高效液相色谱测定水解大豆中异黄酮方法研究

该研究建立大豆提取物中大豆异黄酮高效液相色谱测定方法,通过正交实验确立糖苷型大豆异黄酮转化为游离型大豆异黄酮最佳酸水解工艺条件:盐酸浓度为2．0 mol/L,水解温度为80℃, 水解时间为1．5 h;采用ZorbaX 80A Extend-C18 4．6×150 mm 4 μm色谱柱,MeOH-1．8％冰乙酸水溶液(35:65,V／V)为流动相,MeOH 35％-50％梯度洗脱,流速1．0 ml/min,检测波长为260nm等色谱条件下测定甙元含量,并通过换算因子计算大豆异黄酮含量。     

HPLC法测定绿豆芽中四种大豆异黄酮的含量

建立同时测定绿豆芽中4种大豆异酮(大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素)含量的高效液相色谱方法,对从绿豆芽中提取4种大豆异黄酮的工艺进行优化,最佳工艺为:用60%的乙醇在55℃条件下超声提取60 min,料液比为1:12(g/mL),同时探究绿豆发芽不同天数4种大豆异黄酮的含量.采用日本岛津LC-20A高效液相色谱仪进行测定的色谱条件为:色谱柱为 phenomenex C18(150 mm×4.6 mm,5.0 μm),采用乙腈-0.2%甲酸为流动相进行梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,检测波长为260 nm.大豆苷,染料木苷,大豆苷元,染料木素的线性范围分别是0.74 μg/mL～100.00 μg/mL,0.74 μg/mL～200.00 μg/mL,0.167 μg/mL～500.00 μg/mL,0.198 μg/mL～160.00 μg/mL(r>0.9996),线性关系良好;加样回收率(n=9)分别为100.02%,98.95%,99.28%,99.63%.     

超高效液相色谱-串联质谱法测定大豆中异黄酮素含量

目的 以染料木黄酮、大豆苷元和黄豆黄素的含量为指标,建立超高效液相色谱-串联质谱测定大豆中异黄酮素总量的方法。方法 样品用乙醇-水(3+1,V/V)提取,经过β-葡萄糖苷酶水解后,用Acquity UPLC?BEH C18柱(2.1 mm×100 mm, 1.7μm)分离,以甲醇和0.1%甲酸溶液(含5 mmol/L乙酸铵)作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾负离子模式(ESI-)电离,多反应监测模式进行检测。结果 染料木黄酮、大豆苷元在5.0～500μg/L范围内线性关系良好(r>0.995),方法的检出限分别为2.7、4.0 mg/kg,在300.0、600.0、1 200 mg/kg添加水平的平均回收率为89.4%～102.2%,相对标准偏差(n=6)为1.5%～4.6%;黄豆黄素在0.5～50.0μg/L范围内线性关系良好(r>0.995),方法的检出限为0.6 mg/kg,在30.0、60.0、120.0 mg/kg添加水平的平均回收率为85.7%～104.0%,相对标准偏差(n=6)为1.3%～2.8%。结论 该方法简单、灵敏、准确可靠,适用于大豆中异黄酮素含量的测定...     

酶法提高豆浆中大豆异黄酮苷元浓度的工艺研究

试验利用黑曲霉β-葡萄糖苷酶处对豆浆进行水解处理,将结合型大豆异黄酮糖苷转化为游离型苷元。选大豆为原料,以单因素实验为基础,考察加酶量、反应时间、反应温度三个因素对豆浆中大豆异黄酮糖苷水解的影响;根据Box-Behnken实验设计原理,选取不同加酶量、反应时间、反应温度3因素3水平进行中心组合实验,建立豆浆中大豆异黄酮苷元含量的多项式回归预测模型,确定了最佳工艺参数。结果表明,最佳水解工艺条件为:加酶量0.028 U/5 mL,反应时间1.64 h,反应温度53.82℃,在此条件下制得豆浆大豆异黄酮苷元含量明显提高。测得大豆苷元(De)、黄豆黄素(Gle)、染料木素(Ge)的浓度分别为39.434±1.410μg/m L、4.626±0.462μg/m L、45.851±2.098μg/m L。而大豆苷元(De、)黄豆黄素(Gle)、染料木素(Ge)浓度的响应面预测值分别为40.905μg/m L、4.263μg/m L、48.441μg/m L,测定值与模拟值接近。优化后的工艺条件合理、可行,能明显提高豆浆中大豆异黄酮苷元的含量。     

