2种微生物法测定婴幼儿乳粉中维生素B5 含量的比较

目的比较国家标准GB 5009.210-2016《食品安全国家标准食品中泛酸的测定》和试剂盒法定量检测婴幼儿乳粉中维生素B_5含量的差异。方法采用微孔试剂盒法和国标法测定婴幼儿配方奶粉的维生素B_5含量,通过相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)来比对两种方法的重现性、精密度,通过加标回收实验对比方法准确度。结果由精密度与准确度实验结果可知,国标法与试剂盒法的相对标准偏差分别为6.92%和3.18%,回收率分别为87.60%和97.61%。结论相对于国标GB 5009.210-2016的传统微生物法,试剂盒法操作简单,检验周期短,可以快速有效的测定婴幼儿乳粉中维生素B_5的含量。     

微孔板法检测婴幼儿配方乳粉中维生素B12的含量

目的 建立用微孔板检测婴幼儿配方乳粉中维生素B12的方法。方法 基于微生物原理的检测方法, 缩小样品的培养体积。样品经提取后, 分装到96孔细胞培养板中, 在培养基中加入0.05%的菌悬液, 混匀后分配到含有样品和标准品的微孔中, 培养后直接用酶标仪测定吸光度值。结果 本方法标准曲线相关系数0.9987, 加标回收实验回收率在92.7%~98.7%之间, 重复性实验相对标准偏差在1.03%~1.73%之间, 6种不同含量的样品同时用GB 5413.14-2010方法和本方法检测维生素B12, 检测结果无显著性差异。结论 该方法快速, 操作简单, 稳定性高, 检测成本低, 可大批量样品同时检测, 适合测定婴幼儿配方乳粉中维生素B12的含量。     

微生物法测定婴幼儿配方乳粉中的泛酸含量

目的采用微生物法测定5种市售婴幼儿配方乳粉中的泛酸含量,探讨测定过程中的关键步骤、主要影响因素及容易出现的问题。方法利用泛酸标准工作液制作泛酸标准曲线。将乳粉样品进行水解处理得到样品溶液。向试管中分别加入等体积的培养基及不同体积的样品溶液,稀释至10 m L,得到样品待测液。样品待测液和泛酸标准曲线溶液灭菌后,加入植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,L.plantarum)ATCC 8014菌悬液进行培养,将培养物混匀后测其吸光度值,根据标准曲线计算出对应的泛酸含量,并进行方法的重复性和加标回收率实验。结果在0?50 ng/m L范围内,泛酸标准曲线的线性关系良好,相关系数r2为0.9982。标准对照品(standard reference material,SRM)1849a中的泛酸含量为(6807?93)?g/100 g,与其标签标示值[(6820?190)?g/100 g]相符;泛酸加标实验回收率在94.20%?102.40%之间,RSD在1.82%?4.63%之间,分析效果较好。结论在对市售婴幼儿配方乳粉的检测中发现,泛酸含量均符合要求,但有的样品中泛酸含量高于标示值。     

特殊医学用途配方食品和婴幼儿配方乳粉中氟含量测定方法的改进

目的对国标方法测定特殊医学用途配方食品和婴幼儿配方乳粉类产品中氟含量测定进行改进。方法样品经Taka淀粉酶酶解,高氯酸溶液沉淀蛋白质,加入总离子强度缓冲剂消除金属干扰离子,过滤后,使用氟离子选择电极测定样品中氟含量。结果与国标法相比,改进方法使测试溶液澄清,电极响应更快,回收率范围为92.8%～107.5%,相对标准偏差为3.36%～4.38%,能满足方法准确度和精密度要求。结论改进后的方法能够满足方法学要求,能够准确地检测特殊医学用途配方食品和婴幼儿配方乳粉类产品中的氟含量。     

3种前处理-HPLC法测定婴幼儿配方食品中维生素B1

分别采用国标法(GB 5009.84-2016)、酸解法和等电点法处理试样,用高效液相色谱-荧光检测(HPLCFLD)法测定婴幼儿配方乳粉和婴幼儿谷类辅助食品中的维生素B1。结果表明,维生素B1在3.036~303.6 ng/mL范围内线性良好,相关系数R^2>0.999。3种方法的回收率和相对标准偏差(RSD,n=6)均符合要求。其中,国标法和酸解法的RSD值相对较小,等电点法的RSD值偏大。试样经国标法、酸解法处理测得维生素B1含量与标签一致,少数试样经等电点法处理测得维生素B1含量明显偏低。酸解法相较于国标法,省去了耗时最长的酶解步骤,仍获得良好回收率。可见,酸解法前处理简单,耗时短,结果准确度高,重现性好,适用于批量检测,总体优于国标法和等电点法。     

