南瓜籽蛋白酶解液的超滤分离及其抗氧化活性研究

采用超滤技术分离南瓜籽蛋白酶解液,通过研究操作压力、料液浓度、pH和时间四个因素对膜通量和膜效能的影响,依次得到截留分子量分别为10、4ku两次超滤的最佳工艺条件,并比较超滤前后酶解液的抗氧化活性。结果表明,截留分子量为10ku的超滤膜的操作压力为0.25MPa、料液浓度为3.0%、料液pH为7,操作时间为60min;截留分子量为4ku的超滤膜的操作压力为0.20MPa、料液浓度为2.0%、料液pH为7,操作时间为60min。经过超滤以后分子量小于4ku的组分具有更强的清除自由基的能力,其中清除50%DPPH自由基所需的多肽浓度即半抑制浓度IC50值为2.76mg/mL、清除羟基自由基(·OH)的IC50值为2.91mg/mL、清除超氧阴离子自由基(O2-·)的IC50值为23.58mg/mL,同时对铁离子还具有显著的还原能力,吸光度为0.5时所需的多肽浓度为9.43mg/mL。     

超滤对芸豆蛋白酶解物抗氧化活性的影响

采用超滤法从芸豆蛋白酶解物中初步分离纯化抗氧化活性肽。研究超滤系统主要参数对膜通量的影响,确定最优的超滤条件和膜清洗方法,并对超滤前后酶解物的相对分子质量分布、氨基酸组成及抗氧化活性进行比较。结果表明：采用改性聚醚砜平板超滤膜在室温,酶解液质量分数2.5%,pH6.5 和压力0.25MPa 条件下的分离纯化效果较好;超滤能有效去除酶解液中相对分子质量较大的组分,相对分子质量2000～1000D 及1000D 以下的组分分别从11.38% 和12.64% 提高到32.83% 和 45.91%,其抗氧化活性也得到明显提高。     

藜麦糠抗氧化肽的超滤分离及其体外抗氧化活性

为了大批量生产抗氧化活性最好的藜麦糠抗氧化肽,采用风味酶与碱性蛋白酶组合对藜麦糠蛋白进行酶解,制备酶解液。利用超滤技术分离纯化藜麦糠抗氧化肽,并评价分离得到的不同分子质量段抗氧化肽的体外抗氧化活性,优选出抗氧化活性最好的抗氧化肽。以膜通量为指标,压力、时间和滤液质量分数为3个工艺参数,通过单因素和正交实验,探究超滤分离截留分子量为10 ku的藜麦糠抗氧化肽的最佳工艺条件。结果表明,不同分子量段的超滤组分具有不同的抗氧化活性,其中分子量为5~10 ku的抗氧化肽较其他分子量范围的超滤组分的抗氧化活性最好。藜麦糠抗氧化肽的最佳超滤条件为压力0.16 MPa,时间20 min,滤液质量分数2%,在此条件下得到膜通量为(41.22±0.50) L/m2·h。由此可实现5~10 ku的抗氧化肽的大量生产。     

响应曲面优化超滤分离花生粕活性肽的工艺

以花生粕为原料,采用双酶法酶解制备活性肽,应用不同截留分子量的超滤膜对酶解液进行分离纯化,通过单因素试验探讨原料液pH值、操作压力和时间等因素对花生活性肽超滤分离膜通量的影响,利用响应曲面法对超滤工艺条件进行优化.结果表明,最佳超滤工艺参数:选用截留分子量10kD的超滤膜,原料液pH8.2,压力0.25MPa下,超滤38.9min,膜通量可达到27.68L/(min·m2).超滤滤出液中氨基氮含量提高到4.6倍,氨基氮总量回收率达到90％左右,实现了样品的分离纯化与初步浓缩.说明超滤分离花生粕活性肽具有快速、方便、条件温和、操作简单等优点.     

牛乳酪蛋白降血压肽的超滤分离

采用超滤法分离酪蛋白降血压多肽溶液,研究超滤操作压力、温度和溶液浓度对膜渗透通量的影响,结果表明,超滤分离浓度为5%的多肽溶液,压力为0.15MPa,温度为45℃条件下,膜渗透通量相对较高;利用高效凝胶排阻色谱技术分析超滤滤过液的相对分子量分布。结果表明,超滤技术可以实现不同分子量多肽组分的分离;多肽超滤滤过液的ACE抑制活性提高。     

