右旋糖酐酶调控右旋糖酐分子质量条件研究

小分子质量右旋糖酐在医学、化工、食品等领域有广泛的应用,为了得到特定分子质量的右旋糖酐,采用酶解法对大分子质量右旋糖酐的分子质量及分子质量分布进行调控。实验结果表明:在酶解过程,通过控制右旋糖酐酶浓度、底物浓度和反应温度、pH值及时间,可有效调控右旋糖酐的分子质量,且产物均一性较好。较适宜酶解条件:酶浓度为10 U/mL、反应温度为50 ℃、pH值为5.0、底物浓度为30 mg/mL。右旋糖酐酶解前后结构未发生改变,但是其构象从球形链变为柔顺链,右旋糖酐产物分子质量约为5000 u时,在溶液中为较紧凑的球形链构象。酶解法降解右旋糖酐速度快、反应条件温和、能耗低且无污染,在生产特定分子质量的右旋糖酐方面具有良好的应用前景。     

酶解除去蔗汁中的右旋糖酐

右旋糖酐对制糖过程以及糖产品的危害早已在国内外引起高度关注。目前除去蔗汁中存在的右旋糖酐最有效的方法是酶解。在单因素实验基础上,通过响应面法优化,建立回归模型,得到应用右旋糖酐酶催化水解蔗汁中右旋糖酐的最佳反应条件：酶剂量0．05U／mL蔗汁、pH5-3、反应时间15min、反应温度51℃。在该条件下,可将蔗汁中含量为800～900mg／kg°Bx的右旋糖酐完全去除。     

产右旋糖酐酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质研究

该研究从连云港海域海泥中筛选产右旋糖酐酶菌株,对其进行形态学观察、生理生化试验及分子生物学鉴定,并对其产右旋糖酐酶的酶学性质、酶解产物组分及抗氧化活性进行研究。结果表明,筛选得到一株产右旋糖酐酶菌株GN02,其被鉴定为芽孢杆菌（Bacillus sp.）。菌株GN02产右旋糖酐酶的最适温度和pH分别为20 ℃和7.0,在25～40 ℃、pH 5.0～9.0范围具有良好的稳定性。酶解1 h的主要产物为异麦芽四糖（85.6%）和异麦芽三糖（14.3%）。酶解产物清除羟基自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）和超氧阴离子自由基的半抑制浓度（IC50值）分别为0.42 mg/mL、2.98 mg/mL和11.54 mg/mL。     

酶法合成右旋糖酐的研究

利用肠膜状明串珠菌(Leuconstocmesenteriodes)右旋糖酐蔗糖酶催化蔗糖合成右旋糖酐.分别探讨了不同蔗糖浓度、加酶量、反应温度、pH值和反应时间等因素对蔗糖转化率的影响,从中选取影响较显著的3个因素如蔗糖浓度、反应温度、pH值,采用均匀设计试验方法对酶促反应条件进一步优化,确定酶促反应最佳工艺参数.实验结果表明:酶法合成右旋糖酐的最佳条件为:蔗糖浓度50g/L,加酶量为0.214U,反应温度12℃,pH值为7.5,反应时间为30h,蔗糖转化率约为31%.     

绳状青霉菌发酵产右旋糖酐酶的条件研究

研究绳状青霉菌(Penicillium funiculosum)发酵培养产右旋糖酐酶的条件。研究碳源、氮源对绳状青霉菌产右旋糖酐酶的影响,结果表明最适合发酵产酶的碳源、氮源分别是右旋糖酐和蛋白胨。采用正交试验对绳状青霉菌产右旋糖酐酶的发酵条件进行优化,结果表明最适条件为：发酵瓶装液量为80mL/250mL,发酵培养基的初始pH 值为5.5,培养温度为28℃,在该条件下,右旋糖酐酶的酶活力为18.963U/mL。     

棘孢青霉右旋糖酐酶基因克隆及其在毕赤酵母中的表达

以右旋糖酐酶产生菌棘孢青霉F1001基因组为模板反转录合成右旋糖酐酶的cDNA（dex）,基因全长1 866 bp,根据毕赤酵母密码子偏好性优化dex序列获得优化右旋糖酐酶基因（opt-dex）,分别构建dex-pPICZαA和opt-dex-pPICZαA重组质粒,电击转入毕赤酵母X33中构建重组子。通过蓝色右旋糖酐T-2000平板以及摇瓶发酵筛选获得产右旋糖酐酶的重组酵母菌株。重组酶的酶学性质分析显示,重组酶分子质量65?kDa、最适pH?5.0、最适温度35?℃,专一作用于α-1,6糖苷键。在摇瓶水平上对重组毕赤酵母表达条件进行优化,优化培养条件为培养温度25?℃、初始pH?5.0、每24?h甲醇添加量1%（体积分数）、每24?h山梨醇添加量5?g/L、吐温-80添加量4?g/L、摇瓶装液量50?mL/500?mL锥形瓶,优化后的重组右旋糖酐酶分泌表达酶活力提高到240.74?U/mL。重组酵母X33是一株适合外源表达棘孢青霉右旋糖酐酶基因的工程菌,该重组酶可替代棘孢青霉右旋糖酐酶直接应用于工业生产催化制备右旋糖酐。     

