液相色谱法检测鱼类肝脏中天然维生素A北大核心CSCD

为了准确测定鱼类肝脏中维生素A(维生素A_(1)、维生素A_(2))含量,对样品预处理方法(水浴皂化法、室温皂化法、直接提取法)和检测方法(正相色谱法、反相色谱法)进行筛选,并应用于9种经济鱼类肝脏中维生素A的测定。结果表明:维生素A_(1)、维生素A_(2)标准品用反相色谱法检测分离效果良好,且在各自线性范围内线性关系良好,R^(2)均大于0.99;水浴皂化法维生素A含量显著高于室温皂化法及直接提取法(p<0.05),且维生素A_(1)平均回收率为104.52%,维生素A_(2)平均回收率为90.94%;在9种鱼中,除了淡水鱼乌鳢和大口黑鲈外,其他淡水、海水鱼类肝脏中维生素A总含量均达200μg/100 g以上,其中海水鱼龙趸石斑鱼肝脏中维生素A总含量最高,达到14413.78μg/100 g。水浴皂化法结合反相色谱法精密度良好,适用于鱼类肝脏中维生素A的分析测定。     

顶空气相色谱法测深色酒中微量甲醇

甲醇是酒精饮料中的有害成分，其检测方法主要有品红亚硫酸比色法和气相色谱法两种，但对于像有色酒和药酒等颜色较深、成分复杂的酒，品红亚硫酸比色法的误差及重现性均较差，而采用气相色谱法直接进样又极易污染色谱柱。因此，在检测前对样品必须进行蒸馏或多次蒸馏或其它预处理。本文采用HSGC法测定了五种深色酒中微量甲醇，避免了样品的预处理，且方法简便、快速，准确性和重现性均较好。     

酶联免疫吸附法快速检测饲料中赭曲霉毒素A

目的建立一种酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)快速检测饲料中赭曲霉毒素A快速的方法。方法样品采用60%的甲醇溶液提取,提取液经过离心、快速滤纸过滤后,用稀释缓冲溶液按10倍的比例对提取液进行稀释即为试样液,采用酶联免疫吸附方法进行检测。结果在加标浓度为25、50和100μg/kg的加标水平下,赭曲霉毒素A在饲料中的加标回收率为88.4%~134.6%,变异系数为3.5%~6.9%。抽取10份样品进行检测,赫曲霉毒素A含量在14.1~38.2μg/kg。符合国家的标准GB 13078-2017对饲料中赫曲霉毒素A含量的规定。结论本方法灵敏度高、快速简便,适用于饲料中赭曲霉毒素A的快速批量检测。     

快速检测复合预混合饲料中维生素D3含量的高效液相色谱法

建立了高效液相色谱测定复合预混合饲料中维生素D_3的分析方法。样品经水超声破解微粒包被,再用乙腈提取后,使用C_(18)色谱柱,采用紫外检测器,检测波长为264 nm,外标法定量。结果表明,维生素D_3在0.05～5μg/ml线性关系良好,相关系数(r)为0.999 9。方法定量限1.00×10~4 IU/kg,平均加标回收率82.1%～87.9%,相对标准偏差2.08%～3.20%。按上述方法共检测样品20批次,结果表明,该方法快速、准确可靠,能够实现快速测定预混合饲料中维生素D_3的含量。     

高效液相色谱法测定预混合饲料中的25-羟基维生素D3

为测定预混合饲料中25-羟基维生素D3含量,建立并优化了高效液相色谱法(HPLC)。采用色谱柱为Thermo AQUASIL-C_(18)(100mm×3.0mm,3μm),流动相为甲醇和水,梯度洗脱,进样量为50μl,检测波长为264nm。25-羟基维生素D_3在(0.05～25)μg/ml线性良好,相关系数为0.999 8,检出限为0.2mg/kg,定量限为1mg/kg。方法批内回收率在72.2%～104.2%,相对标准偏差(RSD)在1.0%～5.3%;批间回收率在75%～103%,RSD在1.3%～4.4%。本方法快速简便,应用于实际样品检测,结果满意,适用于预混合饲料中25-羟基维生素D3的测定。     