超滤法制备高抗菌抗氧化活性带鱼蛋白亚铁螯合肽(Fe-HPH)的工艺研究

为了获得高抗菌、抗氧化活性的带鱼蛋白亚铁螯合肽(Fe-HPH),采用透过分子质量分别为10,5,3,1ku的超滤膜对带鱼蛋白酶解液亚铁螯合物进行分级分离,比较各级分及未分级带鱼蛋白亚铁螯合肽的肽含量及抗菌抗氧化活性;采用正交试验对最佳膜分离条件进行优化。试验结果显示:经透过分子质量3ku的膜超滤的肽液的抗菌、抗氧化活性最高,其最佳膜分离条件是:螯合肽质量分数30%,pH6.5,温度35℃,此时带鱼蛋白酶解液亚铁螯合物超滤液的DPPH自由基清除活性为81.2%(2mg/mL),对金黄色葡萄球菌的抑制率为91.3%。透过分子质量为3ku的超滤膜为分离高抗菌、抗氧化活性的带鱼蛋白亚铁螯合肽的最佳超滤膜。     

超滤技术分离花生抗氧化肽及其性能研究

采用超滤技术分离花生抗氧化肽,研究超滤操作压力、温度、pH 值和滤液浓度对膜通量的影响,结果表明,滤液浓度2%,压力0.08MPa,温度25℃和时间20min 条件下,膜通量相对较高为45.18ml/m2·min,分子量3kD 以下的花生肽抗氧化活性较高。利用大豆油研究花生抗氧化肽的活性,当添加0.10% 3kD 花生抗氧化活性肽到大豆油中,存放7d 其POV 值为9.15meq/kg,抗氧化活性较好。     

超滤在大豆多肽分离纯化中应用

本试验应用超滤技术对大豆多肽进行分离,研究了超滤系统几个主要参数对膜通量的影响。研究结果表明:截留分子量30000Da的超滤膜应在压力0.12MPa、温度40℃、pH值7.0下运行40min为一个周期,膜通量为19L/m2·h左右;截留分子量10000Da的超滤膜应在压力0.10MPa、温度<45℃、自然pH值下运行60min为一个周期,膜通量为25L/m2·h左右;截留分子量5000Da的超滤膜应在压力0.10MPa、温度<45℃、自然pH值下运行80min为一个周期,膜通量为22L/m2·h左右;经分离得到分子量>30000Da的大豆多肽约占13.21%,分子量10000～30000Da的大豆多肽约占4.05%,分子量5000～10000Da的大豆多肽约占6.41%,分子量<5000Da的大豆多肽约占76.11%。     

黑龙江小麦麦胚多肽的制备及抗氧化功能研究Ⅱ.超滤法精制抗氧化麦胚多肽工艺条件的优化

采用3ku和6ku的超滤膜对麦胚多肽进行分级分离,考察3种分离产物对DPPH ·的清除能力,发现分子质量在3ku以下的麦胚多肽对DPPH ·的清除率可达75.32%,高于其他分离产物。采用响应面试验方法对麦胚多肽的超滤条件进行优化试验,结果表明,最佳超滤条件为超滤压力0.08MPa、超滤时间23min、超滤pH6.83、溶液质量分数2%,此时膜通量为4.85L/(m2 ·h)。所得分子质量小于3ku的麦胚多肽在质量分数11%时,其DPPH ·清除率为78.93%。超滤法精制的麦胚多肽具有良好的DPPH ·的清除能力。     

花生降血压肽的超滤分离研究

采用超滤技术对花生降血压肽进行分离,一级超滤用截留分子量为5000的超滤膜,二级超滤用截留分子量为1000的超滤膜。研究了操作压力、料液浓度和操作温度对超滤过程的影响。结果表明:一级超滤的最适操作条件为操作压力174Pa,料液浓度5%～7.5%,操作温度35℃;二级超滤的最适操作条件为操作压力209Pa,料液浓度7.5%,操作温度40℃;经超滤分离后,分子量小于1000的短肽降血压活性非常突出,IC50达到0.4mg/mL。     

分子量对酪蛋白多肽抗氧化活性的影响

在对酪蛋白酶解产物制备工艺进行优化的基础上,对不同分子量抗氧化肽(>3ku,1～3ku,<1ku)的抗氧化活性进行了评价。首先对酶的种类、酶底物比及水解时间进行了单因素实验,最终确定采用碱性蛋白酶,在pH8.0,55℃,底物浓度5%,酶底物比0.192AU/g的条件下,酶解4h所得水解物抗氧化活性最高。经过超滤和凝胶过滤层析分离获得不同分子量的抗氧化肽,并采用2,2′-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS+.)、羟自由基和超氧自由基清除活性评价其抗氧化性。结果表明,ABTS+.清除活性与分子量呈负相关(r=-0.898,p<0.01),分子量低于1ku组分活性最强(2mg/mL,Trolox当量为2.08±0.05mmol/L);分子量低于3ku的抗氧化肽羟自由基清除活性较高(IC50:1～3ku,4.43±0.03mg/mL;<1ku,4.35±0.06mg/mL);分子量高于3ku组分主要分布在3～5ku,超氧自由基清除活最强(10mg/mL,66.1%±1.0%)。     

