毛细管电泳在牛乳中酪蛋白含量测定及掺假检测方面的应用

运用毛细管电泳技术可以快速分析牛乳中的蛋白组分 ,检测牛乳中添加杂蛋白的掺假情况。实验中获得了原料乳、巴氏乳和超高温乳的毛细管区带电泳图谱 ,通过 32KaratSoftware软件计算了乳中酪蛋白的含量 ,检测了乳粉中添加大豆蛋白的毛细管凝胶电泳图谱。该方法具有快速、高效、样品用量少、经济等优点。     

高效毛细管电泳法测定黄泥螺黏液中活性多糖的单糖组成

目的:测定经提取纯化后黄泥螺黏液中3种活性多糖EBPA、EBPB1和EBPB2的单糖组成。方法:7种单糖标准品经α-萘胺衍生化以后,用不同浓度(55～85mmol/L)的硼砂作为电泳介质,探寻最佳电泳条件实现高效毛细管电泳分离,得到标准的a-萘胺衍生单糖的毛细管电泳区带电泳图谱。将提纯后的黄泥螺黏液中的3种活性多糖分别水解成单糖,用相同的方法在最佳电泳条件下经毛细管电泳分离,得到水解单糖的毛细管电泳图谱。结果:最佳工作条件:运行缓冲液为75mmol/L、pH10.4的硼砂水溶液,分离电压10kV,进样压力0.5Psi,进样时间10s,柱温25℃。通过与标准谱图对照分析,黄泥螺黏液中的活性多糖EBPA由鼠李糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖和岩藻糖组成,EBPB1由鼠李糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、岩藻糖和半乳糖组成,EBPB2由葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、岩藻糖和半乳糖组成。结论:高效毛细管电泳能有效分析多糖中单糖组分,灵敏度高,分离效果好。     

毛细管电泳仪在掺假牛乳检测中的应用

应用高效毛细管电泳方法对牛乳蛋白、大豆分离蛋白、明胶和乳清蛋白进行检测.选择未涂层的熔融石英毛细管,采用浓度为0.1mol/L的磷酸盐缓冲体系,在紫外检测波长214nm,分离电压26 kV条件下测出5种乳蛋白在不同线性范围内的线性相关系数均大于0.997,各乳蛋白的迁移时间和峰面积的相对标准偏差(RSD)分别小于0 .33%和4.65%,牛乳样品加标回收率范围为86%～102%;通过对比大豆分离蛋白、明胶、乳清蛋白及乳蛋白的电泳图语,定性并定量出不同蛋白质特征峰,方法重现性较好,可以作为牛奶质量的监控快速检测方法.     

区带毛细管电泳法同时分离检测6种喹诺酮类抗生素

采用区带毛细管电泳法建立6种喹诺酮类抗生素同时分离检测的方法,考察了缓冲液种类、离子浓度、pH以及分离电压,温度等因素对电泳分离的影响.优化后的分离检测条件为:缓冲液为30mmol/L硼酸钠-10mmol/L磷酸二氢钠(pH8.5)、分离电压和温度分别为18kV和25℃、紫外检测波长278mm.结果表明,6种药物在10min内完全达到基线分离,且各组分浓度与峰面积呈良好的线性关系(R2>0.9929),检出限为29-51μg/L,回收率为98.05%-104.30%,相对标准偏差(RSD)小于4%.     

毛细管电泳法分离检测饮料中的防腐剂

采用高效毛细管电泳法,同时在线分离检测对羟基苯甲酸甲酯、山梨酸钾和苯甲酸3种防腐剂。考察了运行缓冲液的浓度、pH值、分离电压、进样时间等因素对电泳分离的影响。在检测波长为230nm时,获得了3种防腐剂分离检测的最优化实验条件为:20mmol/L pH 9.2的硼砂缓冲溶液,分离电压为22kV,进样时间15s。在最优化实验条件下,3种防腐剂检测的线性相关系数均大于0.98,检出限为1.0×10-2g/kg。利用此方法检测了市售3种饮料中所含防腐剂的种类和含量,各种防腐剂的回收率在88%~102%之间。     

