丁草胺人工抗原及抗体制备研究

以除草剂丁草胺、巯基丙酸为原料,合成丁草胺半抗原,用氢核磁共振、电喷雾质谱、红外光谱方法进行鉴定;通过活泼酯法将半抗原与载体蛋白偶联制备丁草胺人工抗原,用紫外光谱法对其鉴定;免疫动物后,间接竞争ELISA检测鉴定抗体。结果表明,巯基丙酸与丁草胺连接生成半抗原,半抗原被连接到载体蛋白上,丁草胺人工抗原合成成功,获得了丁草胺小鼠抗血清。棋盘滴定法确定包被抗原工作浓度为3μg/ml,抗血清稀释倍数为32000倍。建立了间接竞争ELISA标准曲线,丁草胺IC50为1.44μg/ml,检测限为0.47μg/ml。     

抗环丙沙星抗血清制备及其ELISA检测

采用碳二亚胺法和混和酸酐法,将环丙沙星与BSA 和OVA 分别合成免疫抗原(ciprofloxacin-BSA)和包被抗原(ciprofloxacin-OVA)。利用合成的免疫抗原免疫家兔,获得了抗环丙沙星的特异性抗血清。在此基础上建立环丙沙星酶联免疫检测方法(ELISA),其线性范围为0.05～10μg/ml (r=0.998)。在样品检测中与HPLC 方法具有良好的相关性。     

单扫描示波极谱法连续测定榛蘑中的锌、铁、锰

本文对单扫描示波极谱法同时测定榛蘑中的锌、铁、锰微量元素的含量进行了研究,选用0.4mol/L乙二胺-2.5×10-3mol/L三乙醇胺-0.1mol/L硫氰酸钾为底液。锌、铁、锰峰电位分别为-1.46V、-1.69V、-1.78V(υs.SCE),线性范围:0.2～1.2μg/ml Zn、0.2～1.6μg/ml Fe、0.04～0.5μg/ml Mn,锌、铁、锰的检出限分别为0.015μg/ml、0.024μg/ml、0.018μg/ml,回收率为96.6%～103.3%。此方法准确、简便、快速、灵敏度高。     

蝉拟青霉代谢产物抑制单胺氧化酶和抗肿瘤活性研究

以单胺氧化酶(MAO)为靶标对蝉拟青霉RCEF0947菌株发酵液和菌丝体甲醇乙酸乙酯提取物体外抑制单胺氧化酶活性进行研究,结果发现,RCEF0947 发酵液提取物对MAO-A 具有较强的抑制活性,其对单胺氧化酶MAOA的半数抑制浓度(IC50)为272.97μg/ml。而对于MAO-B 的抑制活性而言,当样品反应浓度为400μg/ml 时,发酵液和菌丝体提取物对MAO-B的IC50 分别为538.37μg/ml 和509.36μg/ml,经统计分析二者之间无显著性差异(p ＞ 0.05)。以中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株作为模型,用Resazurin 法检测生长抑制率,对RCEF0947 菌株发酵液和菌丝体提取物进行体外抗肿瘤活性实验,结果发现,两种提取物均具有较强的体外抗肿瘤活性,两种提取物对CHO 细胞株的IC50 分别为122.35μg/ml 和171.93μg/ml。     

抗羟基红花黄色素A抗血清的制备

目的:通过人工抗原的构建,制备抗羟基红花黄色素A(HSYA)的特异性抗血清.方法:采用直接合成法将HSYA与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋A(OVA)的共价偶联,分别合成免疫抗原HSYA-BSA和包被抗原HSYA-OVA,并进行相关鉴定:用合成的人工抗原免疫家兔,制得抗羟基红花黄色素A的特异性抗血清,采用酶联免疫法鉴定.结果:根据建立的标准曲线方程计算得HSYA和BSA的结合比是50:1,HSYA和OVA的结合比是112.8:1:理想的包被抗原的浓度为4μg/ml,抗血清和二抗的工作浓度分别为1:200和1:2000;交叉反应实验表明,该抗体与芦丁、金合欢素的反应率均接近于零;亲和性实验结果表明,在0.25～2μg/ml浓度范围内,抑制率与浓度呈线性关系,线性回归方程为y=-16.2131gx+102.47(r=0.9575),抑制中浓度IC<,50>为1.5μg/ml,最低检测限为0.250μg/ml.结论:通过直接偶联法可以成功制备出具有抗羟基红花黄色素A的特异性抗血清.     

