嗜碱性芽孢杆菌产高碱碱性蛋白酶发酵培养基及发酵条件的研究

碱性蛋白酶是指在碱性条件下水解蛋白质肽键的酶类。本实验对一株高产高碱碱性蛋白酶的嗜碱性芽孢杆菌的发酵培养基及发酵工艺进行了优化。确定了发酵培养基所采用的棉籽饼粉最适粒度为80目，麦芽糊精的最佳DE值为30％。并确定了该菌株的最适发酵培养基配方为(g／100ml)：棉籽饼粉3、酵母浸粉1．758、麦芽湖精10、柠檬酸钠0．3、CaCl20．3、K2HPO41；最适摇瓶发酵条件为：     

圆弧青霉PG37碱性脂肪酶的发酵工艺条件

研究了圆弧青霉PG3 7碱性脂肪酶的发酵工艺条件 ,优化了PG3 7的摇瓶最适产酶条件 .其中 ,发酵培养基的组成为 (g/dL) :豆饼粉 3 .0 ,玉米浆 3 .0 ,磷酸氢二钾 1 .0 ,硫酸镁 0 .1 ,大豆磷脂0 .5,柠檬酸钠 0 .0 5,花生油 0 .2 ;发酵培养基起始 pH 7.5,发酵温度 (2 9± 1 )℃ ,摇床转速 2 50r/min ,发酵周期 96h ,发酵期间于 3 6,54,72h分别流加 0 .4 g/dL花生油 .在此条件下 ,PG3 7的脂肪酶产率为 2 0 60 μmol/ (min·mL) .PG3 7在 2 5L的实验室小罐中的产酶水平为 1 90 0 μmol/ (min·mL) .     

圆弧青霉产碱性脂肪酶的中试发酵

圆弧青霉PG3 7是碱性脂肪酶的高产菌 ,在摇瓶和 2 5L发酵罐小试的基础上进行 3M3发酵罐中试 .适合的发酵条件为 :发酵培养基 (% )　豆饼粉 3 .0 ,玉米浆 3 .0 ,磷酸氢二钾 1 .0 ,硫酸镁0 .1 ,大豆磷脂 0 .5,柠檬酸钠 0 .0 5,花生油 0 .2 ;发酵起始 pH值为 8.0 ,发酵温度 2 9± 1℃ ,接种量8%～ 1 0 % ,通风量 0 .8L/ (L·min) ,搅拌转速 2 4 0r/min ,发酵周期 72h ,期间于 3 0、4 2、54h分别各流加 0 .4 %花生油 .在上述条件下 ,圆弧青霉PG3 7发酵酶活达 2 0 0 0 μmol/ (min·mL)     

地衣芽孢杆菌2709高去酰胺活性碱性蛋白酶发酵条件及酶学性质的研究

就地衣芽孢杆菌2709发酵生产高去酰胺活性碱性蛋白酶的发酵条件进行了研究,以酶液对大豆蛋白的去酰胺度和肽键水解度为指标,对产酶条件进行优化,并研究了该酶的基本酶学特性;确定了培养基的最佳碳源为玉米粉.最佳氮源为黄豆饼粉,C/N在1:2～1:1范围时去酰胺度最高;最适摇瓶发酵条件为:种龄18h,接种量2%,装液量30mL/100mL,摇床转速140r/min,pH 7.0,35℃,发酵50h;碱性蛋白酶最适作用pH为10.0,最适反应温度为50℃,60℃保温2h后仅存5.9%的活力,在pH8～11之间有较高的pH稳定性.     

枯草芽孢杆菌发酵产碱性蛋白酶的研究

对枯草芽孢杆菌发酵产碱性蛋白酶的培养基成分及培养条件进行优化。在单因素试验的基础上通过正交试验确定发酵培养基各成分最适宜配比。采用此优化培养基对发酵菌株的培养条件进行单因素试验。结果表明最佳的发酵培养基成分为：酵母浸粉2%、蔗糖1.0%、吐温-80 0.5%、硫酸镁0.02%;发酵条件为：接种量4%(V/V)、起始pH9,在150ml 的三角瓶中,装液量为25ml,发酵36h。在最佳培养条件下,碱性蛋白酶粗酶活力可达1670U/ml。     

发酵低温豆粕生产碱性蛋白酶的工艺研究

以提油后的副产物——低温豆粕为培养基的主要成分,利用枯草芽孢杆菌为发酵剂发酵产酶,以碱性蛋白酶活力为考察指标,通过响应面法对培养基和发酵条件进行了优化。结果显示在发酵条件一定的前提下,当培养基组成为1.48%葡萄糖、0.57%豆粕、0.05%KH2PO4时,碱性蛋白酶有最高酶活1792±47.72294u/mL;以此为培养基,对发酵初始pH、温度、接种量三个条件进行优化,发现当pH8.9,接种量为4.9%,35.4℃时碱性蛋白酶活最高。此条件下进行三次平行实验,酶活为2401u/mL,比未优化前提高了37%,从而以低成本的原料,得到较高的经济效益。     

