枯草芽孢杆菌纳豆激酶分离纯化及酶学性质

利用30%～70%饱和度的硫酸铵沉淀,Sephadex G-50凝胶过滤层析对浅盘发酵纳豆激酶进行分离纯化并对其酶学性质进行初步研究。以纤维平板法测定纳豆激酶活力,SDS-PAGE检验纯化效果。结果表明:纯化后纳豆激酶为电泳纯,分子质量约27.518kD,纯化倍数和酶活回收率分别为19和42.1%,纳豆激酶最适温度为50℃,最适宜pH值为8.0。     

发酵液中牛肉风味肽分离纯化方法的比较研究

使用反相高效液相色谱（RP-HPLC）对重组酵母发酵液中一种牛肉风味肽（BMP）的稳定性进行了研究，并分别运用D301离子交换层析和Sephadex G-25凝胶过滤层析对其进行了分离纯化，最后利用RP-HPLC对目标肽进行分析检测。结果表明，在pH值为7．4条件下，发酵液中的目标肽于室温下放置0h-8h后仍呈现良好的稳定性。分离纯化结果显示，Sephadex G-25凝胶过滤层析的分离纯化效果优于D301离子交换层析，更适合于分离复杂体系发酵液中的风味肽。     

纳豆激酶分离纯化及纤溶活性研究

经过生理盐水浸提、(NH4)2SO4分级沉淀、Sephadex G-100凝胶层析等纯化步骤,从纳豆中获得层析纯的纳豆激酶,纯化倍数15.6,回收率10.2%,SDS-PAGE电泳显示为二个组分,分子量在29000左右。对其纤溶性质研究表明:纳豆激酶活性的最适pH为8.0,pH6～10溶液中40℃以下基本稳定,pH<5失去纤溶活性;模拟胃环境的酸性条件下,粗酶失去纤溶活性,而纳豆生理盐水浸提液纤溶活性保持25%;SDS-PAGE电泳显示,胰蛋白酶对纳豆激酶成分没有降解作用;体外溶栓作用表明,纳豆激酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而不是通过激活纤溶酶原。     

纳豆激酶分离纯化的工艺研究

通过对纳豆激酶分离纯化工艺的研究,得出:纳豆激酶发酵液经离心、过滤及CM-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析纯化后,纯化液经SDS-PAGE电泳为一条单一色带,纯化倍数达29.6.经中试扩大试验,效果基本一致.通过初步的冻干试验,得出最佳赋型剂为1%甘露醇和2%甘氨酸.     

凝胶层析和离子交换层析结合法纯化重组降血压肽VLPVPR

为了提高VLPVPR的纯度,采用凝胶层析结合离子交换层析的方法对VLPVPR进行纯化。先用Sephadex G-10凝胶对VLPVPR溶液脱盐,再考察离子交换剂(SP Sepharose Fast Flow和Q Sepharose Fast Flow)对重组降血压肽VLPVPR的纯化效果,确立纯化VLPVPR的优化工艺。实验结果表明SP Sepharose Fast Flow不适于VLPVPR的纯化。采用Q Sepharose Fast Flow的纯化工艺为:上样量为柱床体积的10%,用10mmol/L pH9.0的CHES缓冲液洗脱,流速为1mL/min。VLPVPR回收率为93.8%,纯度达到47.2%。采用Q Sepharose Fast Flow纯化提高了VLPVPR的纯度。     

地衣芽孢杆菌A 产碱性蛋白酶的研究

研究从经过60Co 照射的东海香参水解液中分离出的地衣芽孢杆菌A 产碱性蛋白酶的产率、分离纯化与生化特性。经硫酸铵沉淀、DEAE- Sepharose 离子交换层析和Sephadex G-75 凝胶层析分离纯化后,碱性蛋白酶产率为5.8%;经SDS- PAGE 电泳测得其分子质量为35kD。酶的最适反应温度为50℃,最适pH 值为11,热稳定性较好。该蛋白酶具有一定的耐氧化能力。     

凝胶层析分离提纯纳豆激酶研究

从纳豆菌发酵液中提取纳豆激酶,采用20%～60%饱和度的硫酸铵沉淀,Supherdex G-75凝胶过滤层析对活性组分进行分离提纯.并用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电(SDS-PAGE)对分离纯化的效果进行了检验.结果表明在SDS-PAGE中观察到单一条带,分子量27.7 ku.     

