四川泡菜中乳酸菌链霉素抗性与抗性基因的检测（英文）

目的探明四川泡菜中链霉素抗性乳酸菌及抗性基因的种类。方法利用含有8μg/ml链霉素的MRS初步分离泡菜液中的抗性乳酸菌,通过16S r RNA分析确定抗性乳酸菌的分类地位后,测定同种不同菌株对链霉素的MIC,并与欧洲食品安全官方机构(EFSA)建议的最低临界值比较确定抗性菌株;通过PCR扩增链霉素抗性基因str A、str B,aad A、aad E、ant(6)、aac(6')-aph(2')和aph(3')-Ⅲa,确定抗性菌株的抗性基因。结果分离到67株链霉素敏感性或抗性菌株,这些菌株分别属于Pediococcus ethanolidurans(36),Lactococcus garvieae(14),Lactobacillus buchneri(12),Lactobacillus acetotolerans(2),Lactococcus lactis(1)和Staphylococcus.spp(2)。其中Lactococcus garvieae、Lactobacillus acetotolerans、Lactococcus lactis和Staphylococcus.spp全部为抗性菌株,Pediococcus ethanolidurans中有抗性菌株20株、Lactobacillus buchneri中有7株。在抗性基因检测中,除Lactobacillus acetotolerans抗性菌株没有检测到被检基因外,其他5个种的抗性菌株中均检测到部分或全部抗性基因。str A和aph(3')-Ⅲa基因在除Lactobacillus acetotolerans外的被检菌株中均有检出,其检出率分别为50%-100%和21.4%-100%;str B基因在抗性菌株Pediococcus ethanolidurans,Lactobacillus buchneri,Lactococcus garvieae和Lactococcus lactis检测率分别为70%、42.9%、28.6%和100%;aac(6')-aph(2')基因仅在3株Pediococcus ethanolidurans、1株Lactobacillus buchneri、1株Lactococcus garvieae和Staphylococcus spp中检测到。aad A、aad E and ant(6)在所有抗性菌株中都没有检测到。总体而言,str A、str B和aph(3')-Ⅲa基因在链霉素抗性菌株中的检出率高于其他抗性基因。结论当前的研究结果表明:四川泡菜中存在链霉素乳酸菌抗性菌株,这些抗性菌株对四川泡菜存在潜在安全风险。     

眉山泡菜中乳酸菌的分离鉴定

目的：分析眉山泡菜的基本数据和乳酸菌的菌种构成。方法：从眉山市采集泡菜12 份,测定pH值、总酸度、盐度、乳酸菌计数,用16S rRNA序列分析法鉴定菌种。结果：样品pH值的范围是3.37～3.89,总酸度的范围是0.65～0.92 g/100 g（以乳酸计）,盐度的范围是4.16%～5.28%（以NaCl计）,MRS和M17乳酸菌计数分别是1.71～6.33、1.33～5.78（lg（CFU/g））。总酸度对乳酸菌计数影响最大。共分离鉴定出16 株乳酸菌：Lactobacillus fermentum（2 株）、Lactobacillus plantarum（3 株）、Lactobacillus brevis（2 株）、Lactobacillusacidophilus（1 株）、Lactobacillus casei（1 株）、Lactobacillus pentosus（1 株）、Lactobacillus delbrueckii（1 株）、Lactococcus lactis（3 株）、Pediococcus pentosaceus（2 株）。结论：眉山泡菜中乳酸菌存在多样性,实验结果为工业发酵生产泡菜积累了菌株。     

布里亚特顿金斯克区发酵乳制品中乳酸菌分离鉴定

通过传统纯培养方法对采集自俄罗斯布里亚特共和国顿金斯克区的奶酪,酸牛奶,乳清,发酵乳饮料等8份发酵乳制品进行乳酸菌的分离纯化。经16S rDNA序列分析将50株乳酸菌鉴定为Lactococcus(20株)、Lactobacillus(12株)、Enterococcus(8株)、Pediococcus(5株)、Leuconostoc(3株)、Streptococcus(2株),共6个属,11个种。其中Lactococcus lactis为布里亚特共和国顿金斯克区发酵乳制品的优势菌株,占总分离株的40%。     

