海蜇胶原蛋白肽的生物活性研究

以海蜇加工下脚料为原料提取胶原蛋白,酶解制备胶原蛋白肽并对酶解液进行抽滤分离,并对所得不同分子量的胶原蛋白肽进行生物活性研究。结果表明:抽滤分离到四种不同分子量的胶原蛋白肽:分子量>10 kDa(JCP1)、分子量3~10 kDa(JCP2)、分子量1~3 kDa(JCP3)和<1 kDa(JCP4)。生物活性研究表明,JCP1具有最强的超氧阴离子自由基清除能力和酪氨酸酶双酚酶抑制效果,其IC₅₀值分别为22.6和11.96 mg/mL,JCP1对酪氨酸酶的抑制类型为可逆混合竞争型抑制;JCP3具有最强的还原力、羟自由基、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除能力和血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性,其IC₅₀值分别为14.9、2.21、0.61和15.8 mg/mL;JCP4具有最强的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除能力,其IC₅₀值为28.3 mg/mL。     

海洋胶原蛋白肽的制备及生物活性研究进展

海洋胶原蛋白肽由海洋胶原蛋白水解而成,其分子量小,易于人体吸收。在众多提取方法中,生物酶法最为温和、安全和专一。海洋胶原蛋白肽具有抑制血管紧张素转化酶、抗氧化、抑制酪氨酸酶等多种生物活性,其作为一种新的具有高度生物安全性原料,可广泛应用于食品、药品、化妆品等领域,开发前景非常广阔。     

大米谷蛋白模拟酶解释放生物活性肽的研究

目的 通过对大米谷蛋白的模拟酶解及生物信息学分析, 评价大米谷蛋白作为生物活性肽前体的潜在价值。方法 首先, 利用计算机在UniProt蛋白质数据库中查找大米谷蛋白的序列, 使用BIOPEP活性肽数据库对所选的3条序列进行模拟酶解, 并同时对酶解产生的肽片段数量、分子量及其氨基酸组成进行统计分析。然后, 将模拟酶解产生的肽片段序列与BIOPEP数据库中已有记载的生物活性肽序列进行对比, 筛选出具有生物活性的肽片段。最后, 对模拟酶解产生的生物活性肽进行致敏性和毒性预测。结果 胃蛋白酶和木瓜蛋白酶是最适合水解大米谷蛋白的两种酶。大米谷蛋白酶解可产生许多生物活性肽, 其中出现频率最高的是二肽基肽酶Ⅳ (dipeptidyl peptidase-IV, DPP-IV)抑制肽和血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme, ACE)抑制肽。大米谷蛋白本身无潜在致敏性, 且其经过计算机模拟酶解得到的DPP-IV抑制肽和ACE抑制肽均无细胞毒性。结论 大米谷蛋白可作为酶解释放DPP-IV抑制肽和ACE抑制肽的良好前体, 本研究为大米谷蛋白酶解生产生物活性肽提供了理论指导。     

预处理对胶原蛋白水解和血管紧张素转化酶抑制肽段释放的影响

以胰蛋白酶为工具酶,研究短时热处理、超高压处理对胶原蛋白水解和血管紧张素转化酶（angiotensinconverting enzyme,ACE）抑制肽段释放的影响。结果表明：热处理可显著促进胰蛋白酶对胶原蛋白的水解和ACE抑制活性肽段释放,超高压处理组水解物水解度（degree of hydrolysis,DH）与无处理组无显著差异,ACE抑制活性显著低于无处理组。水解物DH和ACE抑制活性关系研究显示,胰蛋白酶水解胶原蛋白过程中,水解度小于5%时,ACE抑制率随水解度呈明显上升趋势,水解度大于5%后,其上升趋势不再明显。肽谱分析进一步证明热处理可有效促进胶原蛋白的水解,超高压处理可改变胰蛋白酶作用位点。热处理组水解物序列分析显示,获得序列均来源于胶原蛋白三螺旋区域,且大部分序列都具有潜在的ACE抑制活性。说明短时热处理可以有效破坏胶原蛋白的三螺旋结构,促进ACE抑制肽段的释放。     