基于全自动核酸提取的荧光定量PCR鉴别羊肉制品真伪

摘要：目的 建立一种基于自动化的快速核酸提取方法,联合三重实时荧光定量PCR技术,提高羊肉制品真伪鉴别的检测效率。方法 分别采用全自动核酸提取法、磁珠手提法与柱提法对不同状态羊肉制品进行核酸提取,比较不同方法的提取时间差异,通过三重实时荧光定量PCR扩增结果评估不同方法的提取效果。以国标法为对照,对市售的羊肉制品进行平行检测,评估本方法的检测性能。结果 与磁珠手提法、柱提法相比,全自动核酸提取法的提取时间缩短了15-30 min,且提取的核酸扩增效果更好。全自动核酸提取法在羊猪混合样本中羊源核酸检出限为0.010 mg·g-1。全自动核酸提取法在生鲜肉、生肉及熟肉制品等多种类型产品中提取的羊源核酸PCR检测结果的CV值均<3.000%。分别采用三重实时荧光定量PCR法与国标法对全自动提取的21份市售的涵盖不同类型的羊肉制品核酸进行平行检测,符合率为100.00%。结论 本研究方法可为羊肉制品掺假的快速真伪鉴别提供操作简便、稳定灵敏、快速准确的整套解决方案。     

骨胶原蛋白肽粉中DNA的提取及猪、羊源性成分的检测

目的 优化深加工骨胶原蛋白肽粉中DNA的提取方法, 鉴定检测其动物源性成分。方法 采用2种试剂盒法, 并对试剂盒部分步骤进行适度修改后提取骨胶原蛋白肽粉中的基因组DNA, 分别用猪、羊引物和探针对提取的DNA片段进行实时荧光PCR扩增检测。结果 只有DNeasy Blood & Tissue Kit提取试剂盒法提取的DNA纯度较好, A260/A280比值为1.73, 浓度为8.2 ng/μL, 并且经18S rDNA片段的PCR扩增结果表明样品中含有哺乳动物DNA, 且DNA中不含抑制PCR反应物质。检测结果表明该骨胶原蛋白肽粉中含有猪源性成分。 结论 采用试剂盒法提取深加工骨胶原蛋白肽粉中DNA时, 需对部分步骤做修改后才可进行。     

反相高效液相色谱法同时测定植物油中8种维生素E异构体

为准确、快速地测定植物油中8种维生素E异构体,建立了均质快速提取法结合反相高效液相色谱法同时测定植物油中8种维生素E异构体的方法,并采用该方法对14种常见植物油进行测定。结果表明：与传统的皂化法和固相萃取法比较,均质快速提取法前处理快速简便,测定准确度和精密度高,重现性好;8种维生素E异构体在15 min内可以实现良好分离;在0.5~10 μg/mL质量浓度范围内8种维生素E异构体线性关系良好(R2＞0.999),检出限为0.02~0.05 μg/mL,定量限为0.07~0.17 μg/mL,相对标准偏差在2.48%~5.79%之间,加标回收率在90.00%~110.00%之间;不同食用植物油中生育酚和生育三烯酚的种类和含量存在明显差异。建立的均质快速提取法结合反相高效液相色谱法适用于植物油中8种维生素E异构体的同时测定。     

一种适用于乳制品基因组DNA快速提取方法的研究

目的对比NaOH裂解法、PBS裂解法以及直接煮沸法3种方法提取乳制品中核酸的提取效果,优化提取条件,确定一种更适用于现场检测、简便快速的的乳制品DNA快速提取技术。方法以牛奶、水牛奶、牦牛奶、羊奶、骆驼奶、以及驴奶6种常见的乳制品为材料,分别用NaOH裂解法、PBS裂解法以及直接煮沸法3种提取方法提取乳制品中的DNA,并根据裂解液用量和裂解时间进行优化,通过PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析,检测DNA提取的质量和灵敏度。结果 NaOH裂解法能够提取所有物种的乳制品DNA,而且可以在最佳裂解条件下提取模拟掺假混合乳的DNA进行检测,发现其检测限能达到1%的牛奶含量。结论该方法取样量小,成本低,在15 min内即可完成快速提取,为实验室乳制品DNA定性或定量鉴别,以及乳制品的现场掺假鉴别提供了一种快速灵敏低成本的样品前处理技术。     

直接进样测汞法测定不同粒径固体食品样品中总汞差异性分析

目的 比较直接进样测汞法对不同粒径的固体食品样品中总汞测定结果的差异性,考察其对固体样品粒径的要求。方法 取不同粒径的固体食品样品于镍舟上,直接进样测定,采用两种不同基质的有证标准物质进行质量控制,用统计学方法及相对均匀度因子（ HE）进行比较分析。结果 实验过程中两种不同基质的有证标准物质的测定值均在标准值范围内,表明测定的准确性。大米未过筛组均匀度较差,而食用菌A均匀度较好可全部通过40目筛,即粒径选择均在≤425 μm（或筛孔≥40目）时总汞含量的测定结果无显著性差异,且不同品牌测汞仪测定结果具有较好的一致性。结论 直接进样测汞法测定固体食品样品的方法简单可靠,但因对样品均匀性有较高的要求,需样品粒径≤425 μm（或筛孔≥40目）时才能保证测定结果的准确性。     