响应面法优化圆弧青霉(CICC-4022)产右旋糖酐酶的培养条件

为了提高圆弧青霉菌(CICC-4022)发酵合成右旋糖酐酶的产量,对发酵培养条件进行优化。采用单因素实验,研究装液量、发酵温度、培养基初始pH、摇床转速对发酵产酶的影响;在单因素实验的基础上,采用响应面实验对圆弧青霉产酶培养条件进行优化,确定培养条件的交互作用及最优组合。结果表明,最适培养条件为:装液量为60 mL/250 mL、发酵温度为30℃、培养基初始pH为6.0、最适转速为160 r/min,此时右旋糖酐酶酶活力达到(53.68±0.12)U/mL,比优化前提高30.10%±0.08%。     

棘孢青霉菌发酵产右旋糖酐酶的条件优化

为优化棘孢青霉菌F1001产右旋糖酐酶的发酵条件,以培养基装载量、蛋白胨和右旋糖酐T70添加量为主要影响因素,结合其他发酵条件,在单因素试验的基础上,运用Box-Behnken试验设计原理,探讨培养基装载量、蛋白胨和右旋糖酐T70添加量的最佳组合。结果表明,蛋白胨添加量3 g/L、右旋糖酐T70添加量14 g/L、培养基装载量85 mL/250 mL,右旋糖酐酶活力最高可达到453 U/mL,比优化前提高88%。通过测定发酵过程中酶活力、pH值、蛋白质含量的变化,进一步验证发酵84 h酶活力达到最大,此时蛋白质含量达到最高,pH值达到3.9。     

产右旋糖酐酶埃氏交替单胞菌的筛选、鉴定及酶活分析

从连云港港口海泥样本筛选到一株产右旋糖酐酶的埃氏交替单胞菌A.espejiana YSN412,对其所产的右旋糖酐酶AesDEX酶学性质进行了分析,对其产酶条件进行了摸索AesDEX最适反应温度为30℃,最适pH值为8在30 ℃下保温2.5h.残余相对酶活在95％以上,而在50℃下保温2.5h后只有14％的残余酶活力.该菌株产酶培养的最佳碳源和氮源,分别是纤维二糖和酵母粉,最适产酶培养温度为30℃,NaCl浓度为2％,初始pH为8时培养液酶活力最高.该菌株培养12h时培养液酶活力达到最高值9U/mL本实验筛选到的4.espejiana YSN412菌株产酶较为迅速,所产的右旋糖酐酶AesDEX酶活最适温度较低,在工业生产上具有潜在降低成本、提高生产效率的优势.     

变形链球菌来源的右旋糖酐酶的克隆表达及酶学性质研究

右旋糖酐酶是一种广泛应用于食品、医药、化工等领域的糖酐水解酶。变形链球菌来源的右旋糖酐酶具有发酵周期短，水解效率高等特点。本文成功克隆了来源于变形链球菌的右旋糖酐酶(Smdex)基因，并导入E.coli BL21(DE3)诱导表达Smdex。研究表明，Smdex的最适温度为40℃，该温度下t_1/2为196 min，最适pH为5.5,pH=4.5～10可保持80%的酶活，具有良好的热稳定性和pH稳定性。以右旋糖酐T70为底物时，该酶的K_m=3.6 mmol/L,k_cat=140 s^-1，可将右旋糖酐T70降解为低聚异麦芽糖(DP=3～10)，表明该酶可应用于低聚异麦芽糖的高效制备。Smdex可抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的生长，并对内皮细胞、T细胞无毒害作用，初步表明该酶有潜力作为安全的生物防腐剂，水解产物也可作为功能性的益生元。     