不同截留分子质量超滤膜在米醋澄清中的应用研究

分别采用截留分子质量为350 ku、300 ku、250 ku、200 ku和150 ku的超滤膜过滤米醋,对超滤平均通量、通量稳定性、米醋澄清度及盐析蛋白析出量进行比较分析,优选适于米醋过滤的超滤膜。结果表明,200 ku分子质量超滤膜超滤米醋过程中即能保证较高的超滤稳定性、平均超滤通量,实现长时间连续运行,又能有效降低米醋清液盐析后的蛋白析出量,对米醋货架期稳定性有较大的改善作用。     

卷式膜超滤L-乳酸发酵液过程研究

比较截留分子量(MWCO)为1000D 和3000D 的卷式超滤膜在去除L- 乳酸发酵液中蛋白质等杂质过程中对蛋白质截留率和乳酸透过率的影响,研究超滤时间、操作压力、蛋白质质量浓度及操作温度等操作工艺参数对膜通量的影响,分析膜通量随时间的变化规律,建立描述膜通量与操作压力、蛋白质浓度关系的数学模型。结果表明：MWCO 为3000D 的膜更适合用于超滤L- 乳酸发酵液,其膜通量随着超滤时间的延长衰减;随着操作压力和温度的增加而升高,随着蛋白质质量浓度的增加而降低,所建立的数学模型与实验结果吻合良好。     

酪蛋白双酶水解物ACE抑制肽的分离纯化

采用胃蛋白酶和胰蛋白酶依次对酪蛋白进行双酶水解,制备ACE抑制肽。水解物经截留分子质量6ku的超滤膜初步分离,再通过Sephadex G-15进一步纯化,体外测定各分离产物ACE活性的半数抑制质量浓度(IC50值)。纯化得到的各组分经毛细管电泳分析肽谱、Q-TOF LC/MS检测分子质量范围。结果显示：双酶水解产物IC50值为560μg/mL,超滤流出物IC50值为250μg/mL;Sephadex G-15分离得到3个组分,组分Ⅰ的IC50值为123.41μg/mL,含有19个肽段;组分Ⅱ的IC50值为66.67μg/mL,含有14个肽段;组分Ⅲ的IC50值为64.29μg/mL,含有5个肽段。Q-TOF LC/MS测得纯化组分的分子质量范围为400～800u。     

超滤膜分级玉米糖肽的抗氧化和乙醇脱氢酶激活活性

以玉米醇溶蛋白源玉米肽为研究对象,采用D-氨基葡萄糖和转谷氨酰胺酶对其进行酶法糖基化修饰制备玉米糖肽,然后利用截断分子质量为5、3和1 ku的超滤膜对玉米糖肽进行顺次分级分离,获得分子量>5、3~5、1~3和<1 ku四个组分。通过测定各组分的抗氧化和乙醇脱氢酶激活活性,表征分子量对玉米糖肽体外生物活性的影响。结果表明:清除DPPH自由基的玉米糖肽组分的分子量分布在1~5 ku范围内;螯合亚铁离子、清除超氧阴离子自由基、还原力和激活乙醇脱氢酶的玉米糖肽组分的分子量集中在1~3 ku范围内,在浓度为2 mg/mL时,相应的活力分别为83.22%、59.39%、2.248和37.92%;而分子量<5 ku的玉米糖肽组分均具有清除羟基自由基的活性,说明超滤膜分级对玉米糖肽的生物活性影响较大,可以依据玉米糖肽的生物活性选择超滤组分。     

超滤法从马铃薯淀粉加工分离汁水中回收蛋白质的研究

马铃薯淀粉加工分离汁水中大约含有1.5%蛋白质,本研究分析了超滤法在马铃薯蛋白回收当中的应用,并且通过对实验条件的优化,准确地测定了蛋白酶抑制因子对胰蛋白酶的抑制能力。在实验条件下,研究结果表明:浓缩比为5的情况下,分子截留量分别为10000 MWCO和30000 MWCO的超滤膜包的浓缩液蛋白浓度分别增加到原来的4.35和3.90倍,蛋白质回收率分别为67.61%和62.98%。SDS-PAGE结果表明两个超滤膜包回收的蛋白组成没有什么差异,均包含patatin蛋白和蛋白酶抑制剂组分,但30000MWCO的超滤膜包孔径较大,水和小分子量物质更容易穿透,浓缩效率高,更加适合于回收马铃薯总蛋白。分子截留量分别为10000MWCO和30000 MWCO的超滤膜包回收的蛋白胰蛋白酶抑制剂的活力分别为124.38和95.25 TIUs/mg蛋白。超滤法适用于从马铃薯淀粉加工分离汁水中回收天然活性蛋白质。