CE法检测α-乳白蛋白和β-乳球蛋白

建立区带毛细管电泳法分离检测乳粉中α-乳白蛋白(α-Lac)和β-乳球蛋白(β-Lg)含量的分析方法,检测条件为未涂层柱子、60 mmol/L磷酸盐缓冲体系(pH 6.5)、检测波长214 nm、分离电压15 kV。应用本法对市场上10个品牌的13个婴幼儿乳粉样品进行了检测,具有成本低廉、操作简便、准确快速等优点。     

毛细管电泳法测定不同体细胞数的原料乳的蛋白组成及含量

为明确不同体细胞数(Somatic Cell Count,SCC)数量的原料乳蛋白质组成的变化规律。本研究首先建立了乳蛋白的毛细管电泳分析方法,并采集了不同SCC数量原料乳,分析其乳蛋白成分及含量的差异。结果表明,随着SCC数量的增加,原料乳中酪蛋白的占比显著降低(p<0.05),乳清蛋白比率相对增加;酪蛋白中β-酪蛋白B和β A1-酪蛋白的含量显著下降(p<0.05),水解为新的小片段。毛细管电泳技术能够更准确的分析原料乳蛋白质的组成及变化规律,有利于乳品企业在原料乳收购时进行更深一层的品质分析。     

3种毛细管电泳方法分析牛乳蛋白的比较

对比毛细管凝胶电泳(CGE)、毛细管未涂层管区带电泳(CZE)和涂层管区带电泳(CZE)在牛乳蛋白分离和定量分析,结果表明在分离条件、分离效果和定量特征上,毛细管涂层区带电泳优于其他两种电泳。应用涂层毛细管区带电泳对不同阶段婴幼儿配方乳粉的蛋白组成进行测定,分离效果较好。     

基于双重聚合酶链式反应技术检测掺假驴乳中的牛乳

目的 建立双重PCR技术检测驴乳中掺假的牛乳的鉴别方法。方法 将牛乳按比例掺入驴乳制备掺假乳,经热处理提取DNA,以驴和牛的12S-RNA、16S-RNA为靶标设计特异性引物,进行相应的PCR,优化双重PCR退火温度,同时考察该方法在巴氏杀菌、高温灭菌和冷冻干燥条件下的适用性及灵敏度。结果 牛和驴的引物特异性均良好,与非目标物种DNA不发生交叉反应,DNA检测限最低为10 ng;优化后的双重PCR最佳退火温度为55.7℃;单重PCR由于干扰因素少,对驴乳中牛乳的掺假检出限均为0.1%,而双重PCR也表现出较好的适用性及灵敏性,在原料乳中检出限为0.5%,巴氏杀菌乳、高温灭菌乳和冷冻干燥驴乳中检出限均为2%。相较于单重PCR,双重PCR大大缩短了检测时间成本。结论 本研究为驴乳中牛乳的掺假检测提供了一种准确、灵敏和经济的方法,具有实际参考价值。     

黄酒及其酸败组分的高效毛细管电泳检测方法的研究

黄酒生产与陈化过程中发生酸败变质,是黄酒业面临的头等难题。本文中以黄酒原酒为对象,从检测波长、缓冲液组成、分离电压等方面对高效毛细管区带电泳法检测黄酒组分的条件进行研究。结果表明,选择检测波长215nm、0.075nmol/L的pH=10.0的磷酸氢二钠-四硼酸钠缓冲液、分离电压8kV检测,可以得到理想的黄酒原酒、黄酒料酒与酸败黄酒原酒的高效毛细管区带电泳图谱。通过对比分析,确定导致酸败的可能组分峰位于保留时间27.0~31.0min区段。研究结果为黄酒酸败组分的检出、质量标准构建及黄酒生产过程中的质量控制奠定基础,具有一定的应用价值。     

