食品中单核细胞增生李斯特菌株的分离及聚合酶链式反应鉴定

目的 建立单核细胞增生李斯特菌的聚合酶链式反应(PCR)检测方法,了解市售食品中单核细胞增生李斯特菌的污染情况.方法 采集成都市市售生畜肉、生禽肉、熟肉制品、水产品、生食蔬菜以及其他熟食等食品样品共135份,采用李氏增菌肉汤(LB1,LB2)进行初增菌,应用选择性分离培养基PALCAM和在TSA-YE平板上进行分离,利用单增李斯特显色平板进行鉴定;根据李斯特菌的特异性基因iap基因设计引物,采用PCR方法检测所有分离的李斯特菌株;根据单增李斯特菌的特异性基因hly基因和prfA基因设计引物检测单核细胞增生李斯特菌株.结果 135份样品中共检出李斯特菌17株,检出率为12.6％;其中单核细胞增生李斯特菌4株,检出率为3.0％.结论 本研究建立的PCR方法具有特异性,本市市售食品不同程度受到李斯特菌的污染.     

部分市售农副产品李斯特菌污染情况调查及毒力基因检测

目的了解上海市闵行区农贸市场食品中李斯特菌的污染情况及其毒力基因的携带情况。方法按国标方法GB/T4789.30—2008《食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》,采用科玛嘉显色培养基,对食品进行李斯特菌的分离、API试剂条进行生化鉴定,PCR扩增进行hly、prfA、plcB、actA、inlA和iap6种毒力基因的检测。结果320份样品中共检出李斯特菌36株,其中单核细胞增生李斯特菌10株;英诺克李斯特菌23株,其余3株。10株单核细胞增生李斯特菌hly、prfA、plcB、iap、inlA、actA6种毒力基因携带率分别为100%、100%、100%、100%、100%和0,即10株菌株actA基因全部缺失。结论本地区农贸市场食品存在李斯特菌的污染,生肉禽类食品中李斯特菌污染比较严重,应加强监督管理;单核细胞增生李斯特菌菌株actA毒力基因均表现为缺失,是否为本地区特性,还有待研究。     

单核细胞增生李斯特菌菌膜形成突变株的筛选

通过对功能和调控基因的研究,探讨单核细胞增生李斯特菌菌膜的形成机制,建立防治该细菌污染食品的方法.使用电转化的方法,将携带转座子Tn917的质粒pTV1-OK转化到单核细胞增生李斯特菌中,诱导转座,获得1 880个突变株,加上前期构建的突变株,使突变库增加到2 200株.使用96孔细胞培养板对随机挑选的1 000余株突变株进行菌膜培养,结晶紫染色后测OD595值.以此值作为菌膜形成量的筛选依据,最终挑选出菌膜形成能力变小的突变株8株.目标突变获得率约8‰.对筛选的菌膜形成量变小的突变株进行荧光显微现察,证实该8株突变株菌膜形成能力弱于野生菌株.通过PCR验证,这8株突变株的基因组中插入了Tn917,这可能是它们的表型发生变化的原因.     

食品中单核细胞增生李斯特菌DNA环介导恒温扩增快速检测方法的建立

基于单核细胞增生李斯特菌胞壁质水解酶iap基因,设计两对特异性引物,利用DNA环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,以扩增副产物焦磷酸镁实时浊度为判定标准,建立食品中单核细胞增生李斯特菌LAMP快速检测方法。结果显示,本LAMP方法特异性强,经过对29株细菌进行检测,所试单核细胞增生李斯特菌均为LAMP阳性,其他菌株为阴性;本LAMP方法对单核细胞增生李斯特菌纯培养菌的检测灵敏度为8CFU/管,对污染食品中单核细胞增生李斯特菌的检测灵敏度为12CFU/管。本研究建立的LAMP检测方法简便快速、结果判断直观。     

糕点加工厂中单增李斯特菌PFGE分型及溯源

选择Asc I制取限制性大片段,对某糕点生产厂生产线上检出的43株单核细胞增生李斯特氏菌进行了限制性大片段脉冲场电泳分析,得到了6种型别,分别命名为A~F型,其中占主导的污染菌株为A型,其次为F型。对主要型别的菌株在生产区的分布和流动情况进行了分析。分析表明A和D型菌株在生产区域呈交叉污染情形;F型菌株的污染线路较为清晰,源头明确。A和F型菌株为驻厂污染源。使用PFGE分型分析污染菌分布与源头能够体现出不同型别菌株在该食品生产中的分布规律,可宏观准确地反映食品生产过程中的单核细胞增生李斯特氏菌污染情况。     