奶豆腐中乳酸菌的分离鉴定及风味特性研究

通过传统分离方法从内蒙古锡林郭勒盟正蓝旗奶豆腐中初步分离纯化出33株疑似乳酸菌菌株,经16S rRNA序列分析比对分析,确定33株疑似乳酸菌的种属分别为德式乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、粪肠球菌(Enterococcus faecium)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、戊糖片球菌(Lactobacillus pentosus)、格氏乳杆菌(Lactobacillus garvieae),且德式乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)和乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)为锡林郭勒盟正蓝旗奶豆腐中的优势乳酸菌类群。同时用电子舌和电子鼻技术对其奶豆腐风味品质进行了评价,结果发现,奶豆腐是由酸味、涩味、苦味、咸味、鲜味5个基本为组成,其中苦味的差异最大的,其奶豆腐样品是对W1S(甲烷)、W5S(氮氧化合物)、W1W(有机硫化物、萜类物质)是比较明显的,其余传感器物质上比较稳定。     

俄罗斯卡尔梅克共和国发酵蔬菜中细菌多样性研究

通过纯培养的方法结合16S rRNA测序技术对采集自俄罗斯卡尔梅克共和国埃利斯塔市郊的2份发酵蔬菜样品中的乳酸菌进行了分离、鉴定,并构建了系统发育树。经过鉴定,共从2份样品中获得了19株乳酸菌,分属于Lactobacillus(14株)、Pediococcus(3株)和Leuconostoc(2株),其中包括7株Lactobacillus plantarum;1株Lactobacillus brevis;2株Lactobacillus delbrueckii;1株Lactobacillus helveticus;1株Lactobacillus kefiranofaciens;2株Lactobacillus kefiri;1株Leuconostoc lactis;1株Leuconostoc mesenteroides;2株Pediococcus ethanolidurans;1株Pediococcus pentosaceus。此外,该研究以细菌16S rRNA的V1-V3区为靶序列,采用454焦磷酸测序技术从宏基因组角度对2份样品中细菌的丰度和多样性进行了分析,分别从2份样品中获得了10869和12204条高质量序列。经过与RDP(Ribosomal Database)数据库比对,发现隶属于硬壁菌门(Firmicutes)的乳杆菌属(Lactobacillus)和乳球菌属(Lactococcus)分别占到样品中细菌总数的91.66%和3.81%,成为绝对优势菌属。此外,还鉴定到了弧菌属(Vibrio)、片球菌属(Pediococcus)、肠球菌属(Enterococcus)、克鲁维菌属(Kluyvera)等。     

南美白对虾肠道内乳酸菌的分离鉴定及其对抗生素的耐药性

以南美白对虾为研究对象,采用平板分离法从其肠道内筛得26株乳酸菌,通过16S rRNA测序鉴定可归为4种:乳酸乳球菌乳亚种L. lactis subsp. lactis、台湾乳球菌L. taiwanensis、格式乳球菌L. garvieae、乳酸乳球菌L. lactis。选取7株具有代表性的乳酸菌,用PCR的方法检测对虾中检出率较高的6类18种抗性基因(ARGs)在乳酸菌中的分布,辅以平板涂布的方法用抗生素选择性培养基研究乳酸菌对抗生素的耐药性。研究发现:7株乳酸菌具有相似的耐药谱,对四环素、磺胺吡啶、乙酰螺旋霉素表现出耐药性(抑菌率50.00%),对盐酸金霉、土霉素、硫酸庆大霉素、氯霉素、红霉素敏感(抑菌率100%);含有多重抗性基因,ARGs的检出率:磺胺类(92.86%)四环素类(53.06%)喹诺酮类(23.81%)氨基糖苷类(4.76%)氯霉素类=大环内酯类(0.00%),其ARGs基因型与菌株的抗生素表型并不能完全吻合。     

泡菜中乳酸菌的分离鉴定及抗性筛选

该研究从泡菜中分离乳酸菌,通过形态观察及分子生物学技术对其进行鉴定,并对其进行人工胃液和胆盐耐受性试验,以期筛选性能优良乳酸菌。结果表明,从泡菜中共分离出71株乳酸菌,经鉴定分别为消化乳杆菌（Lactobacillus alimentarius）32株、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）27株、发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentium）1株、棒状乳杆菌（Lactobacillus coryniformis）2株、有害片球菌（Pediococcus damnosus）9株。其中,植物乳杆菌和发酵乳杆菌可用于食品,且植物乳杆菌S74和S78具有较高的抗人工胃液能力,存活率分别为（94.73±4.56）%、（108.73±7.16）%;菌株S74在0.3%的胆盐中的生长效率[（7.41±3.28）%]低于菌株S78[（10.04±4.90）%]。说明植物乳杆菌S78在pH 3.0的人工胃液和0.3%的胆盐环境均具有良好的耐受能力,在功能性泡菜及益生菌产品方面具有一定的开发潜力。     

