一株抗小麦赤霉病菌的白莲蒿内生真菌的筛选及代谢产物质谱分析

采用表面消毒法和尖端菌丝挑取法从白莲蒿中分离纯化12株内生真菌菌株;采用菌丝生长速率法研究8株内生菌发酵液的抗小麦赤霉病活性;采用形态学结合ITS rDNA区基因序列鉴定活性最好菌株为芳香镰刀菌Fusarium redolens,并建立质谱方法分析其主要代谢产物。结果表明：白莲蒿内生真菌（No：20202707）对小麦赤霉病病原菌禾谷镰刀菌的抑菌作用最强,抑菌率在65.27%。其主要代谢产物主要有3,4-二氢香豆素、5′脱氧核糖核苷、Harmala生物碱、苯并呋喃、苯并噻唑等。     

一株海洋梅久兰链霉菌的分离鉴定及其抗真菌作用研究

采用梯度稀释分离法从连云港海域海水、海泥、近海土壤、海洋动物以及海洋植物样品中,分离出海洋放线菌22株,采用平板对峙培养法测定不同放线菌菌株的抑菌作用,有9个放线菌菌株有抑菌作用。其中ZW-1菌株的抑制活性最强,该菌株及其发酵液对供试的小麦雪腐镰刀菌(Fusarium nivale)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、斑点落叶病菌(Alternaria alternata)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、菠菜早疫病菌(Alternaria solani)、玉米圆斑病菌(Helminthosporium carbonum)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)等8种植物病原真菌都有较强的抑制作用,可导致病原真菌菌丝细胞壁膨大,原生质体收缩,同时可抑制菠菜早疫病菌(A. solani)分生孢子的萌发和芽管的伸长。通过培养特性、细胞形态观察、生理生化实验和16S rDNA序列分析,将海洋放线菌ZW-1菌株鉴定为梅久兰链霉菌(Streptomyces mediolani)。     

清除玉米赤霉烯酮菌株的筛选、鉴定及机理初探

通过对我国赤霉病高发区田间取样,筛选具有清除玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)活性的菌株。获得2株清除效果较好的细菌A5、D6,其中D6活性较高。通过生理特征分析、16S r DNA序列比对、GC含量及BIOLOG分析等方法,2株菌都被鉴定为红球菌,DNA-DNA同源性分析表明,这2株菌均为Rhodococcus qingshengii。灭活细胞与ZEN共培养,发现细胞无清除ZEN能力,证明A5、D6不具有吸附ZEN的活性;菌液上清液及细胞内容物与ZEN共培养,证明D6菌株中具有清除ZEN的活性成分为胞内蛋白类物质。同时,通过HPLC荧光检测,发现疑似ZEN代谢产物峰。通过筛选获得了2株可通过胞内酶活降解ZEN的红球菌,为生物法清除真菌毒素提供参考。     

小麦赤霉病粒与脱氧雪腐镰刀烯醇、玉米赤霉烯烔关系的研究

小麦赤霉病粒和脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯烔毒素含量有密切相关。将赤霉病粒以一定梯度添加,再用酶联免疫试剂盒测定小麦中DON、ZEN含量。分析结果显示随着赤霉病粒的增高DON、ZEN含量增加,呈正相关。     

河南产麦区小麦镰刀菌毒素污染状况及农民摄入量

检测了赤霉病麦大流行年份及非流行年份小麦中镰刀菌毒素含量,并计算求得农民通过小麦摄入的毒素量。赤霉病麦发病率为34.3%的1985年,小麦中 DON、NIV和 ZEN 含量中位数分别为923.0ppb、128.2ppb 和15.3ppb;每人每日投入量 DON 为528.1微克,NIV 为62.4微克。赤霉病麦发病率<3%的1986年,小麦 DON 含量中位数为14.微克;农民撮入量为9.4微克/人/日。镰刀菌分离结果表明主要为禾谷镰刀菌。值得注意的是发现黄曲霉与禾谷镰刀菌共存于麦粒上。     