高效液相色谱法测定黄酒中生物胺的含量

本文建立了测定酿造酒(黄酒)中生物胺含量的高效液相色谱法,优化的测定条件为:样品经0.4mol/L高氯酸提取后用丹磺酰氯柱前衍生,流动相为乙腈和水,采用梯度洗脱,流速为0.8ml/min,二极管阵列检测器,检测波长为254nm。该方法检测限为:尸胺、组胺和亚精胺为0.05μg/ml,酪胺为0.1μg/ml,精胺为0.25μg/ml。线性范围为2.0～40.0μg/ml(R>0.99),回收率分别为尸胺96.6%、组胺101.94%、酪胺101.90%、亚精胺98.65%、精胺107.4%。首次采用该法测定了黄酒中的生物胺,结果表明黄酒中生物胺的种类及含量因酒的品种而异,5种生物胺平均总量为114.45μg/ml,变异范围为39.27～241.07μg/ml。     

GC-MS定量分析传统小麦酱中的挥发性成分

采用同时蒸馏萃取和气-质联用技术,对传统小麦酱中的挥发性成分进行提取、定性和定量分析。分析结果通过计算机联机检索,结合计算的保留指数和对照标准品,确定所含化合物的种类,采用面积归一化法确定相对含量,采用内标法确定在传统小麦酱中的含量。共鉴定出113种化合物,占色谱流出组分总量的95.368%,在传统小麦酱中的含量为263.049μg/g,包括醛类10种(11.862μg/g)、酯类25种(6.955μg/g)、酸类20种(140.596μg/g)、烃类14种(1.934μg/g)、醇类9种(5.666μg/g)、杂环类化合物19种(53.938μg/g)、酮类7种(1.406μg/g),其他化合物9种(40.692μg/g)。     

乳过氧化物酶体系在冷却猪肉保鲜中的应用研究

为了评定乳过氧化物酶体系对冷却猪肉的保鲜效果,对冷却鲜猪肉分别采用浓度为3μg/ml的乳过氧化物酶体系(LPS)、4μg/ml的LPS、40μg/ml的乳酸链球菌素(Nisin)、3μg/ml的LPS+40μg/ml的Nisin、4μg/ml的LPS+40μg/ml的Nisin等5组不同保鲜剂处理,以蒸馏水处理做对照,测试猪肉在3±0.5℃保存条件下感官指标、理化指标和细菌总数的变化。结果表明:经LPS处理的冷却猪肉在贮藏过程中的感官指标、理化指标和细菌总数的变化比对照组缓慢,差异达到极显著水平(p<0.01),LPS可有效延长冷却猪肉的保鲜期;LPS处理比Nisin处理的保鲜效果更好,差异达到显著水平(p<0.05);当LPS与Nisin复配时,可以达到更好的保鲜效果,猪肉的保鲜期可达20d以上;Nisin可以减轻LPS导致的猪肉脂肪氧化。     

葡萄籽原花青素聚合度与自由基清除能力关系的研究

采用DPPH·及化学发光法,研究葡萄籽原花青素不同聚合度组分的自由基清除能力。结果表明,原花青素对DPPH·的清除能力优于VC、VE及BHT,半抑制浓度分别为:原花青素1.8μg/ml、VC2.5μg/ml、VE6.3μg/ml、BHT3.5μg/ml。对O2·的清除能力优于VE而与VC相近。以质量浓度(μg/ml)表示时,原花青素对DPPH·的清除作用与聚合度无关,对HO·、O2·的清除能力随着聚合度的升高而下降。但以摩尔浓度(μmol/L)表示时,原花青素的自由基清除能力基本上随着聚合度的增加而提高。原花青素的抗氧化和自由基清除能力可能与所处的溶剂环境有关,水相体系中原花青素分子中单位酚羟基的活性随着聚合度的增加而下降。     

何首乌中二苯乙烯苷的体外抗氧化研究

从传统抗衰老中药何首乌中提取、分离、纯化得到不同组分:乙醇粗提物、大孔吸附树脂层析样品及二苯乙烯苷晶体,并运用HPLC-MS、NMR、X-衍射对二苯乙烯苷晶体进行了分析鉴定。对照白藜芦醇分别对三组分的抗氧化清除自由基性能进行了测定。包括还原能力、亚油酸体系抗氧化性能以及清除DPPH自由基、清除羟基自由基、清除超氧阴离子能力。结果表明:不同纯度的二苯乙烯苷均具有还原性,抗氧化及清除自由基性能,其中以二苯乙烯苷纯品最强。其半抑制率分别为:DPPHIC508.06μg/ml;羟基自由基IC502.75μg/ml;超氧阴离子IC500.57μg/ml;以上各指标均略高于白藜芦醇。     

催化动力学光度法测定腐竹中的痕量甲醛

基于在硫酸介质中,甲醛对高碘酸钾氧化甲基红有较强的催化作用,建立测定腐竹中痕量甲醛的新方法。研究影响催化褪色反应速度的条件。在最优化条件下,甲醛浓度在2.25 × 10-4～1.35 × 10-2μg/ml 范围内与吸光度呈良好的线性关系,方法的检出限为4 × 10-5μg/ml。对浓度为0.0041μg/ml 的甲醛标准溶液进行11 次平行测定,得相对标准偏差(RSD)为0.1%。该法具有灵敏度高、选择性好等特点。用于腐竹中痕量甲醛的测定,回收率为93%～106%,结果令人满意。     