LiCl-ARTP复合诱变选育高产碱性蛋白酶菌株及其发酵条件优化

以地衣芽孢杆菌（Baclicus lincheniformis）E-417为出发菌株,采用氯化锂（LiCl）-常压室温等离子体（ARTP）复合诱变法对其进行诱变,通过酪蛋白平板初筛、摇瓶复筛、遗传稳定性验证筛选高产碱性蛋白酶的优良菌株,并通过单因素及响应面试验对其发酵产酶条件进行优化。结果表明,在氯化锂添加量为1.5%、ARTP照射时间为45 s的最适复合诱变条件下筛选得到1株高产碱性蛋白酶的优良菌株F-3,酶活达到12 147 U/mL,且该菌株传代8次后仍具有良好的遗传稳定性,其最适发酵培养基成分为玉米粉41 g/L、豆饼粉40 g/L、碳酸钠2.1 g/L、磷酸氢二钠2.0 g/L;最适发酵条件为发酵温度37 ℃、初始pH值7.0、接种量8%。在此优化条件下,碱性蛋白酶酶活达到16 156 U/mL,较原始菌株提高75%。     

碱性甘露聚糖酶发酵培养基的优化

选用魔芋粉作为碳源,豆饼粉和谷氨酸钠作为氮源物质,对发酵培养基进行优化,并进行模型验证和5L发酵罐生产实验。结果表明：最佳发酵培养基(g/L,5L发酵罐)为魔芋粉12、豆饼粉15、酵母粉5、NaCl 84.4、谷氨酸钠3.11、K2HPO4 1.5、MgSO4 0.3、Na2CO3 10,起始pH 9.5～10.0,碱性β-甘露聚糖酶活力最高可达到2610.1U/mL。     

产中性蛋白酶菌株发酵条件的研究

对一株产中性蛋白酶的枯草芽孢杆菌的发酵条件进行了优化，确定其最适培养基配方为豆饼粉3％、玉米粉3％、麸皮2,5％、KH2PO4 0.05％、Na2HPO4 0．4％，最适摇瓶培养条件为种龄8h、接种量2％、装液量50mL／250mL、摇床转速180r／min、32℃培养33h，中性蛋白酶的摇瓶发酵单位最高可达4830U／mL。     

营养因子对长根菇液体发酵的影响

研究了各种营养因子对长根菇液体发酵的影响 ,确定了合适的碳源、氮源、C/N比、无机盐、生长因子的浓度 ,以玉米粉 2 %、豆饼粉 0 2 %、KH2 PO4 0 3 %、MgSO4 ·7H2 O 0 2 %、棕榈酸0 1 5 %、VB10 1mg/mL为发酵培养基 ,长根菇深层发酵结果最佳 ,在 7L发酵罐上进行发酵动力学试验 ,长根菇适宜发酵周期为 1 1 0h ,发酵液胞外多糖最高可达 2 85 g/L。     

多菌种分步发酵提高辣木籽粕蛋白含量及酶活

以辣木籽粕为底物,探究使用屎肠球菌（Enterococcus faecium）、米根霉（Rhizopus oryzae）和黑曲霉（Aspergillus niger）联合发酵辣木籽粕改善其粗蛋白、酸溶蛋白含量及蛋白酶活性的最优条件。结果表明,接种顺序对发酵效果有显著影响,最优条件为先接种黑曲霉和米根霉,发酵36 h后,再接种屎肠球菌,在培养基含水量50%,总接种量20%的条件下30 ℃发酵3 d。在此优化条件下,发酵辣木籽粕的粗蛋白含量、酸溶蛋白含量、酸性蛋白酶活性和中性蛋白酶活性分别达到46.78%、11.30%、77.06 U/g和711.93 U/g,粗蛋白和酸溶蛋白比发酵前分别提高了32.22%和121.57%,该方法可提高辣木籽粕的营养价值和消化性能。研究结果将为辣木籽粕的深加工开发提供参考依据。     

响应面法优化元宝枫籽粕酶解工艺及多肽功能特性研究

本文以元宝枫籽粕为原料,采用碱性蛋白酶法对元宝枫籽粕进行酶解,以酶解时间、加酶量、pH、酶解温度、料液比为考察因素,酶解多肽得率为评价指标,在单因素实验的基础上,根据Box-Behnken中心组合实验设计对元宝枫籽粕碱性蛋白酶酶解多肽制备工艺进行优化,并对优化工艺获得的酶解多肽进行了氨基酸组成、吸水性、吸油性、起泡性质、乳化性质和表面疏水性等功能特性表征。结果表明:最优的酶解制备工艺为:酶解时间3.3 h,pH为10,加酶量为3%,酶解温度为55 ℃。在最优制备工艺条件下元宝枫籽粕碱性蛋白酶酶解多肽得率为40.13%±0.15%。氨基酸组成分析表明酶解多肽所含八种必需氨基酸量高达20.3%,远高于国际粮农组织所建议成人所需必需氨基酸量。此外,酶解多肽的吸油性（4.553 g/g）高于大豆蛋白（2.61 g/g）,其表面疏水性（1365.3）与大豆7S球蛋白的表面疏水性相似,乳化性和乳化稳定性略低于大豆分离蛋白。本研究所获得的元宝枫籽粕碱性蛋白酶酶解多肽具有较好的功能特性,这也表明它可作为一种潜在的功能成分应用于食品中,为元宝枫籽粕的新应用开发提供数据和理论支撑。     