高效降解展青霉素乳酸菌的分离鉴定及去除机理研究

目的:从发酵食品材料中筛选出对展青霉素(PAT)有去除作用的乳酸菌。方法:将从传统发酵蔬菜中分离得到的乳酸菌与展青霉素共培养,利用高效液相色谱法(HPLC)测定共培养体系中PAT毒素的减少量,筛选出一株高效去除PAT毒素的乳酸菌菌株。通过微生物形态学、16S r DNA测序鉴定,确定该菌的系统分类学地位。通过比较不同致死方式对实验菌株去除展青霉素效能的影响,并研究细胞壁和胞内物质对PAT的去除效果,初步探索乳酸菌去除展青霉素的机理。最后研究不同因素处理对实验菌株去除PAT毒素的影响。结果:从发酵食品材料中筛选出一株高效去除PAT的菌株LB-11,经初步鉴定该菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。致死菌和细胞壁的去除效率显著低于有活性的完整菌体,推测乳酸菌去除展青霉素主要机理为生物降解作用。在温度为20~30℃和p H为3~7的条件下实验菌株对PAT均有较高的去除效率。结论:LB-11对PAT具有较高的去除效率,在合适的条件下,在24 h内对PAT的去除率达到了98.34%,是一株极具应用价值的益生菌。     

小豆内生真菌的筛选鉴定及其产玉米赤霉烯酮的可能性探究

玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)是目前全球范围污染谷物最广泛的霉菌毒素之一,对人体和动物健康都会产生极大威胁,目前从市售小豆检测到ZEN。【目的】筛选暴露ZEN的小豆内生真菌,结合经典方法和分子生物学方法鉴定所筛选内生真菌,并探索菌株潜在的ZEN产生风险。【方法】以暴露ZEN的小豆为样本,将分离纯化后的内生真菌进行经典形态观察;同时扩增真菌核糖体保守序列ITS1、ITS4,镰刀菌特异基因序列FU1、FU2确定小豆中镰刀菌种属,同时通过ZEN玉米赤霉烯酮产毒控制基因pks13进行PCR扩增,分析菌株ZEN合成的潜在风险。【结果】鉴别出3株镰刀菌,其中2株初步鉴定为砖红镰刀菌(Fusarium lateritium)、1株为花腐镰刀菌(Fusarium napiforme),未检测出ZEN合成关键基因;1株玛利节菱孢霉(Arthrinium marii),分子检测具有产ZEN玉米赤霉烯酮毒素的可能性。将以上4株菌分别回接至ZEN的产毒培养基,LC-MS/MS法未检测出ZEN毒素。【结论】暴露ZEN的小豆具有内生镰刀菌,存在可能产ZEN的内生节菱孢霉;回接培养基未检测到ZEN,但不排除小豆产生ZEN的风险。     

SH7对烟草青枯病的抑菌、防病作用及其抑菌物质的初步研究

研究了生防细菌菌株SH7及其除菌发酵液对烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)的抑菌和防病作用,并对其产生的抑菌物质进行了粗提。结果显示,该菌株对R.solanacearum有很强的抑菌作用,且其除菌体发酵液对烟草青枯病的防效较好。将SH7无菌发酵液、无菌发酵液与青枯病菌混合30 min施入土壤29 d后,两种处理与对照相比,防效分别达到65.99%和53.2%;SH7菌株产生的抑菌物质是SH7除菌发酵液防病的主要机制;SH7分泌的抑菌物质可以被硫酸铵沉淀,初步认为该抑菌物质是蛋白类物质。     

食品添加剂对脱氧雪腐镰刀菌烯醇和T-2毒素 体外去除作用研究

目的为了探索食品中单端孢霉烯族毒素残留的控制方法,研究了多种食品添加剂对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)和T-2毒素的体外去除作用。方法通过食品添加剂处理DON和T-2毒素,研究它们对DON和T-2毒素的体外去除作用。结果去除效果最显著是磷酸三钠、焦磷酸钠、碳酸钠,对DON的去除率分别为76.60%±3.70%、33.30%±3.10%、45.90%±3.30%,对T-2毒素的去除率分别为99.98%±0.01%、95.20%±2.10%、99.98%±0.01%,处理后毒素溶液中不含有已知产物,可能将DON、T-2毒素转化为新的未知产物。结论多种受试食品添加剂对DON、T-2毒素具有不同程度的去除作用。     

玉米赤霉烯酮生物脱毒及关键酶作用机理的研究进展

玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN,ZEA)是由镰刀菌属产生的一类具有类雌激素生物活性的霉菌毒素,广泛存在于玉米、小麦等谷物及其制品中。本文综述了各类微生物降解ZEN的研究现状,重点比较其脱毒效率及产物毒性,尤以不动杆菌(Acinetobacter sp.SM04)、粉红粘帚菌(Gliocladium roseum IFO 7063)、毛孢子菌(Trichosporon mycotoxinivorans)和假单胞菌(Pseudomonas sp.ZE-1)研究较为全面,进一步总结了ZEN降解的关键酶及其作用机制,为微生物降解玉米赤霉烯酮的研究提供依据,也为大环内酯化合物和芳香族化合物的降解开拓更广泛的途径。     