仿刺参胶原蛋白源二肽基肽酶抑制肽虚拟筛选及分子对接研究

目的 采用生物信息学和分子对接方法筛选仿刺参胶原蛋白来源的二肽基肽酶(dipeptidyl peptidase-IV, DPP-IV)抑制肽。方法 以仿刺参胶原蛋白序列为对象,进行生物信息学分析和计算机辅助虚拟酶解, 基于生物毒性、致敏性、水溶性及吸收、分配、代谢、排泄及毒性(absorption, distribution, metabolism, excretion, toxicity, ADMET)预测, 筛选得到6条具有潜在生物活性的寡肽, 氨基酸序列分别为CD、CQ、CS、GR、SM、MDG, 进一步通过分子对接分析肽段与DPP-Ⅳ的结合活性, 并分析其结合位点及方式。结果 生物信息学分析表明仿刺参胶原蛋白是生物活性肽的潜在优良来源, 经木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶及模拟胃肠道虚拟水解后能够释放出DPP-Ⅳ抑制肽; 分子对接表明俩条新肽段CS、SM通过氢键、疏水相互作用分别与DPP-IV的S1、S2活性口袋结合。结论 本研究提供了一种快速筛选刺参胶原蛋白中DPP-IV抑制肽的方法。     

酪蛋白源ACE抑制肽的评价方法和研究进展

血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)在血压调节方面起着重要作用。近年来,ACE抑制肽已成为生物活性肽研究领域的热点。文章综述了ACE抑制肽的作用机制、评价方法和酪蛋白源ACE抑制肽的国内外研究进展。     

ACE抑制肽的生理功能和研究进展

血管紧张素转化酶(ACE)在人体血压调节方面起着重要的生理作用.近年来天然食品来源的ACE抑制肽已成为生物活性肽研究领域的热点.ACE抑制肽通过抑制ACE活性起降血压作用.文章综述了ACE抑制肽的作用机制、结构特点、评价方法和研究进展.     

源于皱纹盘鲍裙边胶原蛋白ACE抑制肽的制备

为了提高皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)裙边的利用率,以其为原料纯化胶原蛋白,并通过胰蛋白酶和胃蛋白酶共酶解制备血管紧张素转换酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)抑制肽。酶解液经超滤、Superdex^TM peptide10/300GL凝胶柱和高效液相色谱分离纯化,获得了3条来源于皱纹盘鲍胶原蛋白的肽段SGEVGQ、QRGPAGAQGPQ和GPPGPAGAR。其中结合能力最强的肽为GPPGPAGAR,对ACE的IC50值为177.1μmol/L,分子对接结果显示其主要作用于ACE的S1活性口袋,抑制模式与赖诺普利类似,并且经模拟胃肠液消化后仍能发挥较强的ACE抑制作用。本研究通过酶解皱纹盘鲍裙边胶原蛋白制备ACE抑制肽,为鲍鱼裙边的精深加工和ACE抑制肽的开发提供了参考。     

鱿鱼皮胶原蛋白肽生理功能的研究进展

鱿鱼皮是一种高蛋白低脂肪的物质,蛋白组成与本体基本一致,而且胶原蛋白含量相对较高,其丰富的营养价值已经被大家所认可。主要介绍了国内外对鱿鱼皮蛋白肽的生物活性功能,如抗氧化活性、ACE抑制活性、抑制肿瘤细胞活性以及抗衰老等的研究,为鱿鱼皮蛋白肽的开发利用提供参考。     

食品蛋白降血压肽及其研究进展

食品降血压肽已成为生物活性肽研究领域的热点。综述血管紧张素转化酶对血压的调节作用、降血压肽的降血压机理和降血压肽结构与抑制ACE的关系，介绍了食品降血压肽的制备及分离纯化方法。     

海洋胶原蛋白活性肽的研究进展

胶原蛋白是生物体内的重要蛋白质,是结缔组织的主要蛋白质成分。疯牛病(B S E)、口蹄疫(F M D)、禽流感等疾病的发生使人们从陆生源动物组织获取胶原蛋白及其肽的途径受阻。我国渔业资源极其丰富,海产品加工的下脚料含有丰富的胶原,与陆生胶原肽相比海洋胶原蛋白肽具有许多独特的生理功能和理化性质。近二三十年来海洋胶原蛋白及其酶解产物胶原活性多肽取得很大进展,目前海洋胶原蛋白肽也已经成为国内外研究的热点。本文将对海洋胶原蛋白及其活性肽的结构、性质、提取方法以及胶原活性多肽生理活性和发展前景等的研究进展作一综述。     