Rapid Liquid Chromatographic Assay of Vitamin E and Retinyl Palmitate in Extruded Weaning Foods

Extruded weaning foods were produced using cowpea + corn + soybean + soybean oil (35:50:10:5, w/w) and cowpea + corn + peanut (42:43:15, w/w) by twin screw extrusion and fortified with vitamin premix. A direct solvent extraction method was used to assay fortified α-tocopheryl acetate as the ester to differentiate it from the naturally occurring alcohol for accurate assessment of total vitamin E activity. The fortified retinyl palmitate was assayed from the same extraction and assayed as the more stable ester with the same LC conditions after changing the detection wavelengths. Using direct solvent extraction, analytical values of vitamin E homologs in extruded products were higher than those values from saponification.     

Simplified Extraction Procedure and HPLC Determination for Total Vitamin E and β-Carotene of Reduced-Fat Mayonnaise

ABSTRACT: A simple, rapid procedure using direct solvent extraction and liquid chromatography was developed for the simultaneous determination and identification of α -tocopheryl acetate, β -carotene and tocopherols in reduced-fat mayonnaise. The method used a zero-control reference material (ZRM) (made in-house from olive oil and eggs) for accuracy determination. The vitamins and β -carotene were quantified by fluorescence and photodiode array detectors, respectively. The overall % recoveries (mean±S.D.)(n=5) for β -carotene, α -tocopheryl acetate, α -tocopherol, γ -tocopherol and δ -tocopherol were 101.4±1.4, 99.0±4.2, 102.0±3.6, 101.3±4.4 and 101.9±6.2, respectively. The method differentiates between natural and synthetic forms of vitamin E for accurate assessment of vitamin E biological activity. Comparative assays were performed using both direct solvent extraction and saponification.     

The formation of cis-isomers of all trans-vitamin A acetate during the alkylation step for determination of vitamin A in feeds

The determination of vitamin A in animal feed by HPLC must be preceded by a saponification step in order to eliminate the interfering lipids. This operation bears the risk of isomerisation of the vitamin A. We have determined the degree of isomerisation by adding trans-vitamin-A-acetate (in dry powder form) to 8 different vitamin A free blends, followed by saponification, extraction and HPLC. In this study, we have taken into account all the 5 known cisisomers. The degree of isomerisation depends on the type of feed and on the conditions of saponification and ranged from 4 to 40%. Pure vitamin-A-acetat was isomerised to the extend of 1 to 30% depending on saponification conditions. The recovery rate was (with some exceptions) 90 +/- 5%.     

婴幼儿配方食品中叶黄素的提取及测定

比较婴幼儿配方食品中叶黄素的3种提取方法：氢氧化钾皂化法、丙酮提取法和正己烷提取法,从中得出最佳提取方法为正己烷萃取法。选用色谱柱YMC Carotenoid(4.6mm×250mm,5μm)以甲醇、甲基叔丁基醚为流动相进行梯度洗脱,流速为1mL/min,于445nm波长处测定婴幼儿配方食品中叶黄素的含量。该方法操作简便,提取效率高(平均回收率为95.4%),重现性好(RSD为0.93%),检出限为2μg/100g,可以准确的测定婴幼儿配方食品中叶黄素的含量。     

饲料中维生素A测定的前处理条件研究

通过正交实验研究了前处理的3个主要因素(称样量、制样方式和提取方法)对维生素A测定结果的可靠性的影响。结果表明,饲料中维生素A测定的最佳前处理条件为样品不进行振荡、不进行打样、使用原样进行测定,称样量为10 g,用皂化的方法进行提取。     

Technical note: Simultaneous carotenoid and vitamin analysis of milk from total mixed ration-fed cows optimized for xanthophyll detection

