液质联用鉴定亮叶杨桐叶中的类黄酮化合物

采用高效液相色谱（HPLC），光电二极管阵列检测器（PDA），电喷雾质谱（ESI—MS）联用，从亮叶杨桐叶的甲醇提取物中鉴定出三种类黄酮化合物：山茶苷A、山茶苷B、芹菜素。实验表明应用HPLC—PDA—ESI／MS技术可以快速有效地鉴定植物类黄酮化合物。     

HPLC测定半枝莲中野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素的含量

建立半枝莲药材中野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素含量同时测定的HPLC方法。色谱条件为DiamonsilC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱分离,检测波长为335 nm,流动相为乙腈(A)-1%冰醋酸水溶液(B)进行梯度洗脱,流速为1.0 m L/min,柱温为30℃。野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素浓度分别在2.0~200、0.5~50、0.5~50、0.5~50μg/m L范围内与峰面积积分值线性关系良好。在精密度实验、稳定性实验、重复性实验中,野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素峰面积的相对标准偏差(RSD)2.0%;野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素的加样回收率范围及平均值和RSD分别为97.73%~101.7%、99.72%、1.36%(n=9),97.78%~102.8%、99.53%、1.99%(n=9),97.40%~102.4%、99.39%、1.84%(n=9)和97.80%~102.0%、99.24%、1.49%(n=9)。所测12份不同产地半枝莲药材中,野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素的含量范围分别为2.41~7.08、0.26~0.56、0.31~0.90、0.28~0.95 mg/g。本方法具有良好的专属性和重现性,加样回收率实验符合要求,能准确、稳定地对半枝莲药材中野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素含量进行同时定量测定。     

一测多评法测定食用玫瑰中5种非挥发性成分的含量

目的:建立以芦丁为内参物,利用HPLC一测多评法同时测定食用玫瑰中绿原酸、金丝桃苷、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素的含量,并进行方法学考察。方法:以食用玫瑰为研究对象,以芦丁为内参物,确定其他四种成分相对芦丁的校正因子(RCF),通过计算样品中绿原酸、金丝桃苷、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素含量;同时采用外标法测定食用玫瑰中5种成分,比较一测多评法(计算法)与外标法(实测法)结果的差异,并对方法性耐用性进行考察。结果:5种成分在相应的线性范围内线性关系良好,线性相关系数R2>0.999,平均加标回收率在98.08%~99.51%,RSD在0.91%~1.87%,芦丁与绿原酸、金丝桃苷、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素的相对校正因子分别为1.910、0.728、0.698、0.382,且在不同试验条件下重现性良好(RSD<2.0%);6批食用玫瑰样品中5种成分按一测多评方法与外标法测定结果基本一致(RSD<1.0%)。结论:本文建立的一测多评方法操作简单,测定结果准确,能较大程度节约多成分含量测定成本,可作为一种新模式用于食用玫瑰中多成分定量,也可为全面监控食用玫瑰质量提供参考。     

葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱层析分离纯化蓝莓花色苷的研究

本论文初步探讨了采用Sephadex LH-20凝胶柱层析分离纯化蓝莓花色苷的工艺条件,比较了花色苷在不同缓冲液浓度、不同流速和不同上样量条件下的分离效果,并将最佳分离条件下得到的组分进行紫外可见波长扫描,对其中的花色苷组分进行HPLC检测。结果表明,当以30%的酸化甲醇为洗脱液,采用混合流速进行洗脱,进样量为20 mg时,蓝莓花色苷的分离效果最好,共收集到七个峰组分。经紫外-可见光谱扫描,可确定组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ为非花色苷类物质;组分Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ为花色苷类物质。由HPLC检测可知:组分Ⅳ中只含一种蓝莓花色苷;组分Ⅵ、Ⅶ均以一种花色苷为主,且其峰面积比例达到85%以上;组分Ⅴ中主要含两种花色苷。     