酶解法制备鲟鱼皮活性肽条件优化及抗氧化能力

为提高从鲟鱼皮中提取的生物活性肽含量,以鲟鱼皮胶原蛋白为主要材料,以蛋白酶酶解后的肽得率为 主要考察指标,在单因素试验基础上利用正交试验分析加酶量、酶解温度、酶解时间对鲟鱼皮活性肽得率的影 响,并优化酶解条件。在此基础上以新鲜猪肉为模型,考察鲟鱼皮活性肽溶液处理对猪肉组织抗氧化酶（总超氧 化物歧化酶（total-superoxide dismutase,T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、 谷胱甘肽S转移酶（glutathione S-transferase,GST））活力的影响。结果表明：酶解鲟鱼皮胶原蛋白的最适 酶为碱性蛋白酶,最佳工艺条件为加酶量12 000 U/g、酶解温度60 ℃、酶解时间4 h,在此条件下,肽得率为 （12.59±0.98）%;鲟鱼皮活性肽可以提高猪肉组织T-SOD、GSH-Px和GST活性,具有抗氧化功效。     

海棒槌胶原蛋白的酶解工艺及其产物清除自由基活性的研究

本文研究了低值的芋参科海参--海棒槌(Paracaudinachinensvar.)的胶原蛋白肽的制备、分离纯化及其清除自由基的活性。利用菠萝蛋白酶对海棒槌胶原进行酶解,通过正交试验,确定菠萝蛋白酶水解海棒槌胶原蛋白的最佳酶解条件为:酶解温度40℃,加酶量240U/ml,底物浓度18mg/100ml(以羟脯氨酸计),pH5.2,酶解时间为4h。在此试验条件下所得产物对超氧阴离子自由基的清除率可达到52.20%。采用超滤和SephadexG-25凝胶柱对酶解液进行分离纯化,得到清除超氧阴离子和羟基自由基能力较强的组分。     

阿胶活性肽的结构鉴定及活性筛选

利用液相色谱-串联质谱联用技术鉴定阿胶模拟胃肠道消化产物中肽的结构,并通过分子对接技术从中筛选潜在的降血压、抗老年痴呆和抗肿瘤的活性肽。结果表明,从阿胶消化产物中获得519 种活性肽,其分子质量在661.4～2 851.4 Da之间,主要为胶原蛋白和血红蛋白的酶解产物;获得最具潜力的降血压肽KGETGLR、抗老年痴呆肽SGLDGAKG和抗肿瘤肽ADGVAGPK;氢键相互作用和静电相互作用在阿胶肽发挥降血压、抗老年痴呆和抗肿瘤活性中都起着重要的作用。     

鹅骨胶原蛋白及肽对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及向成骨分化的影响

本实验通过研究鹅骨胶原蛋白、含钙胶原蛋白、胶原肽、含钙胶原肽对大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖及向成骨细胞(Osteoblast,OB)分化的影响,阐述鹅骨胶原蛋白及多肽对骨质疏松的作用机制。采用MTT(噻唑蓝)法测定鹅骨胶原蛋白及多肽对BMSCs增殖的影响;碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)染色、ALP活性测定、茜素红染色和骨钙素(BGP)分泌量测定分析BMSCs成骨分化能力。结果表明,相较于对照组,试验组可促进BMSCs的增殖,第14d ALP染色试验组ALP染色阳性率显著高于对照组(p0.05),第7 d和第14 d鹅骨胶原蛋白及肽可显著提高ALP的活性表达(p0.05),第21 d茜素红染色试验组钙结节个数相较于对照组显著增加(p0.05),骨钙素分泌量试验组显著高于对照组(p0.05)。由此表明,大分子胶原蛋白、含钙大分子胶原蛋白、小分子胶原多肽、含钙小分子胶原多肽均可促进BMSCs的增殖及向成骨细胞分化,以含钙小分子胶原多肽作用效果最佳。     