白酒中甜蜜素检测方法的研究

本实验采用高效液相色谱法(HPLC)检测白酒中甜蜜素含量,获得了空白白酒以及不同甜蜜素浓度酒样的高效液相色谱图。根据甜蜜素浓度和峰面积的线性关系建立了标准曲线,并求出回归方程：y ＝ 0.0008x+0.0147(R2 ＝ 0.9991);对比空白酒样和添加甜蜜素的酒样,差异明显,添加甜蜜素的酒样在7～8min 时有明显的吸收峰,其中甜蜜素浓度为100μg/ml 的酒样峰面积最大,随着甜蜜素浓度的减小,峰面积也逐渐减小;将不同甜蜜素浓度的酒样进行回收率和精密度分析,得回收率范围为97.04%～115%,经重复测定,得到RSD 为4.1%,定性检测下限为1.5 μg/ml,定量检测下限为5.0μg/ml。     

化学发光法测定原花青素的研究

本文建立了测定葡萄籽提取物中原花青素的流动注射-抑制化学发光分析方法。利用原花青素还原ClO-,抑制ClO--Luminol体系的化学发光,在碱性条件下,其抑制程度的大小与原花青素的浓度在一定范围内呈现良好的线性关系。该方法线性范围为0.08～19.0μg/ml,检出限为0.06μg/ml,11次测定的RSD为1.2%。本法对样品可直接进行测定,不需特殊处理。     

茶多酚的流动注射共振光散射法测定

为了建立测定茶多酚(TP)的流动注射- 共振光散射分析的新方法,在pH7 的NaAc-NH4Ac 缓冲溶液中,通过测定PbTP 微粒的共振散射光强来定量测定TP 的量。在此利用TP 与Pb2+ 生成的沉淀反应,建立了流动注射- 共振光散射联用技术测定TP 的新方法。测定TP 的线性范围为20～400μg/ml,方法的检出限为6.62μg/ml。建立的分析方法简便、试剂少、线性范围宽,可用于茶叶中TP 含量的测定。     

UPLC-MS/MS测定葡萄酒中3种双酰胺类杀虫剂

建立了葡萄酒中氰虫酰胺、氯虫苯甲酰胺、氟苯虫酰胺等3种双酰胺类杀虫剂残留量的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC- MS/MS)检测方法。葡萄酒中的3种双酰胺类杀虫剂经乙腈提取后,用GCB/NH2固相萃取柱净化,以乙腈-5 mmol/L乙酸铵-甲酸作为流动相,梯度洗脱,通过UPLC-MS/MS进行测定。结果表明,3种双酰胺类杀虫剂在质量浓度1～20 μg/L范围内呈良好的线性关系,相关系数(R)≥0.999 5,方法检出限＜1.0 μg/kg;以1.0 μg/kg、2.0 μg/kg、10 μg/kg为添加水平,平均回收率在76.3%～91.1%之间,相对标准偏差(RSD)为3.9%～9.8%。表明该方法快速简便、净化效果好、准确度较好、精密度较高,可应用于葡萄酒中3种双酰胺类杀虫剂的同时测定。     

高效液相色谱法测定车厘子中果糖、葡萄糖及蔗糖含量

采用高效液相色谱法(HPLC)测定车厘子中果糖、葡萄糖及蔗糖的含量。测定方法：Shodex SUGAR系列KS-801(钠型)色谱柱(8 mm×300 mm,6 μm)、流动相为超纯水,流速0.8 mL/min,柱温80 ℃,示差折光检测器(RID)温度30 ℃,进样量20 μL,外标法定量。该法对果糖、葡萄糖和蔗糖测定的平均回收率分别为99.96%、100.30%、99.26%,相对标准偏差(RSD)分别为1.54%、0.49%、0.48%,检出限分别为3.50 μg/mL、4.88 μg/mL、7.50 μg/mL,果糖、葡萄糖和蔗糖的标准曲线相关系数均在0.999以上(n=5)。该法可快速准确的对果糖、葡萄糖和蔗糖定性、定量分析。结果表明,车厘子果肉中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量分别为5.69%、5.83%、0.24%。     

气相色谱－FID检测器检测海产品中的二甲胺

采用气相色谱-FID 检测器对海产品中的二甲胺进行检测。本实验对样品中二甲胺的提取、衍生条件以及气相色谱的分析方法进行了研究。样品经7.5% 三氯乙酸提取,取上清液在60℃下与对甲苯磺酰氯反应1h,衍生产物在确定的气相色谱条件下进行分析。结果显示：二甲胺在0.001～2mg/ml 的浓度范围内线性相关系数为0.9998,日内精密度RSD 为2.8%,日间精密度RSD 为5.0%。最低检出限为0.38 μ g/ml,定量限为0.71μg/ml。回收率在91.21%～103.24% 之间。该方法操作简单,灵敏度高,稳定性好。