酶水解对大豆异黄酮粗提物中苷元含量的影响

采用β-葡萄糖苷酶水解的方法将大豆异黄酮糖苷转化为苷元,以染料木素和大豆苷元含量为指标,通过单因素试验对水解过程中的不同影响因素进行了考察。以染料木素含量为指标,运用正交试验优化了β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮的工艺条件为反应温度40℃、水解时间1.5h、水解介质pH4.5、水解底物浓度10mg/mL,在此条件下,水解得到的大豆异黄酮苷元中染料木素的含量可达到22.91%。     

UPLC法测定大豆制品及相关制剂中大豆异黄酮含量

目的：建立同时测定大豆制品及相关制剂中4种大豆异黄酮类化合物大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素含量的超高效液相色谱法。方法：色谱柱：Acquity UPLC BEH C18柱(50mm×2.1mm,1.7μm),流动相：A为体积分数0.2%甲酸溶液,B为乙腈,梯度洗脱;流速：0.4mL/min;检测波长：254nm,柱温：30℃。结果：线性范围：大豆苷0.625～40.0mg/L(r=1.000),染料木苷0.625～40.0mg/L(r=0.9999),大豆苷元0.04～2.56mg/L(r=0.9997),染料木素0.04～2.56mg/L(r=0.9996)。大豆和Natrol? soy isoflavones中大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素平均回收率为98.5%～99.8%。结论：本方法简便、快速、灵敏、准确,适用于大豆制品及相关制剂中大豆异黄酮含量测定。     

高效液相色谱法测定大豆中异黄酮的含量

用高效液相色谱法测定了大豆中六种异黄酮成分,同时比较了不同浓度乙醇制备样品对含量测定的影响。结果显示大豆中极性异黄酮含量高,低极性异黄酮甙元含量低。测定大豆中异黄酮含量的乙醇浓度最好控制在60％-80％。色谱柱采用日本岛津公司的Shim-Pack CLC ODS柱(150×6．0mmID5μm),流动相为MeOHHACH2O（303.566.5),流速为0-8．5min时1．0ml／min,5．8-47min时1．5ml／min,柱温为50℃,检测波长为254。     

糖苷型大豆异黄酮酸水解工艺的研究

通过正交实验确立了糖苷型大豆异黄酮转化为游离型大豆异黄酮的最佳酸水解工艺条件：盐酸甲醇溶液的浓为2mol/L，水解温度为80℃水解时间为60min。水解前样品中大豆异黄酮的含量为D：13．86％、G：23．48％、De：0．22％、Ge:0.02%，水解后样品中大豆异黄酮的含量为D:nD（未检出）、G:nd（未检出）、De:14.01%、Ge:23.45%，水解充分。     

大豆异黄酮糖苷水解工艺的研究

通过正交试验得到了大豆异黄酮糖苷水解为大豆异黄酮苷元的最佳工艺条件。最佳酸法水解工艺条件为:盐酸浓度3 mol/L,水解温度80℃,水解时间180 min,酸法水解率为81.31%;最佳酶法水解工艺条件为:pH 6.0,酶解温度38℃,酶解时间90 min,加酶量为0.9 mg(50 mg糖苷型大豆异黄酮提取物),酶法水解率为82.54%。酶法水解的效果优于酸法水解的效果。     

碱法水解大豆异黄酮工艺条件研究

为提高大豆总异黄酮中的染料木黄酮含量,用碱水解大豆异黄酮粗品,促使丙二酰基异黄酮转化为葡萄糖苷型异黄酮,再对其进行酸水解.单因素和正交实验研究表明,温度是主要的影响因素.由正交实验得出大豆异黄酮碱水解后再进行酸水解的最佳工艺路线为:用1.0 mol/L NaOH溶液,料液比1∶ 10,温度65 ℃,水解时间20 min,后用1 mol/L盐酸,55 ℃水解2 h,样品中以染料木黄酮计的异黄酮总含量由287.09 μg/g提高到532.76 μg/g.     