不同真菌菌剂对烟草病毒病的田间防治效果

真菌激发子能诱导植物产生系统抗性,表现出抗植物病毒的作用。对西瓜枯萎菌、苹果轮纹菌、小麦赤霉,以及土壤真菌ESF-6菌株、XFPF-6菌株、C1菌株、XFSF-8菌株、疫霉等8种真菌菌剂的抗病毒活性进行了研究。用不同真菌发酵液喷雾处理田间烟草植株叶片,检测真菌菌剂对烟草病毒病的防治效果。结果表明,8种真菌菌剂对烟草病毒病均有一定的防治效果,其中ESF-6菌剂防效最高,发病高峰期的防效为83.8%。在烟草整个生长期真菌XFPF-6的防效较为稳定,防效稳定在60%以上。小麦赤霉菌,苹果轮纹菌的防效也较高,分别为64.8%,73.7%。除C1菌剂外,其他7种真菌菌剂的防效均高于盐酸吗啉胍,可开发为真菌抗病毒菌剂。经18s rRNA序列测定和显微形态观察鉴定ESF-6为曲霉(Aspergillus sp.),XFSF-8为青霉(Penicillium sp.)。     

Occurrence of Fusarium Head Blight species and Fusarium mycotoxins in winter wheat in the Netherlands in 2009

Most recent information on the occurrence of Fusarium Head Blight species and related mycotoxins in wheat grown in the Netherlands dates from 2001. This aim of this study was to investigate the incidence and levels of Fusarium Head Blight species and Fusarium mycotoxins, as well as their possible relationships, in winter wheat cultivated in the Netherlands in 2009. Samples were collected from individual fields of 88 commercial wheat growers. Samples were collected at harvest from 86 fields, and 2 weeks before the expected harvest date from 21 fields. In all, 128 samples, the levels of each of seven Fusarium Head Blight species and of 12 related mycotoxins were quantified. The results showed that F. graminearum was the most frequently observed species at harvest, followed by F. avenaceum and M. nivale. In the pre-harvest samples, only F. graminearum and M. nivale were relevant. The highest incidence and concentrations of mycotoxins were found for deoxynivalenol, followed by zearalenone and beauvericin, both pre-harvest and at harvest. Other toxins frequently found - for the first time in the Netherlands - included T-2 toxin, HT-2 toxin, and moniliformin. The levels of deoxynivalenol were positively related to F. graminearum levels, as well as to zearalenone levels. Other relationships could not be established. The current approach taken in collecting wheat samples and quantifying the presence of Fusarium Head Blight species and related mycotoxins is an efficient method to obtain insight into the occurrence of these species and toxins in wheat grown under natural environmental conditions. It is recommended that this survey be repeated for several years to establish inter-annual variability in both species composition and mycotoxin occurrence.     

海洋假单胞菌GY-1菌株的抗菌作用及其胞外抗菌蛋白的分离纯化

采用对峙培养法和牛津杯法测定海洋假单胞杆菌(Pseudomonas) GY-1菌株和发酵液的抑菌作用。结果表明：GY-1菌株和发酵液对小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、禾谷镰刀病菌(Fusarium graminearum)、菠菜早疫病菌(Alternaria solania)、斑点落叶病菌(Alternaria alternata)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)和小麦叶枯病菌(Alternaria tenuis Nees)等植物病原真菌有较强的抑制作用。发酵液采用硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow柱层析、Sephadex G-75凝胶层析,以小麦根腐病菌为指示菌进行活性追踪和SDS-PAGE电泳纯度跟踪检测,纯化出一种对小麦根腐病菌具有明显抗菌作用的抗菌蛋白,其分子质量约为70.9kD。     