北京市售30种蔬菜中类黄酮物质含量分析

目的测定北京地区30种蔬菜中5种类黄酮物质的含量。方法采用高效液相色谱法检测槲皮素、山奈酚、杨梅黄酮、木犀草素、芹菜配基类黄酮物质的含量,蔬菜样品均购自北京当地菜市场。结果30种蔬菜中全部检出了槲皮素,含量在2.1～85.9mg/kg鲜重,9种蔬菜检出杨梅黄酮,8种蔬菜检出芹菜配基,8种蔬菜检出木犀草素,仅在胡萝卜和西红柿中检出山奈酚。紫洋葱、白洋葱、胡萝卜、甜椒和苦瓜等蔬菜类黄酮含量较高。结论不同蔬菜类黄酮物质的组成和含量差别较大,槲皮素为蔬菜中主要的类黄酮物质。     

基于一测多评法对小儿解感颗粒中5个成分的质量控制

目的建立基于一测多评法(QAMS)测定小儿解感颗粒中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草苷5个成分的含量的方法。方法采用高效液相色谱(HPLC),色谱柱为Waters SunFire C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B),梯度洗脱;流速1.0 ml/min;柱温30℃;检测波长274 nm。以黄芩苷为内参物,建立汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草苷与内参物黄芩苷的相对校正因子(f),通过f计算小儿解感颗粒中5个成分的含量,并进行验证,将该方法与外标法的测定结果进行对比分析,以验证QAMS方法的准确性、重复性及可行性。结果黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草苷质量浓度分别在0.102~407.492μg/ml、0.067~84.147μg/ml、0.154~60.197μg/ml、0.054~50.634μg/ml、0.272~237.796μg/ml范围内线性关系良好;加样回收率分别为99.16%,100.54%,98.02%,97.84%,98.78%;以黄芩苷为内参物,测得的汉黄芩苷、甘草苷、黄芩素、汉黄芩素f值分别为0.823,0.674,0.549,1.873,且建立的QAMS法结果与外标法的结果一致。结论本实验建立的QAMS法可作为一种简便快捷的质量评价模式,用于小儿解感颗粒中5种成分的质量控制。     

芹菜素的制备、鉴定与纯化的研究

芹菜素具有抗肿瘤、降血压等多种生理活性功能,在功能性食品和医药领域极具应用前景,但由于传统的芹菜素生产是以洋苷菊和旱芹为原料,其芹菜素的含量很低,这就导致芹菜素的生产得率低,生产成本高,限制了其广泛应用。亮叶杨桐是我国特有的植物,其叶富含以芹菜素为苷元的类黄酮物质,本文研究了以亮叶杨桐叶为原料制备芹菜素的方法。通过向亮叶杨桐叶的水提液中加入一定量的硫酸,加热酸解,可获得大量沉淀物,其主要的成分经紫外、红外、电喷雾质谱及核磁分析,鉴定为芹菜素,液相分析表明该粗品中芹菜素含量为64.80%。通过测定该粗品中芹菜素在不同温度,不同浓度的乙醇中溶解能力的分析,本研究确定采用恒温浓度梯度法精制芹菜素,获得的芹菜素纯度为92.44%。     

超高效液相色谱-质谱联用技术解析黑果枸杞超临界CO_2萃取物中黄酮类天然产物结构

以青海柴达木黑枸杞为研究材料,对其超临界CO2萃取物,采用超高效液相色谱-质谱联用技术和PeakView色谱工作站拟合进行分析,并通过二级质谱解析和紫外光谱及质谱数据比对,阐明其中的黄酮组分及其结构。共鉴定出黑果枸杞果的超临界CO2萃取物中含有13种黄酮类化合物(7种黄酮醇苷元及黄酮醇苷,3种二氢黄酮醇苷元,2种黄酮苷元和1种二氢黄酮苷元),包括芦丁、槲皮素-3-β-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷即槲皮素-3-O-吡喃半乳糖苷、二氢槲皮素、二氢异鼠李素、二氢山柰酚、槲皮素、芹菜素、橙皮素、苜蓿素、山柰酚、异鼠李素和山柰素,其中橙皮素和苜蓿素在黑果枸杞成分研究中未被发现过。     