HPLC法测定大豆提取物中大豆异黄酮含量的研究

主要建立了HPLC法测定大豆提取物中大豆异黄酮含量的方法。通过实验确定了HPLC法测定大豆提取物中大豆异黄酮的最佳条件是：采用Waters Symmetry5μmC18,250mm×4．6mm色谱柱;流速：1．0mL／min;波长260nm;柱温：35℃;流动相A为含0．1％（v/v）乙酸的乙腈溶液,流动相B为含0．1％（v／v）乙酸的超纯水溶液,流动相梯度：18％-35％N乙腈溶液。该方法灵敏度高、重现性好,回收率达98％,变异系数小于3％,为研究大豆异黄酮其它产品打下了良好的基础,操作方法简单,易于掌握。     

HPLC法测定不同产地黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量

目的：建立黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量测定方法,测定5个不同产地黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量。方法：采用HPLC法测定黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量,色谱柱采用Phenomenex Luna Su C18 柱 (250mm×4.60mm,5μm);流动相A相为0.5%磷酸溶液,B相为水-乙腈(50:50),进行梯度洗脱;流速0.8mL/min;检测波长520nm;柱温30℃;进样量10μL。结果：矢车菊素-3-O-葡萄糖苷标准曲线回归方程为：Y＝2×107X－33120(r＝0.9998),在 0.1041～1.041μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为92.4%、 92.5%和95.5%,不同产地黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量范围为5.263～12.829mg/g。结论：所用方法简便、准确,可用于不同产地黑豆皮的质量控制。     

超高效液相色谱-串联质谱法快速测定保健食品中大豆异黄酮含量

建立保健食品中6种大豆异黄酮的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)同时检测方法。样品中大豆异黄酮采用80%甲醇超声提取、Florisil固相萃取柱净化,C₁₈色谱柱分离,以0.1%甲酸水溶液和乙腈为流动相,流速0.3 mL/min,柱温30 ℃,质谱正离子多反应监测(MRM)模式进行检测。结果表明,大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素以及染料木素在各自浓度范围内线性关系良好;大豆黄苷、大豆黄素检出限均为10 μg/kg;大豆苷、染料木苷检出限均为20 μg/kg;大豆素、染料木素检出限均为30 μg/kg,加标回收率为81.8%~98.4%,相对标准偏差为1.8%~6.7%。所建立的超高效液相色谱串联质谱是一种高灵敏度、高准确度的测定方法,对保健食品中大豆异黄酮的质量控制提供了参考依据,具有一定的理论意义和应用价值。     

高效液相色谱法测定六种大豆异黄酮及雌马酚的含量

针对豆制品中同时测定大豆异黄酮和雌马酚方法存在的问题,优化并建立了同时测定6种大豆异黄酮和雌马酚的高效液相检测程序,并测定了几种市售豆乳中大豆异黄酮的含量。采用乙腈/甲醇（v/v,5/2）和水为流动相、流速1.0mL/min、检测波长254nm,6种大豆异黄酮和雌马酚均得到良好的分离,相关系数R2分别为0.9998、0.9989、0.9997、0.9986、0.9998、0.9995、0.9999,线性关系良好。该方法准确、灵敏,适合于豆制品中大豆异黄酮及雌马酚的检测。     

色谱条件对HPLC检测大豆中赤霉酸含量的影响

以赤霉酸的保留时间、谱图峰形、标准偏差、分离度、拖尾因子、线性相关系数等为指标,考察流动相的甲醇体积分数及其pH和检测波长对其检测结果的影响。结果表明,HPLC法检测大豆中赤霉酸含量的适宜条件为:色谱柱为C18(250 mm×4.6 mm,5.0μm),进样量为20μL,流动相为pH 4.0的35%甲醇溶液,流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,紫外检测器波长为210 nm。评价指标显示,采用该色谱条件,不同质量浓度赤霉酸(0.2μg/mL和1.0μg/mL)的加标回收率分别为99.52%和99.44%,RSD分别为1.05%和0.90%;不同质量浓度赤霉酸(10μg/mL和50μg/mL)对照品5次重复检测结果的RSD分别为0.37%和0.13%,表明其精密度和准确度均较高。     