对虾肠道中产毒镰孢菌抑制菌的筛选与鉴定

为了获得对产毒镰孢菌具有抑制效应的海洋细菌,从对虾肠道中分离细菌,并将分离得到的优势细菌与产T-2毒素的禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)(FG1207)进行固体对峙培养,具有抑菌圈的细菌菌落即为产毒镰孢菌的抑制菌。然后选取对FG1207具有抑制作用的细菌与FG1207进行液体共同培养,用LC-MS/MS技术检测菌悬液中T-2毒素含量,最后对具有抑制FG1207的生长和降解T-2毒素效果的细菌进行16s r RNA序列鉴定和VITEK2细菌生化鉴定。实验结果分离得到8株优势细菌,其中一株对FG1207的生长具有明显的抑制作用;LC-MS/MS检测发现该细菌与FG1207共同培养菌悬液中未检测到T-2毒素,说明该细菌不仅能够抑制产毒镰孢菌的生长,还能降解T-2毒素。经16s r RNA鉴定该细菌为海洋尼泊尔葡萄球菌(Nepal Staphylococcus Aureus),相似度为99.93%,VITEK2细菌生化鉴定的相似度为96.86%。     

海洋细菌GM-1-1菌株对白色念珠菌的抗菌作用机理初步研究

为了探究生防解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)GM-1-1菌株无菌发酵液对白色念珠菌(Candida albicans)的抗菌性质及其抗菌作用机理,采用牛津杯法检测其对白色念珠菌的抑菌效果,通过扫描电镜法、MTT法、分光光度法等测定发酵液对白色念珠菌孢子萌发、细胞形态、生物被膜形成、细胞通透性的影响,初步探讨其抗菌作用机理。结果表明,GM-1-1无菌发酵液对白色念珠菌具有明显的抑制作用,抑菌圈直径达39.5 mm,受抑制的白色念珠菌在不含发酵液的培养基上仍可继续生长;无菌发酵液对白色念珠菌的孢子萌发具有强烈的抑制作用;扫描电镜下发现处理后的白色念珠菌细胞表面凹陷,形态不规则,细胞壁残缺;无菌发酵液抑制了白色念珠菌生物被膜的形成,增加了细胞的通透性。本文初步揭示了GM-1-1无菌发酵液对白色念珠菌的抗菌作用机理,为该菌株的进一步研究和应用奠定基础。     

雪腐镰刀菌和酱油曲霉转化橙皮苷生成橙皮素单葡萄糖苷效果

为比较单一菌种与混合菌种在30 ℃、160 r/min条件下转化橙皮苷生成橙皮素单葡萄糖苷的效果，以橙皮苷为原料，雪腐镰刀菌和酱油曲霉为生产菌种进行液体深层发酵，采用高效液相色谱法和超高效液相色谱-质谱联用仪对单一菌种（雪腐镰刀菌、酱油曲霉）和混合菌种（雪腐镰刀菌-酱油曲霉1∶1）不同时间段发酵液中发酵产物、α-L-鼠李糖苷酶活力以及发酵液pH值进行分析。结果表明：混合菌种与单一菌种转化橙皮苷生成橙皮素单葡萄糖苷差异显著（P＜0.05），混合菌种发酵产生最大酶活力（104.81 U/mL）明显高于单一菌种（24.73、26.17 U/mL），二者发酵均在酸性条件（pH 4～6）下完成。混合菌种较优的发酵效果可为综合开发橙皮提供又一途径，充分利用柑橘加工副产物的同时避免了环境污染等问题的发生。     

Mycotoxins in cereal grain. Part 14. Histochemical examination of Fusarium-damaged wheat kernels

Wheat kernels with visible Fusarium-damage, naturally infected, have been examined with histochemical techniques to observe mycelium growth inside kernels and change in kernels cells. Kernels infected with F. culmorum were found to be damaged more extensively, comparatively to those infected with F. graminearum, F. avenaceum and F. nivale/(Microdochium nivale). Growth of Fusarium mycelium was most abundant between pericarp and aleurone layer and alongside of scutellum. Mycelium colonized also endosperm and embryo--both plumula and radicula.     

不同培养条件对禾谷镰刀菌产玉米赤霉烯酮的影响

研究不同培养条件对禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）产玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEN）能力的影响。选取不同的培养基配比、培养时间、培养温度、摇床转速及光暗反应对禾谷镰刀菌进行培养。在单因素试验的基础上,分别采用正交试验设计和响应面设计的方法进行统计学分析。结果表明：禾谷镰刀菌的最适培养基为每升超纯水含葡萄糖60 g、KNO3 1.5 g、酵母浸出膏1.0 g、蛋白胨20 g、NaNO3 6.0 g、MgSO4 0.5 g、K2HPO4·3H2O 1.0 g、KCl 0.5 g、Fe2(SO4)3 0.025 g;当摇床转速为92 r/min、照明时间为10 h/d、培养温度为22.9 ℃时,20 d毒素质量浓度可达到249.80 μg/L。