高效液相色谱-串联质谱法测定各生长期紫苏中酚类物质的含量

目的：建立一种简单、快速、准确的高效液相色谱-串联质谱法,同时分离与检测紫苏叶、茎和根中酚类化合物含量,探讨紫苏各部位酚类物质的累积规律,为确定紫苏各部位最佳采收时期提供依据。方法：对紫苏进行人工栽培,样品分期采集,采集后的样品经乙醇提取,采用高效液相色谱-串联质谱法进行分析,对影响色谱、质谱的重要参数进行优化,通过对照标准物质的保留时间及质谱分析,确定相应的化合物;通过标准曲线法定量,以其中13 种酚类化合物为主要参考指标,观察它们在各部位的动态含量变化。结果：鉴定出化合物：咖啡酸、咖啡酸-3-O-葡萄糖苷、迷迭香酸、迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷、木犀草素、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷酸、木犀草素-7-O-二葡萄糖苷酸、芹菜素、芹菜素-7-咖啡酰基葡萄糖苷、芹菜素-7-O-二葡萄糖苷、野黄岑素-7-O-二葡萄糖苷、迷迭香酸甲酯,以上化合物中酚酸及其糖苷化合物含量呈先降低,至结果期急剧上升达到最大,黄酮及其糖苷化合物含量则递增至结果期达到最大。其中鉴定出迷迭香酸和木犀草素-7-O-葡萄糖苷酸分别在结果期达到最大,含量分别为21.41 mg/g和19.89 mg/g,结果期叶部位总酚类含量达到最大,含量为47.50 mg/g。结论：通过对紫苏各个部位不同采收时期黄酮、黄酮糖基化、酚酸的动态变化、总含量变化和部位成分分布的研究,对紫苏酚类资源的利用提供参考依据。     

液相色谱-串联质谱定量分析不同花色菊花中黄酮和有机酸的含量

目的：采用液相色谱-串联质谱对不同花色的菊花中绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草素、芹菜素、蒙花苷、芹菜素-7-葡萄糖苷和木犀草苷7种主要成分进行定量分析。方法：采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱，以0.3%甲酸水溶液(A)-0.3%甲酸乙腈溶液(B)为流动相进行梯度洗脱，流速0.3 mL/min，进样量3μL。质谱采用电喷雾离子源，多反应监测方式进行检测。结果：8个菊花品种中蒙花苷和芹菜素-7-葡萄糖苷含量最高。其中，黄花品种‘18-C-16’中蒙花苷含量最高。紫花品种‘19-G-35’、白花品种‘17-Y-1’和黄花品种‘18-C-3’中芹菜素和芹菜素-7-葡萄糖苷的积累量较高。紫花品种‘18-G-38’和黄花品种‘18-C-16’中木犀草素含量较高。绿原酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸这2种有机酸主要分布在紫花品种‘19-G-35’和黄花品种‘18-C-16’中。结论：黄、白色菊花更适合选作茶、药菊品种，其次为紫色菊花，而红色菊花品种更适合用作观赏。该研究为茶用及药用菊花的质量评价提供了新的视角，对今后的药食品种选育具有重要意义。     

杜仲叶抗α-葡萄糖苷酶成分的研究

通过正交试验优化了杜仲叶中抗α-葡萄糖苷酶成分的提取条件,并利用葡聚糖凝胶对杜仲叶水提液进行纯化分离,分析了杜仲叶水提物纯化液的黄酮含量。研究结果表明,杜仲叶的提取条件为提取料液比为1∶10,提取温度为90℃,提取时间为40min。杜仲叶水提物纯化液具有明显的抗α-葡萄糖苷酶效果,且杜仲叶中总黄酮含量为3.31%,纯化液中黄酮的含量为18.12%,杜仲总黄酮粗品得率为7.32%。     

顶青霉木聚糖酶的水解动力学与水解模式

从顶青霉（Penicillium corylophilum）培养液中分离纯化得到的3种木聚糖酶组分(Part A,Part B和Part C),对其水解动力学和水解模式的研究结果表明,3种木聚糖酶的动力学常数（桦木木聚糖为底物）分别为Part A,K     