江干区部分食品中单增李斯特菌污染状况分析

目的了解江干区食品中单核细胞增生性李斯特菌污染状况。方法参考国标方法,采用进口显色培养基,对4类食品进行单核细胞增生性李斯特菌分离,生化及血清型鉴定。结果109份样品共检出单核细胞增生性李斯特菌15株,总检出率为13.8%;生肉类、生食果蔬类检出率分别为36.8%、5.9%,熟肉制品和水产品中未检出。15株单核细胞增生性李斯特菌分属2个血清型,1/2b血清型占73.3%,1/2a血清型占26.7%。结论江干区食品中存在单核细胞增生性李斯特菌的污染,特别是生肉。     

广州市市售食品中单核细胞增生李斯特氏菌监测结果分析

目的 分析广州市市售食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染分布情况。方法 2013—2019年共采集16类共4905份食品样品，开展单核细胞增生李斯特氏菌监测分析。结果 按照食品安全国家标准（GB4789.30）中规定的食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法开展检测。单核细胞增生李斯特氏菌检出阳性样品共71份，总体检出率为1.45%。不同食品类别中进口生畜禽肉检出率最高，达到了13.19%， 其次为国产生鸡肉 （5.51%）、水产肉糜（2.50%）、凉拌菜（1.67%）。第1季度检出率最高，为2.14%，最低的是第4季度（0.82%）。不同采样场所中采自网店的食品单核细胞增生李斯特氏菌检出率最高(26.04%)，其次为超市（2.38%），小摊贩所售商品无检出。预包装食品单核细胞增生李斯特氏菌检出率（5.78%）高于散装食品（0.86%）。结论 广州市市售食品存在不同程度的单核细胞增生李斯特氏菌污染，生畜禽肉是主要污染食品，相关政府部门应更有针对性加强监管，预防单核细胞增生李斯特氏菌食源性疾病的发生。     

1例急性淋巴细胞白血病患者感染单核细胞增生李斯特菌病原学及分子分型特征分析

目的对北京市1名急性淋巴细胞白血病患者感染单核细胞增生李斯特菌病例进行病因溯源,对分离到的单核细胞增生李斯特菌进行血清学分型、耐药及分子分型研究。方法对患者不同时期外周血分离的2株单核细胞增生李斯特菌和1株环境涂抹样品单核细胞增生李斯特菌分离株进行血清学分型、耐药性分析、脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分析(MLST)。结果 3株单核细胞增生李斯特菌均为1/2a-3a血清型,耐药结果一致,均对青霉素、氨苄西林、复方新诺明、美罗培南及红霉素敏感,3株菌的PFGE带型一致,MLST型别均为ST155。结论本研究中患者生活环境中存在单核细胞增生李斯特菌的污染情况,高度怀疑患者感染单核细胞增生李斯特菌与其生活环境中分离到的菌株为同一来源。     

食品中3种致病李氏菌MPCR-DHPLC检测方法的建立

应用复合PCR(multiplex PCR,MPCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)技术建立食品中单核细胞增生李斯特菌、绵羊李斯特菌和英诺克李斯特菌的快速高通量检测方法。根据单核细胞增生李斯特菌、绵羊李斯特菌和英诺克李斯特菌的特异基因序列分别设计引物,MPCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以94株参考菌株做特异性实验,并开展了重现性检测实验。MPCR-DHPLC方法同步检测到单核细胞增生李斯特菌、绵羊李斯特菌和英诺克李斯特菌的特异性阳性吸收峰,未检测到李斯特菌属其他近源种和非近源种参考菌株的阳性吸收峰,且重现性良好。该方法具有很好的特异性,可以快速、准确、高通量地检测食品中单核细胞增生李斯特菌、绵羊李斯特菌和英诺克李斯特菌,是食品微生物快速检测的新技术。     

食源性单核细胞增生李斯特菌的重金属镉抗性及其与抗生素耐药性的关系研究

研究了不同血清型食源性单核细胞增生李斯特菌对重金属镉的抗性及其与抗生素耐药性之间的关系。采用琼脂稀释法检测单核细胞增生李斯特菌对重金属镉的抗性,与菌株的抗生素耐药性进行比较分析。结果表明,73株实验菌株中,36株具有镉抗性,总体镉抗性率达49.3%(36/73)。分离到的5株多重耐药单核细胞增生李斯特菌均为镉抗性菌株,表明食品生产、加工及其储存环境中这种同时携带多重耐药性与重金属抗性的微生物从食品链及有关环境进入到人类,就会对人类健康构成构成潜在威胁。     