偏钒酸钠促进大豆芽异黄酮类物质黄豆苷元和染料木黄酮合成的研究

目的:分析比较偏钒酸钠对大豆芽合成异黄酮类物质-黄豆苷元和染料木黄酮的影响;方法:将大豆种子在不同浓度的偏钒酸钠水溶液(0、200、400、600、800、1000、1200、1400、1600mg/LNaVO3)于28℃萌发6d,第6d收获富钒大豆芽,洗净烘干至恒重,用95%乙醇提取大豆芽中的异黄酮类物质-黄豆苷元和染料木黄素,黄豆苷元和染料木黄素含量由高效液相色谱法测定;结果:分析测定结果表明,当大豆种子在浓度为200～600mg/L偏钒酸钠溶液中于28℃萌发6d,收获的大豆芽中的异黄酮类物质黄豆苷元和染料木黄酮的含量高于同等条件下其他浓度偏钒酸钠萌发液中萌发的大豆芽;结论:综合大豆芽的生长情况及大豆芽中异黄酮类物质-黄豆苷元和染料木黄酮含量等因素,在本实验条件下,萌发富钒大豆芽的适宜偏钒酸钠酸浓度为200～600mg/L,适宜的培育时间为96～120h,适宜温度为28℃。     

不同发酵豆粕中6种大豆异黄酮成分含量的比较研究

目的：比较不同菌种发酵豆粕中6 种大豆异黄酮成分的含量。方法：采用高效液相法测定不同菌种发酵豆粕中6 种大豆异黄酮成分的含量,所用的菌种为酵母菌、乳酸菌、少孢根霉菌和芽孢杆菌。以Alltima C18(150mm × 4.6mm,5μm)为色谱柱,用甲醇- 水为流动相进行梯度洗脱,流速为1mL/min,柱温为35℃,检测波 长为254nm。结果：6 种大豆异黄酮成分在各自线性范围内,峰面积与进样量呈良好的线性关系(r ≥ 0.9998);回收率为97%～102%(RSD ＜ 3%)。结论：以同批豆粕为原料,采用不同菌种制成的发酵豆粕中,大豆异黄酮成分的含量存在明显的变化。     

高效液相法同时测定土茯苓中五种多酚成分

本文建立了土茯苓中五种多酚成分：5-O-咖啡酰莽草酸、落新妇苷、花旗松素、黄杞苷及白藜芦醇的高效液相色谱分析方法。色谱柱为Agilem Zorbax SB Cl8柱（250mm×4．6mmi．d．,5μm）,流动相为乙腈（A）及O．1％醋酸水溶液（B）,线性梯度洗脱程序为0～15mm,16～21％A;15～40min,21～40％A。五种成分线性良好（r〉998）,保留时间相对标准偏差介于0122～0．76%峰面积相对标准偏差介于2．67～4．64%,加标回收率介于96．5～103．7％。对18批土茯苓样品分析结果表明,落新妇苷是土茯苓中最主要黄酮成分,含量范围为5．48～5．75mg/g;花旗松素、黄杞苷、异黄杞苷、落新妇苷及其三种异构体（以落新妇苷计）等七种黄酮总量介于6．72～35．3mg/g,平均含量为18士8．5mg/g;5-O-咖啡酰莽草酸含量也较高,含量范围为0．9～6．29mg/g,该成分在土茯苓中的含量测定为首次报道。但花旗松素和白藜芦醇含量较低,在一些样品中未检测到。     

常见食用豆类中黄酮类化合物含量的测定

以芦丁为标样应用氯化铝显色法、硝酸铝显色法分别测定15种常见食用豆类中的黄酮类化合物总含量,以染料木素做为标样应用直接比色法测定其中食用豆类样品中异黄酮的总含量,利用高压液相色谱法测定常见食用豆类中的4种大豆异黄酮单体成分的含量.结果表明:使用氯化铝显色法进行测定,赤豆、绿豆等7种食用豆类显示含有黄酮类化合物,并且含量最多的赤豆为0.501 mg/g.硝酸铝显色法测定豆类样品黄酮类总合量为0.297～8.844mg/g.直接比色法测定食用豆类中异黄酮总含量为1m994～8.840mg/g.高压液相色谱法测定4种大豆异黄酮单体成分的总含量为0.031-3.345mg/g.