Concentrations of retinol, α-tocopherol, and major carotenoids in dairy products are often determined simultaneously by liquid chromatography. These compounds have different polarity and solubility; thus, extracting them simultaneously can be difficult and inefficient. In milks with low carotenoid concentrations, the xanthophylls lutein and zeaxanthin may not be completely resolved using common extraction techniques. A simplified method was developed to optimize extraction efficiency and the limit of detection and limit of quantification (LoQ) of lutein and zeaxanthin in bovine milk without decreasing sensitivity to other vitamins or carotenoids. The developed method evaluates lutein, zeaxanthin, β-carotene, retinol, and α-tocopherol simultaneously by ultra-high performance liquid chromatography–photodiode array detection. Common saponification temperatures (40–60°C) and concentrations of KOH in water (10–50% KOH wt/vol) were evaluated. Multiple solvents were evaluated for optimal xanthophyll extraction (diethyl ether, dichloromethane, hexane, and tetrahydrofuran) following saponification. The limit of detection and LoQ were defined as 3:1 and 10:1 signal-to-noise ratio, respectively. All experiments were performed in triplicate. The optimal saponification procedure was a concentration of 25% KOH at either 40 or 50°C. Saponified extracts solubilized in solutions containing diethyl ether had greater concentrations of lutein- than hexane- or tetrahydrofuran-based solutions, with peak areas above LoQ values. The solution containing diethyl ether solubilized similar concentrations of retinol, α-tocopherol, and β-carotene when compared with other solutions. The proposed optimized method allows for the simultaneous determination of carotenoids from milk with increased lutein and zeaxanthin sensitivity without sacrificing recovery of retinol, α-tocopherol, and β-carotene.     

浅析大豆异黄酮的AOAC测定方法

浅析了大豆及大豆食品中异黄酮的AOAC测定方法。AOAC方法从大豆异黄酮的提取、皂化入手,然后应用HPLC法进行测定。该方法只采用了6种大豆异黄酮标准品就能较准确地测定出大豆异黄酮的含量,且工作标准溶液配制可减少系统误差。该方法具有测定准确、成本低的特点,对国内大豆异黄酮的测定研究有参考价值。     

超声辅助提取螺旋藻粉中叶绿素a的工艺研究

目的对超声辅助提取螺旋藻粉中的叶绿素a工艺进行优化。方法设计4因素3水平进行正交实验,即以提取时间、提取溶剂浓度、料液比和提取温度为实验因素,每个实验因素设计3个水平。通过分析极差和均值,筛选出最优的提取工艺条件。结果最佳工艺条件如下:超声时间50 min,乙醇浓度80%,超声温度35℃,料液比35:50(m:V)可以达到较理想的提取效果,其中乙醇浓度和超声时间是影响提取叶绿素a的主要因素,其次分别为超声温度和料液比。结论本研究筛选出的超声辅助提取条件准确、重现性好,可适用于螺旋藻粉中叶绿素a含量的测定。     

含葡萄籽提取物的维生素C的测定

目的对3种维生素C检测方法进行比较,探索检测含葡萄籽提取物的样品中维生素C含量的适宜方法。方法用滴定法、紫外风光光度法、高效液相色谱法分别检测维生素C含量。结果以汤臣倍健祛斑胶囊为例,因葡萄籽提取物本身的强抗氧化性和颜色深的特性,用滴定法和紫外风光光度法检测维生素C的准确度偏差分别为87.73%和54.79%,用高效液相色谱法检测结果准确度偏差为0.38%,符合检测法规GB/T27404-2008中要求(当含量在1%~10%时,准确度偏差小于10%)。结论当样品中含有葡萄籽提取物时,用高效液相色谱法检测维生素C的准确性高。     

高效液相色谱-二极管阵列检测器结合固相萃取法快速测定食品中米酵菌酸残留

建立WAX混合型弱阴离子固相萃取富集净化,高效液相色谱-二极管阵列检测器快速测定食品中米酵菌酸残留的方法。采用C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,以乙腈-甲醇-1%乙酸溶液（10∶62∶28,V/V）为流动相,以269 nm为分析波长,米酵菌酸在0.1～40 mg/L质量浓度范围内线性良好,相关系数r值大于0.999。本实验考察样品的提取条件及不同固相萃取小柱净化效果,结果表明,选择体积分数80%乙腈溶液为提取溶剂,超声提取30 min,WAX小柱富集、净化,效果最佳。方法检出限为0.03 mg/kg。通过不同样品加标验证,平均回收率为83.3%～95.6%,相对标准偏差不大于5%（n=6）。与GB/T 5009.189-2003《银耳中米酵菌酸的测定》方法相比,该方法精确灵敏、回收率高、前处理简单快速,适用于各种食品中米酵菌酸残留快速测定。