利用区带毛细管电泳分离、分析葡萄籽原花青素

通过选择不同的缓冲液,发现硼酸盐缓冲液对含有大量同分异构体和不同聚合度的葡萄籽原花青素分离、分析具有良好的效果,利用毛细管电泳可以将葡萄籽原花青素各组分进行一定程度的分离,得到较好的电泳图谱。当硼砂-磷酸盐缓冲液pH=9,浓度为80mmol/L时,原花青素混合物的分离度和分离效果最好。提高毛细管电泳分离电压和分离温度,降低硼砂-磷酸盐缓冲液的浓度,可以改善各组分的分离效果,缩短分离时间,提高分析速度。通过解聚反应,可使高聚体原花青素降解,葡萄籽原花青素的电泳分离效果得到明显改善,在低浓度(20mmol/L)硼砂-磷酸盐缓冲液中也可得到艮好的毛细管电泳图谱。     

一种利用毛细管电泳间接测定生鲜乳中添加大豆分离蛋白的方法

运用高效区带毛细管电泳法以pH2.7浓度配制为15mmol/L柠檬酸-20mmol/L柠檬酸三钠作电泳缓冲液同时测定了生鲜乳蛋白和大豆分离蛋白。结果显示β-CN峰面积和迁移时间的相对标准偏差(RSD)分别为3.01%和0.62%,κ-CN峰面积和迁移时间的RSD分别为2.03%和0.49%,大豆分离蛋白峰面积和迁移时间的RSD分别小于5.12%和0.48%,均满足定性和定量分析的要求。建立了利用蛋白峰面积比例关系间接测定生鲜乳中大豆分离蛋白的分析方法,其中β-CN和κ-CN检测限分别为0.17mg/L和0.23mg/L,回收率为99.37%和99.23%,大豆分离蛋白检测限和回收率分别为5.73mg/L和87.44%.     

毛细管电泳测定乳酸发酵液中有机酸

运用毛细管区带电泳模式,在磷酸缓冲液中成功地分离了苹果酸、甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、草酸9种有机酸。研究了缓冲液浓度、pH值、电泳电压、检测波长等因素对分离的影响,并对实际发酵液进行分析测定,加标回收率为97.5%～107.1%。该方法简便、快速、准确,适于整个发酵过程条件的优化及发酵产物的监控工作。     

采用蛋白质定量方法检测掺假牛乳比较研究

研究非蛋白质掺假牛乳样品中的乳蛋白质检测方法。样品用15%三氯乙酸溶液处理牛乳样品,沉淀分离乳蛋白质,通过凯氏定氮法和四种分光光度法对液态乳中添加尿素和三聚氰胺常见掺假物进行检测比较研究。结果表明,凯氏定氮法、双缩脲比色法、Folin-酚试剂法、BCA法检测牛乳中掺入不同比例尿素溶液蛋白质含量,结果不受尿素溶液的影响,准确度高。对于牛乳中掺入三聚氰胺溶液,三氯乙酸结合凯氏定氮法检测相对误差较大,而三氯乙酸结合双缩脲比色法、Folin-酚试剂法、BCA法检测结果不受三聚氰胺溶液影响,准确度高。考马斯亮蓝法测定牛乳中掺入尿素溶液和三聚氰胺溶液相对误差均很大。     

高酮体乳的蛋白热稳定性研究

以正常乳和高酮体牛乳为原料,测定其在65°C、75°C、85°C和95°C下加热10 min的变性和聚集程度、乳清蛋白氮指数、表面巯基以及表面疏水性等,研究其在不同热处理条件下的理化性质变化及聚集行为。生乳的电泳图谱表明高酮体乳乳的β-酪蛋白(β-CN)、κ-酪蛋白(κ-CN)、α-乳白蛋白(α-LA)比例高于正常牛乳。热稳定性结果表明,热处理导致乳蛋白变性,并发生一定程度的聚集。随着处理强度的增加,乳蛋白变性程度增加。在75～95°C处理下,两种乳均发生一定程度的变性。在85°C和95°C处理下,高酮体乳蛋白表现出更差的热稳定性。     