荞麦麸皮提取物对α- 葡萄糖苷酶活性的影响

本实验分别用乙醇和水从荞麦麸皮中提取到了以荞麦黄酮为主要成分的乙醇粗提物和以荞麦糖醇为主要成分的水粗提物,并将乙醇粗提物经高压水解,获得乙醇粗提物的水解物。研究这3 种提取物对α- 葡萄糖苷酶活性的影响,并以阿卡波糖和D- 手性肌醇为参照。比色法和液相色谱法测得,苦荞麸皮乙醇粗提物的主要成分为苦荞黄酮,黄酮含量为74.0%,其中86.5% 为芦丁,槲皮素和异槲皮素微量;乙醇粗提物经高压水解后,总黄酮含量为76.2%,其中,芦丁、槲皮素和异槲皮素分别占60.6%、25.2%、13.5%。甜荞麸皮水粗提物的主要成分为D- 手性肌醇、肌醇,其含量分别为43.6%、2.9%。3 种荞麦麸皮提取物均具有抑制α- 葡萄糖苷酶的活性,作用强度分别为：乙醇粗提物的水解物＞乙醇粗提物＞水粗提物, IC50 分别为0.0085、0.0578、17.3551g/L。苦荞黄酮经高压水解后,抑制α- 葡萄糖苷酶活性显著提高,与阿卡波糖IC50(0.0335g/L)相比,约是它的1/4;水粗提物在低质量浓度下抑制效果不明显,在较高的质量浓度下则表现出抑制活性。     

Extraction and determination of ellagic acid contentin chestnut bark and fruit

Chestnuts are an important economic resource in the chestnut growing regions, not only for the fruit, but also for the wood. The content of ellagic acid (EA), a naturally occurring inhibitor of carcinogenesis, was determined in chestnut fruits and bark. EA was extracted with methanol and free ellagic acid was determined by HPLC with UV detection, both in the crude extract and after hydrolysis. The concentration of EA was generally increased after hydrolysis due to the presence of ellagitannins in the crude extract. The concentration varied between 0.71 and 21.6 mg g⁻¹ (d.w.) in un-hydrolyzed samples, and between 2.83 and 18.4 mg g⁻¹ (d.w.) in hydrolyzed samples. In chestnut fruits, traces of EA were present in the seed, with higher concentrations in the pellicle and pericarp. However, all fruit tissues had lower concentrations of EA than had the bark. The concentration of EA in the hydrolyzed samples showed a non-linear correlation with the concentration in the unhydrolyzed extracts.     

纤维素酶-超声联合提取菠菜中总黄酮及其成分分析

本研究采用纤维素酶联合超声提取法提取菠菜中总黄酮,通过单因素实验考察了甲醇浓度、酶添加量、料液比、提取温度、酶解pH和提取时间对总黄酮得率影响,并通过正交试验对总黄酮的提取条件进行了优化。利用高效液相色谱法对纯化后的菠菜总黄酮成分进行分析。结果表明,菠菜总黄酮提取的最适条件为:用70%的甲醇溶液作为提取剂,酶添加量1.2%、料液比1:30 g/mL,在提取温度60℃、酶解pH5.0、提取时间45 min的提取条件下提取得到菠菜总黄酮得率为15.56%。利用高效液相色谱同时分离7种黄酮类化合物成分:没食子酸、绿原酸、儿茶素、芦丁、芹菜素、山奈酚、槲皮素,测出含量分别为:0.83、1.37、0.64、1.46、2.12、1.25、1.87 mg/g。经方法学验证,各种黄酮类化合物单体的线性关系良好,加样回收率准确度较高,相对标准偏差良好,可用于菠菜黄酮的定性定量检测。     

白背三七总黄酮的超声提取工艺及α- 葡萄糖苷酶抑制活性

在单因素试验基础上,对乙醇体积分数、料液比和提取次数3因素进行Box-Behnken设计及响应面分析,优化白背三七黄酮超声提取条件,将白背三七粗提物进行分级萃取,并对不同级分萃取物的黄酮含量及α-葡萄糖苷酶抑制活性进行了考察。结果表明超声辅助提取白背三七中黄酮化合物的优化工艺参数为乙醇体积分数55%、料液比1:35(g/mL)、提取次数4次,在此条件下总黄酮得率为3.071%(30.71mg/g),与预测值(3.095%)基本相符;经高效液相色谱分析,粗提物中主要化合物均具有黄酮特征吸收。分级萃取物中以乙酸乙酯相中黄酮含量及α-葡萄糖苷酶抑制活性最高。     