出芽短梗霉固态发酵啤酒糟制备阿魏酰低聚糖和膳食纤维工艺研究

以啤酒糟为试验材料,研究固态发酵制备阿魏酰低聚糖和膳食纤维的最佳发酵工艺条件。以阿魏酰低聚糖和可溶性膳食纤 维含量为评价指标,选择木聚糖、尿素、磷酸二氢钾为影响因素,通过正交试验确定最佳固态培养基配方。在接种量、发酵时间和发酵 温度3个单因素试验的基础上,利用响应面法优化出芽短梗霉发酵啤酒糟的发酵工艺条件。结果表明,固态发酵的最佳培养基配方为 木聚糖6%、尿素4%和磷酸二氢钾1%;最佳固态发酵条件为接种量12%、发酵时间4 d和发酵温度29 ℃。在此优化条件下,阿魏酰低聚 糖含量和可溶性膳食纤维含量都达到最高,分别为37.67μmol/L和23.76%。     

气相色谱串联质谱法检测水产品中有机氯和菊酯农药残留

建立利用凝胶渗透色谱-气相色谱-三重四极杆串联质谱仪(gas chromatography-triple quadrupole-tandem mass spectrometry,GC-MS/MS)快速检测水产品中有机氯和菊酯类多种农药残留的方法,对样品提取溶剂进行优化,利用凝胶渗透色谱(gel permeation chromatography, GPC)结合分散固相萃取技术净化样品,并分别对农药化合物在GPC上的收集时间参数和N-丙基乙二胺(primary secondary amine,PSA)固相萃取吸附剂的添加量进行优化,在电子轰击电离源下进行多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)采集,该方法的检出限(limits of detection,LOD)为0.03 μg/kg^2.87 μg/kg,试验结果表明,该方法的回收率为60.5 %~118 %,相对标准偏差为0.75 %~15 %,该方法重现性好,精密度高,适用于泥鳅等水产品中有机氯和菊酯类农药残留的检测。     

黄皮果果胶的提取工艺优化及理化性质分析

以纯果胶得率为评价指标,在超声（功率为250 W）预处理30 min后,分别考察提取溶剂、初始pH值、料液比、提取温度及时间等因素对纯果胶得率的影响。在此基础上,采用正交试验优化黄皮果胶的制备工艺,并分析以黄皮果胶理化性质。结果表明,制备黄皮果胶的最佳工艺条件为以盐酸（0.01 mol/L）为提取溶剂,提取温度90 ℃、液料比为20∶1（mL∶g）、初始pH值为2.0,提取时间120 min。该优化提取工艺条件下,黄皮果胶得率为6.84%,半乳糖醛酸含量为76.51%,且各项理化指标均达到国家标准GB 25533—2010《食品添加剂果胶》要求。     

银耳多糖乙酰化修饰及其抗氧化活性

以银耳多糖为原料,采用乙酸酐法制备乙酰化银耳多糖,以乙酰化取代度为指标,探讨反应的时间、温度和乙酸酐用量对取代度的影响,在单因素的基础上,采用响应面法对银耳多糖乙酰化工艺进行优化,并研究乙酰化修饰前后银耳多糖的抗氧化活性。结果表明:银耳多糖乙酰化修饰最佳工艺条件为反应时间2.37h,反应温度61.04℃,乙酸酐用量为2.89mL,在该最佳修饰工艺条件下,乙酰化银耳多糖取代度为0.39。抗氧化研究表明:与未修饰银耳多糖相比,乙酰化银耳多糖对DPPH自由基的清除能力有所增强,对·OH和O2-·的清除能力减弱。     

藕皮多酚提取工艺优化及其体外抗氧化性研究

以藕皮为原料提取多酚,通过单因素试验分析乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间4个因素对莲藕皮多酚提取得率的影响,利用正交试验对提取工艺进行优化,并以抗坏血酸为对比以羟基自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基的清除能力为指标,分析藕皮多酚提取物的体外抗氧化活性。结果表明:藕皮多酚提取优化工艺条件为:乙醇浓度为40%,料液比为1:30(g/mL),提取温度为90℃,提取时间2 h,该条件下藕皮多酚类物质的提取得率为(4.45±0.05)mg/g。藕皮多酚提取物对羟基自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基消除率最高分别可达92.45%、82.11%、80.41%,证实藕皮多酚提取物具有很好的抗氧化能力。     

枸杞酒酿造技术及香气分析研究进展

近年人们对于保健养生日益重视,枸杞酒因其独特营养功能优势而为消费者广泛关注。该文就枸杞酒发展现状,酿造技术包括酿酒原料选择、外源酶添加、成分调整、酵母菌筛选和选育、发酵温度、陈酿、澄清方法等,以及枸杞酒香气分析研究进展展开论述,提出了目前存在的问题,并展望其未来发展,旨在为枸杞深加工产业助力,为枸杞酒产品开发与推广提供参考。     

