ACE抑制率可从65.44%提高到90.70%,此时大米肽粗品的半抑制浓度为0.226mg/mL。     

米糠蛋白源ACE抑制肽的酶解制备及活性研究

目的：开发米糠新产品。方法：以ACE抑制率为指标,通过单因素和响应面试验对米糠蛋白进行酶解工艺优化研究,并对最优酶解物活性肽进行超滤分离、活性评价和氨基酸组成分析。结果：米糠蛋白最优酶解工艺条件为：pH 7.2,底物质量浓度8.2 g/100 mL,酶解温度46 ℃,酶解时间3 h,酶添加量0.3 g/100 g米糠蛋白,在此条件下所得酶解物ACE抑制率为(73.15±0.64)%,而且酶解物含有丰富的疏水性氨基酸(23.09 g/100 g);活性分析表明,分子量＜3 kDa活性肽组分在同质量浓度(1.0 mg/mL)下ACE抑制活性[(81.68±1.08)%]优于分子量＞3 kDa活性肽组分[(58.65±2.21)%]和酶解物[(72.64±1.61)%]。结论：米糠蛋白酶解物具有显著的ACE抑制活性,活性肽组分的分子量对ACE抑制活性具有显著影响。     

大米蛋白肽的制备与ACE抑制活性分析

通过优化大米蛋白的单酶酶解与双酶酶解工艺,确定了采用碱性蛋白酶加蛋白酶B复合酶解制备大米蛋白肽的工艺。蛋白回收率高达43.9%,制备的大米蛋白肽感官评价高、苦味低、分子质量小。对比市售的大豆蛋白肽、鱼胶原蛋白肽,3种蛋白肽的水分含量、蛋白质含量、脂肪含量基本接近。大米蛋白肽与大豆蛋白肽中分子质量<2000 Da的总比例均>80%,而鱼胶原蛋白肽中总比例仅有58.01%。这3种蛋白肽均有血管紧张素转换酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)抑制活性,其中大米蛋白肽的活性最高,IC 50最低,为4.97μg/mL,仅为大豆蛋白肽IC 50的21.6%,为鱼胶原蛋白肽IC 50的14.1%。通过结构分析获得的4条大米蛋白肽段序列均符合现有研究的ACE抑制活性的构效分析。测定不同批次生产的大米蛋白肽的ACE抑制活性,结果表明,ACE抑制率与IC 50值基本保持稳定。     

苦荞蛋白质的低消化性研究Ⅰ——热处理、还原二硫键及添加芦丁对其体外消化率的影响

采用Osborne分级分离的方法从苦荞粉中制备得到清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白。体外消化率测定结果表明,四种蛋白组分的消化率均低于对照-小麦胚分离蛋白和大豆分离蛋白,并且四种组分的体外消化率也存在不同程度的差别:清蛋白最高,谷蛋白最低。热处理可以明显提高苦荞粉四种蛋白组分的体外消化率。添加芦丁不但没有降低四种蛋白组分的体外消化率,反而均有一定程度的提高。二硫键的破坏,除醇溶蛋白得以提高之外,对于其它三种组分只是提高了初始水解速度,最终体外消化率没有明显提高。体外消化实验后,四种蛋白组分所剩的残渣蛋白SDS-PAGE分析结果表明:这些残渣蛋白的谱带存在相似之处:在20kDa处有一条很窄的谱带,在14～10kDa处的谱带较宽。     

IN VITRO DIGESTIBILITY OF CHINESE TARTARY BUCKWHEAT PROTEIN FRACTIONS: THE MICROSTRUCTURE AND MOLECULAR WEIGHT DISTRIBUTION OF THEIR HYDROLYSATES

Our previous study showed that in vitro pepsin digestibility of Chinese tartary buckwheat protein was relatively low compared to those of other edible seeds. In vitro pepsin digestibilities of four protein fractions of tartary buckwheat, microstructure and molecular weight (MW) distributions of hydrolysates were investigated. In vitro pepsin digestion assay showed that the digestibilities of tartary buckwheat protein fractions were albumin (81.20%), globulin (79.56%), prolamin (66.99%) and glutelin (58.09%). Scanning electron microscopy showed that albumin and globulin fractions were digested by pitting from the outer surface to the inner part and were more digestible, while prolamin and glutelin fractions resisted digestion because only the outer surfaces of their protein bodies were digested and the interior was protected. MW distribution of the hydrolysates from the four protein fractions was determined by high‐performance liquid chromatography. The hydrolysates of albumin mainly consisted of polypeptides with lower MW. The hydrolysates of glutelin had larger polypeptides together with small and medium‐sized peptide fractions.     