金橙黄微小杆菌产碱性蛋白酶培养基组成及发酵条件优化

采用单因素实验和正交实验的方法,对金橙黄微小杆菌产碱性蛋白酶条件进行优化。结果表明,最佳发酵培养基组成成分为酵母膏10g/L、玉米粉15g/L、NaCl15g/L,摇瓶培养最佳条件为初始pH8.8,培养时间28h,温度25℃,接种量6%条件下,在此条件下酶活性达到37.793U/mL。金橙黄微小杆菌对生长条件要求不高、容易培养,碱性蛋白酶产量较高,表现出了潜在的工业开发价值。     

高去酰胺蛋白酶产生菌的诱变选育及产酶条件优化

以地衣芽孢杆菌2709为出发菌株,采用氮离子注入技术,在最佳注入剂量为1.5×1015ions/cm2的条件下进行诱变处理,筛选得到一株去酰胺度高达48.99%的突变株SDL-9,去酰胺度提高了85.57%,而肽键水解度相对较弱。并对SDL-9的产酶条件进行优化,结果表明：最佳碳源为质量浓度为2.0g/100mL的玉米粉,最佳氮源为质量浓度3.0g/100mL的大豆蛋白,质量浓度为0.04g/100mL Fe3+对产酶具有明显的促进作用,质量浓度为0.9g/100mL谷氨酰胺对产酶有明显的诱导作用,最佳起始pH值为7.0,最佳发酵温度35℃,在此条件下进行发酵产酶,测得去酰胺度为57.1%,肽键水解度为13.2%。     

毕赤酵母表面展示磷脂酶D高密度发酵优化

利用基因工程手段构建获得的一株细胞表面展示表达磷脂酶D的毕赤酵母工程菌株GS115/pKFS-pld,通过摇瓶单因素筛选进行发酵条件优化,确定了最佳发酵条件为:诱导产酶阶段28℃,初始pH6.5,甲醇浓度1.5%,装液量为30 mL/250 mL,250 r/min摇床培养144 h。在此优化条件下菌体量为19.6 g/L,酶活达17.8×10-7kat/g,分别是是优化前的1.38及1.44倍。同时进行了5 L规模发酵罐分批补料培养,结果表明15 mL(/L.h)速率流加甘油补料培养基6 h后,采用溶氧恒定流加法流加甲醇,诱导132 h后,菌体量及PLD活力分别达到67.4 g/L及27.3×10-7kat/g,是摇瓶发酵水平的3.44倍及1.53倍。     

碱性蛋白酶产生菌的筛选鉴定及培养优化

通过对筛选的产碱性蛋白酶菌株进行形态观察、生理生化试验和16S rDNA序列分析鉴定,确定高活力菌株为解淀粉芽孢杆菌.发酵碳源、氮源和金属盐的优化,确定优化培养组分.对接种体积分数、培养温度和培养pH进行研究,确定最佳培养条件.在最优条件下培养18h后获得最大酶活力为395.18 U/mL,产酶能力比优化前提高了2.55倍.该研究为深入研究工业发酵生产碱性蛋白酶提供了参考.     

海洋低温BS041208菌株选育及发酵培养基的研究(Ⅱ)

建立了海洋低温蛋白酶菌株(Bacillussubtilis简写为BS041208)发酵最适pH值、温度、时间、接种量、通气量分别为5.0、14℃、48h、8%、150mL;在最适发酵条件下,BS041208菌株50L发酵罐中低温蛋白酶活性为1371.8U/mg。     

米曲霉1228制曲条件的优化及酱油酿造的研究

以米曲霉1228为发酵菌种,豆粕和麸皮为原料制曲,通过单因素试验和正交试验,优化制曲工艺条件;采用低盐固态发酵工艺,进行酱油酿造试验。结果表明:豆粕与麸皮以6:4配比,采用90%加水量和0.5%接种量制曲32 h,成曲的中性蛋白酶酶活为1473 U/g;发酵20 d后,测得酱油的氨基酸态氮含量为6.90 mg/mL,可溶性无盐固形物含量为163.60 mg/mL,酱油色泽棕红,酱香浓郁。     

利用味精废水发酵生产苏云金芽孢杆菌的发酵条件研究

利用搅拌转速为 1 80r/min的 5L发酵罐 ,研究了 1株驯化后的苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)在味精废水中发酵生产生物农药的适宜工艺条件 ,并对发酵过程中的各个指标进行了检测。在 1 2m3规模的发酵罐中发酵菌数可达 68 7× 1 0 8/mL ,毒力效价与标准品相当。