微生物法测定婴幼儿奶粉中泛酸含量的研究

目的：优化微生物法测定婴幼儿奶粉中泛酸含量的测定条件,为泛酸检测国标法的后续修订提供试验数据。方法：分析了国标法测定泛酸过程中有待改善的问题,并对检测过程中的菌液制备、前处理及吸光度测定等关键步骤进行重点探讨研究。结果：ATCC和CICC来源的植物乳杆菌均可用于测定泛酸;以直接接种透光率为80%的菌液至测试管中,或以5 mL菌液添加至400 mL灭菌测试培养基,得到的标准曲线及测定的样品结果最佳;直接提取法的结果较水解法高;酶标仪和紫外分光光度法测定结果相对偏差在5%以内,其中酶标仪法测定加标回收率达到了96.9%,相对标准偏差(RSD)为4.95%,更具优势。结论：微生物法测定泛酸的关键步骤经优化后,可简化操作过程,提高测定样品的准确性,其优化条件可作为泛酸检测国标法的后续修订的参考依据。     

EP管法测定婴幼儿配方乳粉中叶酸质量分数

在融合GB 5009.211-2014和商业化试剂盒优点的基础上,建立了一种基于微生物法原理快速准确测定婴幼儿配方乳粉中叶酸质量分数的新方法-EP管法。该方法在实施各项质量控制措施的基础上,通过优化工作菌株的制备和保存、样品制备和灭菌、测定体系的培养体积、培养液吸光度值的测定、结果的计算等各项措施,缩短了试验时间,极大的提高了试验的可操作性。结果表明,该方法的检出限为0.1μg/100g,定量限为0.2μg/100g,加标回收率在98.0%～107.5%之间。本方法融合了国标试管法和试剂盒微孔板法的优点,操作简便,成本低廉,缩短了检验周期,适合在各级常规实验室进行推广应用。     

重量法结合氨基酸分析法测定婴幼儿配方乳粉中小分子蛋白肽含量

目的:建立婴幼儿配方乳粉中小分子肽含量的定量分析方法。方法:分别采用凯氏定氮法、重量法、离子交换色谱等方法测定婴幼儿配方乳粉中总蛋白、高分子蛋白和游离氨基酸含量,通过计算求得小分子蛋白肽含量。结果:高分子蛋白检测精密度RSD (n=6)为0.74%;17种氨基酸回收率为91.0%～103.2%,检测结果的相对偏差为0.6%～2.5%;小分子蛋白肽添加回收率为95.2%～98.2%。结论:所建方法精密度和回收率良好,可用于婴幼儿配方乳粉中小分子肽含量的测定。     

婴幼儿配方乳粉中磷质量分数的测定

为了准确测定婴幼儿配方乳粉中的磷质量分数,从方法的最佳实验条件、精密度、稳定性、重现性及回收率方面做了研究,发现采用可见分光光度法测定婴幼儿配方乳粉中的磷质量分数,重现性好,准确度高。建立了线性方程,方法的平均回收率为98.5%,RSD为0.39%。随机抽取市售的30批次婴幼儿配方乳粉进行检测,发现不同阶段的乳粉磷质量分数不同,幼儿配方乳粉较大婴儿配方乳粉婴儿配方乳粉,分别为(448±56)mg/g,(382±59)mg/g,(250±58)mg/g,不同品牌同一阶段的乳粉磷质量分数也存在较大差异。     

高效液相色谱法同时测定乳粉中维生素B_1、B_2

本实验建立了高效液相色谱法同时测定婴幼儿配方乳粉中维生素B_1、B_2的提取分析方法。试验将婴幼儿配方乳粉经酸和碱调pH值,过滤液经碱性铁氰化钾衍生,正丁醇提取,取正丁醇层用微孔滤膜(0.45μm)过滤。以水和甲醇为流动相,利用高效液相色谱分析,外标法定量。试验结果表明:维生素B_1、B_2分别在0.0~2.0μg/mL范围内线性良好,相关系数r≥0.999;回收率在84.0%~92.2%之间,RSD5%。与现行标准方法相比较,本方法前处理过程简单,流动相对色谱柱损坏小,测定结果准确度高,重现性好,可用于婴幼儿配方乳粉中维生素B_1、B_2含量测定的快速、批量分析。     