传统发酵食品中乳酸菌的抗生素耐药性评估及耐药基因分析

对传统发酵食品中分离的97株乳酸菌的抗生素耐药性进行评估及耐药基因分析,结果表明:所有分离菌株对万古霉素、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、四环素和替考拉宁的耐药性较强,耐药率达50%以上;对氨苄青霉素、红霉素、甲氧苄啶、头孢呋肟较敏感,耐药率为10%左右。携带最多的耐药基因是tetM(91.75%)和ermB(86.60%)基因,其次为aac(6,)-aph(2')(53.61%),lnuA(45.36%),tetK(39.18%),ermC(36.08%),strA(34.02%)和blaZ(32.99%)基因,携带率相对较低的基因为strA(27.84%),msrA/B(22.22%)和aph(3')-III(7.22%)基因。另外,所有乳酸菌中均未检测出氯霉素(cat)和万古霉素(vanX)耐药基因。多重耐药菌株在发酵乳制品中的分离率最高,且多出现在植物乳杆菌(45.83%)、凝结芽孢杆菌(20.83%)和耐久肠球菌(12.28%)中。MTP试验结果显示70%的菌株都具有产生物被膜的能力,其多重耐药性显著高于不产生物被膜的菌株。综上所述,乳酸菌的耐药性可能成为重要的食品安全隐患,急需出台一系列用药规定,减少抗生素的选择压力,加强食用菌株的安全性检测。     

四川泡豇豆原料表皮附生乳酸菌抗生素抗性及抗性基因污染分析

以鲜豇豆为研究对象,利用生理生化特征、16S r RNA、抗生素抗性和抗性基因检测分析其表皮附生乳酸菌对氯霉素(CHL)、四环素(TET)和氨苄青霉素(AMP)的抗性与抗性基因。结果表明:从鲜豇豆表皮共分离得到182株乳酸菌,分别属于Weissella confuse(50.0%)、Weissella cibaria(15.4%)、Enterococcus sulfurous(7.1%)和Lactococcus lactis subsp.lactis(27.5%)。32株(17.6%)乳酸菌对CHL和TET有抗性,其中,6株W.confuse(3.3%)和4株L.lactis subsp.Lactis(2.1%)对CHL单一抗性,4株W.confuse(2.1%)和5株L.lactis subsp.Lactis(2.7%)对TET单一抗性,6株W.confuse(3.2%)、2株W.cibaria(1.1%)、1株E.sulfurous(0.5%)和4株L.lactis subsp.Lactis(2.1%)对CHL和TET二重抗性;编码外排泵基因efr A、efr B、nor B、nor C、nor E和sug E中,efr B的检出率最高,达31.3%,efr B和sug E的检出率最低,为3.1%。TET被检抗性基因tet(A)、tet(B)、tet(C)、tet(D)、tet(H)和tet(L)中,tet(C)的检出率最高,达90.9%,tet(B)的检出率最低,为4.5%。     

自然发酵风干肠中乳酸菌的分离与鉴定

以自然发酵风干肠为研究对象,分析了细菌总数和乳酸菌菌数的变化情况,结果表明,乳酸菌为风干肠发酵过程中的优势菌群.通过对风干肠中乳酸菌的分离鉴定,共分离出戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp lactis)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)和发酵乳杆菌(Lactobacilus fermentum)5株乳酸菌.24h产酸速率测定结果表明,弯曲乳杆菌＞短乳杆菌＞乳酸乳球菌乳酸亚种＞戊糖片球菌＞发酵乳杆菌.     

链霉素抗性选育ε-聚赖氨酸高产菌株

基于核糖体工程的育种方法,通过逐级赋予小白链霉菌M-Z18链霉素抗性,以提高产生菌的ε-聚赖氨酸(ε-PL)合成能力。首先,通过筛选低浓度链霉素(1~5 MIC)抗性突变株,将M-Z18的ε-PL的摇瓶产量从1.6提高到2.43 g/L;随后,再次提升菌株的链霉素耐受性(5~10MIC),进一步增强菌株的ε-PL合成能力;最后,获得一株高产突变菌SS-19,其ε-PL产量和单位菌体合成能力分别为3.13 g/L和0.58 g/g,较出发菌M-Z18分别提高了95.63%和137.61%。研究表明,SS-19的中心碳代谢途径及ε-PL合成相关的关键酶活性有所增加,意味着ε-PL的合成代谢被明显加强。在以葡萄糖为碳源的RSM培养基中,SS-19比前期育种获得的高产菌株表现出更好的ε-PL合成能力。以上结果表明,通过逐步引入高浓度链霉素抗性的筛选方法可有效提升小白链霉菌的ε-PL产量。     