刺参水煮液糖蛋白组成成分分析

目的：刺参水煮液是刺参加工过程中的副产物,通过对刺参水煮液营养成分的分析有助于将这种海产珍品加工废弃物转化为高附加值产品。方法：刺参水煮液经醇沉、透析、冻干,得到刺参水煮液糖蛋白（glycoproteinin sea cucumber boiling water,GSCB）粗制品;采用液相色谱和SepharoseCL-6B凝胶层析柱确定其糖蛋白组成成分及分子质量;采用液相色谱-质谱对1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone,PMP）衍生化的GSCB单糖组成进行分析;采用液相色谱法对其氨基酸组成进行分析。结果：GSCB主要含有2 种糖蛋白,分子质量分别为964.3 kD和2.5 kD。GSCB含有氨基葡萄糖、甘露糖、氨基半乳糖、葡萄糖、半乳糖、岩藻糖6 种单糖;含有18 种氨基酸,其中含有8 种人体必需氨基酸,占氨基酸总量的38.38%。此外,半必需氨基酸组氨酸的含量在18 种氨基酸中占比最高,占比达到13.21%。结论：GSCB中含有酸性黏多糖物质,并含有多种必需氨基酸和半必需氨基酸,是一种良好的营养糖蛋白物质。对其深入开发将有利于变废为宝,开发出活性良好的功能保健食品。     

HPLC测定红凤菜提取物的总黄酮含量及对提取方法的评价

为了解从红凤菜新鲜茎叶中所得提取物的有效成分含量以及提取方法的分离效果,在提取过程的不同阶段取样得到6 个不同提取物,测定其总黄酮含量。首先对提取物进行酸解,再用高效液相色谱法测定槲皮素和山柰酚的含量,根据所测样品中黄酮类成分的组分折算为总黄酮含量。结果显示,经过大孔树脂和聚酰胺2 次柱层析后,所得提取物的总黄酮质量分数达到84.8%,重结晶得到的2 个结晶物总黄酮质量分数分别为97.1%和99.7%。可见,采用乙醇提取-大孔树脂柱层析-聚酰胺柱层析-重结晶的方法可有效地从红凤菜新鲜茎叶中提取纯化总黄酮。     

高效液相色谱法分析北方部分地区蜂胶醇提物成分

研究北方部分地区的蜂胶提取物中组分含量的差异并对成分分析。采用乙醇水溶液对中国北方11个省市的蜂胶进行提取,以NaNO2-Al(NO3)3比色法和Folin-Ciocalteu试剂比色法分别测定蜂胶不同提取物的总黄酮和总酚酸含量;并且借助标准品以高效液相色谱法对不同提取物中的酚类化合物进行初步定性和定量,进而模拟蜂胶的区域性。结果表明：不同地区的蜂胶含有的总黄酮和总酚酸不同,其中咖啡酸、坎非醇、松属素、柯因、高良姜素、苯甲酰肉桂酯以河南蜂胶含量最高;芹菜素、异鼠李素以辽宁蜂胶含量最多;山东蜂胶含有最多的鼠李素。     

酶解结合超声波辅助技术提取纯化菊米总黄酮

采用纤维素酶酶解结合超声波辅助提取,通过大孔树脂分离、纯化菊米中的黄酮类化合物,并通过单因素试验和正交试验进行工艺优化。结果表明：纤维素酶最佳酶解条件为料液比1:10(g/mL)、酶用量1.5%、酶解温度40℃、pH6.0、酶解时间6h;超声波辅助最佳提取条件为乙醇体积分数70%、提取时间0.5h。以自然流速过大孔树脂D-101 柱,经水洗除杂、60% 乙醇溶液洗脱,获得菊米提取物得率达7%,黄酮类物质含量50% 以上。