单核细胞增生李斯特菌生物被膜交叉污染评估进展

单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）（以下简称单增李斯特菌）是一种引发李斯特菌病罹患者高住院率和高死亡率的食源性致病菌,其可在冷、热、干燥和消毒剂处理等不利条件下黏附于食品接触表面并进一步形成难以清除的生物被膜。交叉污染是单增李斯特菌传播的主要途径,生物被膜的形成提高了单增李斯特菌在工厂和厨房环境持续传播和污染的可能性,可引发相关食源性疾病暴发和食品召回等,从而造成健康和经济损失。本文首先介绍了单增李斯特菌生物被膜的胞外聚合物组分,并从外部生存环境和内部微生物自身因素两方面总结了影响单增李斯特菌生物被膜交叉污染转移的因素;进一步重点从研究类型和细菌收集两方面阐述了生物被膜交叉污染的相关研究进展;最后,归纳总结了针对单增李斯特菌生物被膜形成早期的防控策略,展望该领域的研究前景,以期为科学评估和早期精准防控单增李斯特菌生物被膜交叉污染的潜在风险提供理论依据。     

基于群体感应的单增李斯特菌生物膜形成与控制研究进展

单增李斯特菌的生物膜结构可以赋予细菌对消毒剂更强的耐受性,这使得如何有效清除其生物膜成为了食品加工业的难题。群体感应与细菌生物膜的形成、毒力侵袭特性和应激响应等生理特性密切相关。因此,本文概述了单增李斯特菌生物膜的特性,重点从群体感应（呋喃糖基硼酸二酯系统和寡肽自诱导因子系统）角度阐述了单增李斯特菌生物膜的形成机制,并综述了当前控制单增李斯特菌生物膜形成的可行方法及植物提取物作为群体感应抑制剂的研究现状。以期为预防和控制单增李斯特菌生物膜的形成提供新思路。     

单增李斯特菌生物膜形成及其调控机制研究进展

单增李斯特菌是一种重要的食源性致病菌,极易在食品接触表面形成难以清除的生物膜,导致食品持续性的污染。细菌生物膜在形成量、活细菌数量、微观结构等方面受到环境因素及菌株自身特性的影响。在单增李斯特菌的生物膜形成过程中,多种调控机制发挥着重要的作用。该文介绍了细菌生物膜的形成过程及影响单增李斯特菌生物膜形成的重要因素,简述了与单增李斯特菌生物膜相关的基因调控、胞外聚合物质分泌与群体感应系统调节的研究进展,有助于更好地理解其生物膜形成的复杂生理过程,为单增李斯特菌生物膜的污染及防控提供一定参考。     

食品加工环境胁迫因素对单核细胞增生李斯特菌生物膜形成的影响研究进展

单核细胞增生李斯特菌（以下简称单增李斯特菌）生物膜的生长可导致反复的食物污染。食品加工储藏常用的冷藏、干燥、酸处理以及消毒剂处理等使微生物长期处于胁迫环境下，对生物膜的形成产生影响。本文总结了常见的食品加工胁迫因素对单增李斯特菌生物膜形成的影响，其中重点介绍消毒剂处理对单增李斯特菌生物膜形成的影响，同时从膜流动性相关的适应策略、生物膜形成相关蛋白和基因调控表达的角度阐述胁迫条件下单增李斯特菌生物膜的形成机制。胁迫环境下单增李斯特菌生物膜形成的研究有助于揭示真实环境下其生物膜的形成及变化规律；充分考虑环境因素设定清洁、消毒标准有利于降低食源性致病菌传播的潜在风险。     

食品接触表面生物被膜形成机制及防控方法研究进展

食源性致病菌的生物被膜是固着在食品接触表面上形成的具有一定空间组织的多细胞群体结构。因生物被膜具有极强的黏附性和抗逆性,常规消杀手段难以对其进行有效防控,造成食品安全隐患并严重威胁消费者身体健康。本文归纳了近年来国内外食源性致病菌生物被膜在形成机制及防控方法方面的相关研究。以生物被膜黏附性提高、菌体状态改变和抗逆性增强的3个主要特点为核心,总结讨论了细菌的长链附属结构、群体感应系统及胞外聚合物在生物被膜的形成过程中的作用,并将生物被膜的防控策略分为物理、化学和生物法3类,分别分析了各类方法的作用原理及优缺点,旨在为食品领域生物被膜的高效防控方法的开发提供理论指导,以期更好地实现食品微生物的安全有效防控。     