Effect of heat,rutin and disulfide bond reduction on in vitro pepsin digestibility of Chinese tartary buckwheat protein fractions

Protein fractions (albumin, globulin, prolamin and glutelin) were extracted from defatted tartary buckwheat flour. The in vitro pepsin digestibilities of the four protein fractions were different, and albumin was more susceptible to pepsin hydrolysis. The native structure of the four protein fractions may be destroyed by heat treatment, and the digestibilities were all improved significantly (P < 0.05). Adding rutin to the digestion mixture of the four fractions did not cause a decrease in pepsin digestibility, although it did cause a significant increase in certain instances (P < 0.05). Treatment with β-mercaptoethanol (2-ME) only caused a higher initial proteolysis rate and did not increase the final digestibility distinctly except for prolamin. After pepsin digestion, the remaining proteins of unhydrolyzed albumin, globulin, prolamin and glutelin (untreated) shared some similarities. They also exhibited a minor band at 20,000 Da and a broad band at 10,000–14,000 Da.     

米糠酸败对米糠蛋白体外胃蛋白酶消化产物结构特征的影响

将新鲜米糠贮藏不同时间后进行稳定化和脱脂制备米糠蛋白,研究米糠酸败对米糠蛋白体外胃蛋白酶消化产物结构特征的影响。结果表明：随着米糠酸败程度增加,米糠清蛋白亚基、谷蛋白酸性亚基和球蛋白亚基完全被胃蛋白酶消化降解的时间先提前后延迟,而米糠谷蛋白碱性亚基和醇溶蛋白亚基表现为更难被胃蛋白酶消化;分子质量分布和粒径分布结果表明,米糠酸败过程中形成的米糠蛋白氧化聚集体会抑制米糠蛋白体外胃蛋白酶消化;此外,随着米糠酸败程度的增加,米糠蛋白体外胃蛋白酶消化产物内源荧光峰位的红移幅度先增大后减小,表面疏水性则逐渐下降。总之,米糠酸败导致的米糠蛋白氧化对米糠蛋白消化产物的共价交联状态、聚集行为和表面疏水性等结构特征产生了重要影响。     

体外模拟消化对大米谷蛋白结构及水解产物生物活性的影响

通过体外模拟消化,研究不同消化时间下谷蛋白结构与抗氧化和血管紧张素转换酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）抑制活性的关系。利用内源荧光光谱和傅里叶变换红光谱测定谷蛋白水解过程结构变化。通过测定水解产物抗氧化能力和ACE抑制率表征酶解产物的活性,利用四极杆串联飞行时间质谱鉴定具有抗氧化和ACE抑制活性的组分。结果表明,谷蛋白水解度在2 h内快速增加,随后趋于平缓。水解导致谷蛋白λmax红移且荧光强度增强,α-螺旋含量显著增加、β-折叠相对含量显著降低（P＜0.05）。α-螺旋结构含量的增加降低了水解物的抗氧化能力,谷蛋白β-折叠结构含量的减少能增强水解物的ACE抑制能力。水解0.5 h抗氧化能力最强,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率的半抑制浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）为（1.113±0.015）mg/mL,·OH清除率IC50为（0.518±0.053）mg/mL、Fe2＋螯合能力IC50为（0.678±0.019）mg/mL。ACE抑制率先增加后降低,在2 h达到最高,IC50为（0.693±0.011）mg/mL。水解度的增加降低了水解物抗氧化能力,但增强了ACE抑制能力。水解物在0.5～2 h抗氧化能力和ACE抑制能力呈现负相关关系,随后抗氧化能力和ACE抑制能力均下降。水解物抗氧化肽和ACE抑制肽分子质量均小于2 kDa,筛选出以VEGGFLFIV为代表抗氧化活性多肽,且ACE抑制肽大部分N-端是疏水性氨基酸或者碱性氨基酸。因此,通过控制谷蛋白体外消化水解度,可制备最优的大米谷蛋白抗氧化或降血压相关功能性产品。     