试剂盒法快速检测婴幼儿乳粉中叶酸含量

目的 建立试剂盒法快速检测婴幼儿乳粉中叶酸的含量。方法 以Tris缓冲液稀释样品, 加入冻干的干酪乳杆菌测试菌球, 采用Costar 3599细胞培养板培养, 使用酶标仪测定结果。并同时检测了28批次婴幼儿乳粉叶酸的含量。结果 本试剂盒方法回收率为95%~105%, 定量检测限为0.050 ng/mL, 日间精密度为0.6%, 日内精密度为0.7%。采用试剂盒方法与GB 5413.16-2010试管法同时检测28批次婴幼儿乳粉中叶酸的含量, 检测结果无显著性差异(P=0.598), 乳粉中叶酸含量的合格率为100%。结论 该方法操作简单, 灵敏度高, 重现性好, 可用于测定婴幼儿乳粉中叶酸的含量。     

微生物法测定乳粉中叶酸的不确定度评定

目的评定微生物法测定乳粉中叶酸的不确定度。方法按照GB 5009.211—2014《食品安全国家标准食品中叶酸的测定》规定的微生物法对婴儿配方乳粉中叶酸含量进行测定,根据CNAS-CL01-G003:2019要求,依据GB/Z22553—2010和JJF1059.1—2012,分析测定过程中影响检验结果的因素主要包括测量重复性、试样前处理(称量、稀释)、标准物质、标准溶液配制(称量、稀释)、实验温度、拟合标准曲线、紫外分光光度计,通过对各个不确定度分量进行分析、评估,计算合成得出被测样品中叶酸含量测量结果的标准不确定度,得出扩展不确定度。结果经测定,婴儿配方乳粉中叶酸含量为(80.2±4.28)μg/100 g,k=2。结论微生物因素对测量不确定度具有显著影响,由标准曲线拟合和重复测量体现。     

2种微孔板试剂盒测定奶粉中3种水溶性维生素的对比研究

目的 采用自主研发的微孔板试剂盒A和进口微孔板试剂盒B,就测定奶粉中生物素、叶酸、维生素B12 3种水溶性维生素,进行了比对研究。方法 通过绘制标准曲线、准确性实验、重复性实验及加标回收实验对2个品牌维生素检测试剂盒进行评价。结果 2个品牌试剂盒的相关系数均在0.99以上;试剂盒A和试剂盒B的生物素、叶酸及维生素B12的样品检测结果间的RSD分别为0.08%~7.25%、0.43%~9.25%和0.7%~13.91%;试剂盒A的精密度和回收率分别为1.97%~9.26%和73.67%~110.48%;试剂盒B的精密度和回收率分别为1.17%~5.4%和72.67%~120%。结论 2种试剂盒的性能均满足检测要求,试剂盒A操作较简便,可替代进口微孔板试剂盒,用于奶粉中生物素、叶酸、维生素B12 3种水溶性维生素的测定。     

微生物法测定婴幼儿乳粉中烟酸含量

目的建立微生物法测定婴幼儿乳粉中烟酸含量的分析方法。方法通过比较不同浓度标准曲线对同一标准物质样品的测定结果,确定准确最优的线性浓度范围,并在该标准范围内进行重复性及加标回收实验。结果当烟酸标曲线性浓度范围为5.0～50.0ng时,线性关系良好(r~2=0.996)。该方法的相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)为1.71%(n=6),平均回收率为94.4%。结论该方法稳定准确,适合用于测定婴幼儿乳粉中烟酸的含量。     

不同基质奶粉中泛酸检测方法对比

目前,市面上水解蛋白奶粉的需求与日俱增,但是针对这类奶粉HPLC法分离效果较差,目标峰与杂峰不易分离,为解决这一问题,实验室从优化色谱条件、更换色谱柱、沉淀蛋白PH值调整等几个方面进行优化,同时采用微生物法与仪器法进行比对验证,为进一步解决部分水解蛋白奶粉泛酸不易检测的问题提供实验数据和研究材料。实验结果表明：微生物法和HPLC法检测一致性较好,精密度、准确性等均符合要求。微生物法检测范围广,市面上常见的婴幼儿配方奶粉均可检测；HPLC法适用于检测不含水解蛋白奶粉；调整流动相比例可以实现目标锋和杂峰的分离,但是耗时长、无规律、重复性低。