中华稻蝗内生菌株SDLH抗菌肽的分离纯化

采用PEG 6000沉淀法、DEAE-32阴离子层析和Sephadex G-50凝胶层析分离纯化SDLH抗菌肽,抑菌圈法测定抑菌活性,Bradford法测定蛋白含量,PAGE检测纯度。结果获得分子量为17.0 KD,电泳纯的抗菌肽。     

层析法分离纳豆激酶的研究

选高产酶的纳豆杆菌发酵,发酵液离心除菌后加入饱和度为30%硫酸铵去杂,然后加入65%的硫酸铵析出纳豆激酶粗提物,然后将粗提物分别过阴阳离子交换柱和疏水层析柱进行提纯酶。比较其提纯倍数和回收率,得出较好得分离纯化方案为:样品依次经过DEAE-SepharoseFastFlow阴离子层析、CM-SepharoseFastFlow阳离子层析和Penpyl-SepharoseCl-4B疏水层析柱,纳豆激酶最终纯化倍数达到32.2,回收率为13.2%。     

鸭血浆胆碱酯酶的分离纯化和性质的研究

将鸭血浆用0．2mol／L pH7．2磷酸盐缓冲溶液等体积稀释后，以硫酸铵为盐析剂进行二次盐析、再经DEAE-52离了交换层析和Sephadex G-200凝胶过滤层析对胆碱酯酶进行分离纯化，可获得电泳纯的胆碱酯酶，纯化倍数为278．5倍，酶活回收为17．8％。实验表明，该酶的最适温度为37℃，最适pH为7．8，有过量底物抑制现象。     

亲和层析法分离纯化纳豆激酶

目的：以纳豆激酶的作用底物纤维蛋白为配基制备亲和层析胶,分离纯化纳豆激酶。方法：纳豆杆菌发酵液经硫酸铵分段盐析、透析得粗酶,在4℃条件亲和层析法分离纯化,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)对酶纯度进行检验。结果：经亲和层析得纳豆激酶为电泳纯,纯化倍数为8.3,回收率43.9%。纯酶的最适pH值和温度分别为pH7.0～9.0、50℃;温度高于60℃纤溶酶活性迅速下降;在pH6.0～10.0范围内稳定性好;Mg2＋对其有微弱激活作用,Cu2+有显著抑制作用。结论：以琼脂糖包埋纤维蛋白制备的层析胶可用于纳豆激酶的快速分离纯化。     

耐热解淀粉芽孢杆菌BA-DES4产纤维素酶的分离纯化及酶学性质

目的：本研究以一株产纤维素酶的解淀粉芽孢杆菌BA-DES4为材料,纯化并研究了其纤维素酶的酶学性质。方法：研究采用硫酸铵分级沉淀及SephadexG-75凝胶过滤层析方式对其所产纤维素酶进行分离纯化,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）确定其分子量,并对纯化后纤维素酶的酶液进行酶学性质研究。结果表明：发酵液中分离纯化获得纤维素酶系组分（内切葡聚糖酶）,对纯化的电泳内切葡聚糖酶进行酶活测定,其比活力为51.08 U/mg。发现其分子量为22.4 kDa;初步酶学性质研究表明：该酶的最适反应温度和最适pH分别为65℃和6.0,且在pH5.0～7.0和温度55～65℃下稳定性较高;Mn2+对纤维素酶活力激活作用较为显著,Cu2+的抑制作用最大。结论：该菌株可作为产内切葡聚糖酶的潜在菌株,内切葡聚糖酶可在Mn2+、Fe2+的作用下促进酶活力,同时在高温及酸性环境中发挥作用,能够参与高效降解高温酸性环境中的纤维素,提高生产率,同时将分解成的葡萄糖供发酵使用,具有应用高温大曲发酵酒生产的潜力,为该酶的进一步研究奠定了基础。     

金线莲苷的硅胶柱层析分离

为进一步提高金线莲苷的分离纯化效率,该研究以深度共熔溶剂提取的金线莲苷粗品为基础,比较了大孔树脂法和硅胶柱层析法分离金线莲苷的效果,并优化了硅胶柱层析法分离金线莲苷的条件。实验结果表明,DM130型大孔树脂对金线莲苷的吸附量仅为24.69 mg/g,解吸率为17.89%,且无法选择性的分离金线莲苷,而硅胶柱层析法对金线莲苷的分离效果较好;硅胶柱层析法分离金线莲苷的最佳条件为：洗脱溶剂为乙酸乙酯:乙醇:乙酸=6:4:0.2（V/V/V）,上样量为0.60 g,洗脱速率为1.25 mL/min,在此条件下,金线莲苷的回收率可达79.29%;硅胶柱层析分离组分经半制备型高效液相色谱纯化所得的金线莲苷纯度大于99.00%。该研究建立了一种简单高效的金线莲苷分离纯化流程,有利于金线莲产业的发展,为后续的研究工作提供理论支持。     