丙酸杆菌代谢物与山梨酸钾抑菌作用比较研究

以一株费氏丙酸杆菌突变株为出发菌株,通过改变发酵培养基、接种量和初始培养pH值3方面,研究其代谢产物对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌作用,并与山梨酸钾的抑菌作用进行对比。结果表明:3种发酵培养基均对大肠杆菌和沙门氏菌均存在一定的抑制作用,其中以乳酸钠(sodium lactate broth,SLB)培养基发酵时,该菌株代谢产物的抑菌活性分别为25.3 AU/mL和18.3 AU/mL,结果要优于0.1%的山梨酸钾的抑菌活性(21.1 AU/mL和14.1 AU/mL);对于接种量而言,对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌活性最佳的接种量分别为6%和5%,其抑菌活性分别为28.1 AU/mL和18.0 AU/mL,抑菌效果均优于0.1%的山梨酸钾;对于不同培养pH值而言,对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌活性最适初始pH值分别为6.5和6,抑菌活性分别为27.6 AU/mL和14.5 AU/mL,其抑菌效果也优于0.1%的山梨酸钾。所以,选择在适宜条件下发酵所得的丙酸杆菌代谢物,对大肠杆菌和沙门氏菌的抑制效果要优于山梨酸钾。对丙酸杆菌代谢物抑菌作用的研究将为新型天然防腐剂的开发提供依据与试验数据支撑。     

不冻液冻结乌鳢块冻藏过程中品质变化

为了研究不冻液冻结对乌鳢块冻藏过程中冰晶及品质的影响,采用不同冻结温度（－20、－30、－40 ℃）的不冻液和空气冻结乌鳢块,以冰晶大小、盐溶性蛋白含量、pH值、挥发性盐基氮（total volatile basic nitrogen,TVB-N）含量、硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid,TBA）值和持水性等为指标,考察了乌鳢块冻藏（－18 ℃）过程中的品质变化。结果表明：采用－20、－30、－40 ℃不冻液冻结的乌鳢块通过最大冰晶生成带的时间分别为310、226 s和125 s,生成冰晶的面积分别为308.8、142.4 μm2和86.5 μm2,分别显著短于和小于空气冻结方式下乌鳢块通过最大冰晶生成带的时间（3 412 s）和生成冰晶的面积（939.6 μm2 ）（P＜0.05）。另外,在－18 ℃冻藏过程中,经不冻液冻结的乌鳢块的盐溶性蛋白含量均明显高于空气冻结组,而形成冰晶大小、pH值、TBA值、TVB-N含量、汁液流失率和蒸煮损失率均明显低于空气冻结组,其中－40 ℃不冻液冻结后的乌鳢块在冻藏过程中品质变化最小。综合以上结果,不冻液冻结比空气冻结能够更好地保持冻藏过程中乌鳢块的品质,且不冻液的冻结温度越低,冻结速率越高,形成冰晶越小,越有利于鱼肉品质的保持。     

干制牛蹄筋的低压涨发新工艺研究

以干制牛蹄筋为研究对象,在低压环境下进行涨发处理,探究压力值、保压时间、保压温度对干制牛蹄筋涨发率的影响。利用响应面分析得到低压环境下牛蹄筋的最佳涨发工艺参数为:压力值(X1)0.5bar,保压时间(X2)103min,保压温度(X3)82℃,干制牛蹄筋的涨发率(Y)高达386.90%。在最佳工艺条件下对干制牛蹄筋进行涨发处理,并与高压涨发比较对牛蹄筋品质指标的影响。结果表明,低压涨发有利于减缓牛蹄筋中蛋白质、脂肪、胶原蛋白含量的降低,但对钙含量无显著影响(P>0.05)。同时,低压涨发牛蹄筋的水分含量显著大于高压涨发(P<0.05),可更好保证牛蹄筋的多汁性。相比常压与高压涨发,低压涨发牛蹄筋的感官评分最高,显示低压涨发工艺可在保证牛蹄筋感官品质的前提下,有效维持其营养成分。     

大型海藻的降血压活性研究进展

1960年以来,我国因患高血压而死亡的人数逐年增加,而且高血压疾病也越来越低龄化,同时高血压更是很多高危疾病的并发症,较难治愈,逐渐成为威胁人类健康的一大杀手。海洋中的大型海藻种类丰富且有很高的降血压活性,该文综述大型海藻的种类、降血压作用机制及测定方法、大型海藻在降血压方面的研究现状及展望,以期为海洋降血压药物和保健品的开发提供借鉴。