The molecular location of Ehrlich chromogen and pyridinoline cross-links in bovine perimysial collagen

Collagenous peptides containing the Ehrlich chromogen (EC), a trifunctional cross-link of proposed pyrrolic structure, were selectively isolated from a tryptic digest of bovine perimysial collagen by coupling to a diazotised support. Peptides containing pyridinoline (Pyr), another trifunctional cross-link but based on a 3-hydroxypyridinium ring, were isolated from the uncoupled material. The isolated cross-linked peptides were purified by chromatographic procedures and subsequently characterised by amino acid and sequence analyses. EC occurred in stoichiometric amounts in three-chained peptides derived from type I collagen cross-link regions. In contrast, Pyr was found in non-stoichiometric amounts in three-chained peptides where two of the chains were identified as the 76 amino-terminal residues of the α1 (III) collagen chain. The third chain in these Pyr cross-linked peptides was derived from the C-terminal helical cross-link region of either type III collagen or the corresponding region of type I collagen, with the former region predominating. These findings suggest that EC and Pyr cross-links of perimysial collagen are associated mainly with type I and type III collagen respectively.     

模拟胃肠消化对羊皮胶原肽抗氧化活性的影响及其消化保护分析

为明确胶原蛋白肽在体外消化后抗氧化活性的变化情况,探讨活性肽消化保护的必要性,本实验以羊皮为原料,制备了分子质量集中在低于1 kDa的羊皮酶解胶原肽,研究胶原肽的基本组成和结构特性与抗氧化活性的关系,评价体外模拟消化前后酶解胶原肽抗氧化活性的变化,结合液相色谱-质谱分析和计算机模拟消化分析胶原肽在消化过程中肽段的变化,并采用肠溶胶囊对胃消化阶段的胶原肽进行保护。结果表明,胶原肽富含脯氨酸,二级结构主要为无规卷曲和β-片层,有利于胶原肽抗氧化活性的发挥。胶原肽的还原力和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率在消化后下降,而2,2’-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS）阳离子自由基清除率上升,原因是DPPH自由基和ABTS阳离子自由基对抗氧化氨基酸的敏感度不同。此外,胶原肽在胃消化阶段的抗氧化活性明显降低,肠溶胶囊的使用对胶原肽的活性具有明显的保护作用。本研究结果在一定程度上为抗氧化活性肽的消化保护提供了实验依据。     

超声辅助碱性蛋白酶提取鸡爪胶原蛋白肽理化性质及功能特性

以超声波辅助碱性蛋白酶提取所得鸡爪胶原蛋白肽作为实验材料,首先研究鸡爪胶原蛋白肽的理化特性（外观色泽、等电点、分子质量分布、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、氨基酸组成及水解度）,进一步对其起泡性和起泡稳定性、乳化性和乳化稳定性等功能特性进行研究。结果表明：鸡爪胶原蛋白肽的分子质量分布范围小于α2-链,小分子质量肽段比例较高;氨基酸种类丰富,甘氨酸和脯氨酸在总氨基酸含量中占比最高;优化提取的鸡爪胶原蛋白肽水解度约28.65%,起泡性和起泡稳定性高达133.33%和126.67%,且具有较好的乳化性和乳化稳定性。     

利用扇贝壳制备胶原螯合钙的研究

为了有效利用废弃扇贝壳,提高贝类加工废弃物的附加值,采用双酶法水解猪皮制得胶原多肽,并利用灰化的扇贝壳制备胶原螯合钙。优化的胶原螯合钙制备条件是:pH8,胶原多肽与氯化钙的比为0.3g∶7mL,反应时间50min。经95%乙醇沉淀得到胶原螯合钙产品。用红外光谱法对胶原螯合钙进行表征,结果表明胶原多肽的氨基和羧基都参与了与Ca2+的配位,找到Ca-N伸缩振动峰,说明经酶水解得到的胶原多肽成功螯合了贝壳中的钙离子,使该产品既具有胶原多肽增加骨胶原韧性的作用又具有补钙的特性。