真菌发酵液中纤维素酶分离提取工艺研究

该研究建立了两种分离提取纤维素酶的方法。二级盐析-G-75凝胶色谱法分离提取工艺为：纤维素酶发酵液经0.22 μm微滤膜预处理后,依次采用饱和度为20%、80%的（NH4）2SO4对其进行二级盐析,经G-75凝胶色谱层析,冷冻干燥后测得纤维素酶活性为13 675.76 U/g,总酶活收率为91.96%,总纯化倍数为31.41;二级超滤-G-75凝胶色谱法分离提取工艺为：纤维素酶发酵液经0.22 μm微滤膜预处理后,以30.165 mL/（min·m2）的膜通量分别经6×104 Da和1×104 Da的超滤膜分离,操作压力分别为0.050 MPa和0.037 MPa,经G-75凝胶色谱层析,冷冻干燥后测得纤维素酶活性为12 769.87 U/g,总酶活收率为92.91%,总纯化倍数为21.23。二级盐析-G75凝胶色谱法适合小规模间歇操作;二级超滤-G-75凝胶色谱法适合大规模连续操作。     

黑果小檗果实中锦葵素-3-O-葡萄糖苷的分离纯化及安全性研究

目的 建立并验证黑果小檗果实中锦葵素-3-O-葡萄糖苷(malvidin 3-O-glucoside, Ma-3G)的分离纯化方法,并评估其安全性。方法 利用超声辅助浸提法提取黑果小檗果实中的花色苷(Berberis atrocarpa Schneid anthocyanin,BHSA)粗提物,将BHSA粗提物用乙酸乙酯萃取,AB-8大孔吸附树脂、聚酰胺树脂纯化,采用Sephadex LH-20凝胶柱对纯化后BHSA进行分离,分别考察洗脱液浓度、上样量对花色苷不同组分分离效果的影响,并筛选出最佳分离条件,将最佳条件下分离得到的Ma-3G进行紫外可见光谱扫描及高效液相色谱法检测。采用固定剂量法对小鼠以2000 mg/kg Ma-3G的单次口服剂量进行安全性实验。结果 经乙酸乙酯萃取、AB-8大孔吸附树脂、聚酰胺树脂纯化后得到BHSA粗品纯度为50.76%, Sephadex LH-20凝胶柱层析的最佳分离条件为上样量20 mg,洗脱液为含有0.5%HCl的20%甲醇溶液,在此条件下成功获得了Ma-3G单体。使用面积归一化法进行纯度测定,结果显示其纯度为99.48%。黑果小檗果实中Ma-3...     

用疏水色谱法纯化基因重组 牛朊病毒正常成熟蛋白

研究并比较了高效疏水相互作用色谱（HPHIC）的流动相组成、固定相、pH值和梯度方式对分离基因重组大肠杆菌高效表达的牛朊病毒正常成熟蛋白的影响,在此基础上,确定了牛朊病毒正常成熟蛋白分离纯化的最优化条件,即仅用高效疏水色谱法坦 步便可得到纯度和质量回收率均大于90%的目标蛋白,还讨论了用HPHIC对变性bPrP^cL的分离机理。     

二次柱层析制备高纯度表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的工艺研究

以商品荼多酚为原料,先用聚酰胺柱层析预分离表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG),再用硅胶柱层析制备高纯度的EC-CG.采用此工艺条件,利用较低等级的商品茶多酚(70%TP)可以制备出纯度达98%以上的EGCG.     

小曲酒酿造废水中高粱红色素的分离纯化工艺研究

用大孔树脂耦合硅胶柱层析法对小曲酒酿造废水中的高粱红色素进行分离纯化,通过单因素试验,确定了大孔树脂和硅胶 层析柱的纯化条件。 结果表明,一级纯化选择HPD600型大孔树脂,吸附容量为2 BV,吸附液pH值为7,吸附速率为3 BV/h,除杂水用 量为5 BV,洗脱剂为体积分数80%的乙醇,洗脱剂用量为2 BV,洗脱速率为6 BV/h;二级纯化用硅胶层析柱,流动相为石油醚∶乙酸 乙酯=4∶1（V/V）,目标收集液为2～3 BV段的流动相收集液;经两级纯化后得到高粱红色素纯度达90%,废水中高粱红色素的回收率 达67.2%。     

仿刺参肠道多糖的纯化及理化分析

目的：对仿刺参肠道多糖进行纯化,并对纯化产物进行理化分析。方法：使用葡聚糖凝胶(G-100)层析柱分离出两种仿刺参肠道多糖,选取其中多糖A进行研究。使用葡聚糖凝胶(G-100)柱层析法和琼脂糖凝胶电泳法进行纯度检测,葡聚糖凝胶(G-200)柱层析测定分子质量,高效液相色谱法确定其单糖组分,并结合红外吸收光谱法与核磁共振对其结构进行初步检测。结果：实验所得纯化产物多糖A为均一组分,主要含有氨基糖醛酸、氨基半乳糖盐酸盐和岩藻糖3种单糖,并含有少量的氨基葡萄糖、半乳糖。其中岩藻糖有α和β两种构型,以α-岩藻糖硫酸酯残基、β-岩藻糖硫酸酯残基形式存在。分子质量约为18.8×104D。结论：该纯化产物多糖A为一种酸性多糖,推测其为硫酸软骨素类。