An Ecological Perspective of Listeria monocytogenes Biofilms in Food Processing Facilities

Listeria monocytogenes can enter the food chain at virtually any point. However, food processing environments seem to be of particular importance. From an ecological point of view, food processing facilities are microbial habitats that are constantly disturbed by cleaning and sanitizing procedures. Although L. monocytogenes is considered ubiquitous in nature, it is important to recognize that not all L. monocytogenes strains appear to be equally distributed; the distribution of the organism seems to be related to certain habitats. Currently, no direct evidence exists that L. monocytogenes-associated biofilms have played a role in food contamination or foodborne outbreaks, likely because biofilm isolation and identification are not part of an outbreak investigation, or the definition of biofilm is unclear. Because L. monocytogenes is known to colonize surfaces, we suggest that contamination patterns may be studied in the context of how biofilm formation is influenced by the environment within food processing facilities. In this review, direct and indirect epidemiological and phenotypic evidence of lineage-related biofilm formation capacity to specific ecological niches will be discussed. A critical view on the development of the biofilm concept, focused on the practical implications, strengths, and weaknesses of the current definitions also is discussed. The idea that biofilm formation may be an alternative surrogate for microbial fitness is proposed. Furthermore, current research on the influence of environmental factors on biofilm formation is discussed.     

食品加工过程中细菌生物被膜的危害及控制

生物被膜中的微生物生活在一个由胞外聚合物（EPS）形成的环境中,它的形成是微生物生长过程中的一个保护模式,允许细胞在恶劣的环境中生存并分散到新的环境中。食品加工过程中有害菌形成的生物被膜对食品工业的危害极大,可使微生物残存增加,加工设备无法严格清洗、消毒,导致产品受到污染。该文在收集、研究现有文献的基础上归纳介绍了生物被膜的特点及其形成过程和形成机制,概述了生物被膜的危害、控制及检测方法,旨在提高人们对生物被膜的认识,推动该领域的研究发展。     

群体感应系统对单增李斯特菌生物被膜形成的影响

以单增李斯特菌（Listeria monocytogenes）为研究对象,分析Agr群体感应系统和LuxS/AI-2系统对其生物被膜形成的调控作用。通过同源重组对LMB33426菌株进行agrD基因以及luxS基因的无痕敲除,比较野生菌株与agrD、luxS基因缺失菌株的生物被膜特性差异。结果表明,与野生株相比,ΔagrD突变株和ΔluxS突变株的生物被膜形成能力下降;ΔagrD突变株的疏水性显著下降,在37 ℃下的泳动能力较野生株增强;群体感应系统基因敲除对菌株的耐药性没有产生较大影响。基因缺失株的构建为进一步研究群体感应系统对单增李斯特菌生物被膜形成的调控机制提供参考,同时为单增李斯特菌的预防控制奠定了基础。     

单核增生李斯特氏菌生物被膜的形成及控制

研究温度、接种量对单核增生李斯特氏菌(Listeri amonocytogenes)生物被膜形成的影响和肉制品加工企业中常用的消毒方法对单增李斯特氏菌生物被膜的去除及抑制作用.研究结果表明,单核增生李斯特氏菌标准菌株生物被膜的形成主要受到温度的影响,接种量对生物被膜形成的影响只在特定的温度范围内显著.以不同的常规消毒方法对模拟生产车间条件培养生长1d的单增李斯特氏菌生物被膜进行处理,结果发现不同方法对生物被膜去除效果的差异性随着处理天数的增加而增加,且各方法对生物被膜的去除作用与抑制作用无关.     

群体感应抑制剂调控食源性微生物生物膜形成的研究进展

食源性微生物的生物膜是附着在固体表面上形成的具有空间组织的群落,因其能够附着在食品工业环境中的生物或非生物表面,且对消毒剂和抗菌剂能产生抗药性,通常难以控制,被认为是造成设备损坏、能源成本增加、食物变质和引起食源性疾病的原因之一,给食品工业带来了巨大的挑战。研究发现群体感应在生物膜的形成中起至关重要的作用,可以通过阻断群体感应系统来控制生物膜的形成。因此,群体感应抑制剂可以作为控制生物膜形成的新策略,在食品工业中对控制生物膜的形成具有巨大潜力。本文综述了生物膜的形成、群体感应系统及其对生物膜的调控作用,介绍了群体感应抑制剂的调控机制及其分类,为通过群体感应抑制剂调控生物被膜的形成提供研究思路。