大米镉结合蛋白的分离纯化及纯度鉴定

采用石墨炉原子吸收光谱法（graphite furnace atomic absorption spectrometry,GFAAS）测定不同品种、不同加工精度大米及大米4 种蛋白质中的镉含量。选用镉含量较高的大米为实验原料,采用Osborne分级法提取大米中的4 种蛋白质（清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白）,以及超滤、离子交换色谱从镉含量较高的大米蛋白中分离纯化出均一纯度的大米镉结合蛋白（rice Cd-binding protein,RCBP）,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）鉴定RCBP的纯度及测定分子质量。结果表明：籼米中镉含量高于糯米及粳米;随着加工精度的增加,同种大米中的镉含量依次降低。4 种大米蛋白中的镉含量分别为0.66、0.31、0.63、0.23 μg/g,清蛋白中镉含量最高。超滤分离大米清蛋白（rice albumin,RA）得到大米超滤清蛋白（rice ultrafiltration albumin,RUA）,离子交换色谱纯化RUA得到目标镉结合蛋白（组分c）,SDS-PAGE鉴定组分c为单一条带,分子质量为14 kD。     

热变性大米蛋白的结构和性质研究Ⅰ米蛋白加热前后的溶解特性和氨基酸变化

为探讨热变性米蛋白的性质与结构关系,分析了大米蛋白加热前后的溶解性能和氨基酸组成变化。结果表明,米渣中各种蛋白质的含量大大低于未受高温处理的原料大米;米渣蛋白中胱氨酸含量比大米谷蛋白提高83%,说明大米醇溶蛋白、球蛋白和清蛋白等受热后也存在于米渣中;米渣谷蛋白胱氨酸含量比米渣蛋白降低23%,说明胱氨酸是影响米渣蛋白溶解的重要因素。     

Selenium accumulation in protein fractions during germination of Se-enriched brown rice and molecular weights distribution of Se-containing proteins

This study investigated the accumulation of selenium (Se) in protein fractions of albumin, globulin, prolamin and glutelin extracted from Se-enriched brown rice and the molecular weight distribution of Se-containing proteins. Results showed that the amount of total Se (T-Se) and protein-bound Se (PB-Se) in brown rice was significantly (P < 0.05) increased after germination with 10–60 μmol/l sodium selenite. Except prolamin, the amount of all the other three protein fractions decreased significantly (P < 0.05) with the increase of germination time. Low Se concentrations had promoting effects on degradation of albumin and globulin, while no significant effects were observed on prolamin and glutelin. The accumulation of T-Se and PB-Se were in the order of albumin > glutelin > globulin > prolamin. Sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS–PAGE) analysis showed that Se was distributed in all the proteins of which molecular weights varied from 13.6 to 121.4 kDa; however, 84.34% of Se was observed in the proteins whose molecular weights less than 36.3 kDa.     

苦荞麸皮蛋白的提取分离及清除自由基作用研究

以苦荞二道荞麸为原料,进行复合蛋白提取和蛋白质Osborne分级分离,并对各蛋白组分进行清除自由基能力研究。结果表明,苦荞麸皮中最主要的蛋白组分为清蛋白,占蛋白总量的51.22%;其次为球蛋白和谷蛋白,分别占13.69%和17.07%;最少的为醇溶蛋白,占8.83%。苦荞麸皮复合蛋白及各蛋白组分均有体外清除自由基作用,其中水溶性清蛋白和球蛋白清除自由基能力高于醇溶蛋白和碱溶蛋白,且在低浓度范围内,随蛋白质浓度增加,清除能力呈线性提高,但在高浓度时却无明显量效关系。     

萝卜籽粕蛋白质的组成及功能性质

以萝卜籽粕为原料,提取了其中的蛋白质;根据溶解性,萝卜籽粕蛋白中的清、球、谷、醇溶蛋白被分 离;用氨基酸自动分析仪测定了萝卜籽粕蛋白的氨基酸组成;物理化学方法测定萝卜籽粕蛋白的功能性质以及体外 清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基、?OH、NO2 －、H2O2的能力。结果表明：萝卜籽粕蛋白中球、谷、清和醇溶蛋 白含量分别占总蛋白质的44%、33%、21%和2%;萝卜籽粕蛋白含18 种氨基酸,第一限制氨基酸为蛋氨酸,其氨基 酸评分为57。萝卜籽粕蛋白具有很好的功能性质及抗氧化能力,表明有很高的开发价值。