毛细管电泳法分离检测香兰素、香兰素醇、香兰素酸和阿魏酸

建立同时测定香兰素、香兰素醇、香兰素酸和阿魏酸4种组分的毛细管电泳法。研究运行缓冲液的组成、pH值和浓度、分离电压、进样时间及检测波长等对分离效率的影响,获得最优的测定条件。以熔融石英毛细管为分离通道,工作电极电位20kV、20℃、进样时间5s、检测波长280nm,在pH9.23、浓度30mmol/L硼砂缓冲液中,4组分获得良好的分离。该法应用于当归、胡黄连和奶糖等样品的检测分析,结果令人满意。     

水牛乳中蛋白质基于RP-HPLC指纹图谱的建立及在乳源分析中的应用

以水牛的乳蛋白多态性规律,κ-CN/A、α_(s2)-CN、κ-CN/B、α_(s1)-CN、β-CN、β-LgB、α-La在液相色谱中的分离特征和峰面积作为评价指标,对不同来源的水牛乳和荷斯坦牛乳建立指纹图谱快速区分鉴别水牛乳掺假。选择ZORBAX 300SB-C8(4.6 mm×150 mm,3.5μm)色谱柱;检测波长为215 nm;柱温:45℃;流速:0.5 mL/min;流动相:0.1%TFA水溶液:0.1%TFA乙腈进行梯度洗脱。结果:在精密度、重复性和稳定性实验中,分离出的κ-CN/A、α_(s2)-CN、κ-CN/B、α_(s1)-CN、β-CN、β-LgB、α-La峰面积相对标准偏差(RSD%)5%;根据水牛与荷斯坦蛋白多态性的差异,对乳蛋白进行分离后建立指纹图谱,通过相似性计算水牛乳和荷斯坦牛乳样品间的相似性均大于0.95,相关性高。通过指纹图谱对比发现特征峰,作为掺假标记,当荷斯坦牛乳掺入2%时可被检测到,在掺入5%～40%荷斯坦牛乳的范围内,相关系数大于0.99。该方法具有良好的重现性和专属性,能够得到样品间具有代表性的指纹图谱,能快速稳定地分析水牛乳中是否掺入荷斯坦奶源。     

苦丁茶中酚酸类化合物的HPCE分离测定

通过建立了高效毛细管电泳法同时分离测定苦丁茶中山奈酸、芦丁、没食子酸、原儿茶酸、咖啡酸、没食子酸、原儿茶酸等7种酚酸类物质含量的方法。对缓冲液离子浓度和pH、分离电压和毛细管温度等电泳分离条件进行了优化,结果发现在柱温25℃、电压20kV、20mmol/L pH7.5磷酸二氢钾-硼砂缓冲液的电泳条件下,可在13min内实现了7种酚酸类物质的分离检测。本方法具有较高的灵敏度,呈现较好的线性关系,r为0.9982~0.9996,迁移时间重现性为0.1557%~0.1664%,峰面积重现性为1.080%~3.466%,回收率为80.14%~93.24%。本研究采用建立好的方法测定了不同产区苦丁茶中7种酚酸类化合物的含量。     

采用毛细管电泳技术快速检测牛乳中外源蛋白成分

牛乳中非乳源性蛋白成分的检测对于保障牛乳质量安全具有重要意义。介绍了毛细管凝胶电泳技术在牛乳中外源蛋白成分快速检测上的应用。通过优化条件,建立牛乳毛细管凝胶电泳方法,检测到大豆水解蛋白标志峰,分别测定纯大豆水解蛋白溶液及牛乳-大豆水解蛋白混合溶液中的水解蛋白标志峰峰面积-浓度线性关系,并将毛细管电泳与SDS-PAGE垂直板电泳及蛋白芯片电泳进行比较,以验证毛细管电泳结果,并比较不同方法优劣性。     

毛细管电泳法检测掺假燕窝中银耳成分

采用毛细管凝胶电泳技术对燕窝及银耳中的水溶性蛋白质进行分离测定。通过优化条件,建立燕窝、银耳的蛋白提取方法以及毛细管凝胶电泳方法,检测燕窝和银耳水溶性蛋白标志峰。同时采用3种燕窝样品对所建立的方法进行验证,证实了方法的可靠性。毛细管电泳技术对燕窝和银耳水溶性蛋白定量准确,重复性、精密度、稳定性各项指标良好,适合于对掺假燕窝中银耳成分的检测。