纳他霉素高产菌株的选育及其发酵条件的研究

利用链霉素抗性突变选育纳他霉素高产菌株 ,即将经过紫外线诱变处理的纳他霉素(natamycin)产生菌褐黄孢链霉菌 (Streptomycesgilvosporeus)ATCC1 332 6菌株孢子涂布在含有链霉素最小抑制浓度 (0 6μg/mL)的培养基平板上 ,获得了 1 2 2株链霉素抗性突变株。其中纳他霉素产量高于出发菌株的有 1 3株。其中突变株SG 56的生产能力比出发菌株提高到 1 4 6 % ,研究了其发酵性能 ,优化了培养基组成和发酵工艺条件 ,使纳他霉素产量提高到 1 70 %。     

织物热阻和湿阻的预测研究

提出了利用织物常规性能预测织物的热阻和湿阻的方法，并指出了预测误差的大小。     

烟草诱导抗性的研究进展

综述了系统获得性抗性和诱导系统抗性在烟草上的研究现状,尤其是在不同激发子所诱导的烟草系统获得性抗性的信号转导、保护性酶系活性、与抗病性相关的物质变化等方面。     

密云区致泻大肠埃希菌耐药性及耐药基因研究

目的建立密云地区腹泻患者致泻大肠埃希氏菌的毒力基因及耐药基因数据库。方法采集腹泻患者粪便样本,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法鉴定致泻大肠埃希氏菌并确定毒力基因,采用微量肉汤稀释法确定耐药性,采用普通PCR方法对耐药基因进行检测。结果 2112份粪便样本中检出致泻大肠埃希氏菌114株,肠聚集性大肠埃希氏菌(enteroaggregative Escherichia coli,EAEC)占57.9%,毒力基因以astA+pic、eae为主,萘啶酸(nalidixic acid, NAL)、氨苄西林(ampicillin, AMP)、四环素(tetracycline, TET)、磺胺异恶唑(sulfamethoxazole, SUL)耐药率均超过30%, 41株菌株多重耐药,主要流行的耐药因子为GyrA、GyrB、blaTEM、ParC、aadA1、tetA、tetB、SUL2、floR、aac(3′)-IIa。结论密云地区腹泻患者致泻大肠埃希氏菌多重耐药性及耐药基因的存在情况较为普遍,应开展长期的主动监测。     

迟缓爱德华氏菌耐药性分析研究

目的分析来自不同地区和宿主的迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda, Et)耐药特性及抗性基因。方法采用VITEK 2 Compact全自动分析系统,利用VITEK 2 Compact AST-GN13(22095)药敏鉴定卡对23株Et进行药敏试验;通过实时荧光PCR法检测抗性基因。结果manE291、ET-0711059、L49231、DT这4株Et对复方新诺明耐药,其中ET-0711059还对包括氨苄西林、庆大霉素等在内的其余7种抗生素耐药,对环丙沙星处于中介耐药。23株Et经氨基糖苷类、四环素类、磺胺类、喹诺酮类、大环内酯类等30种抗性基因检测,16%Et含有氨基糖苷类ant(3")-I抗性基因及磺胺类sul1抗性基因;另有16%Et含磺胺类sul2抗性基因;40%Et含四环素类tetA抗性基因。所有耐药菌株均为鱼源株,6株人源菌株不表现耐药。结论所检测的Et菌株除了1株多重耐药,其余菌株的耐药性并不突出,主要表现为对复方新诺明的耐药。在检测的Et菌株中分布有一定比例的抗性基因,但和耐药性并不完全相关。     

高效液相色谱测定蜂蜜中链霉素含量

建立了反相高效液相色谱分析蜂蜜中链霉素残留量的方法.样品采用酸性甲醇溶液提取,研究了样品在C18色谱柱上的保留行为.采用高效液相色谱法分离,外标法定量分析,标准曲线的线性关系数为0.9998,线性范围为8.7～870μg/L.蜂蜜中链霉素平均回收率89.0%～110.0%,最低检出限低于10μg/kg.该分析方法具有良好的重现性,定量结果的相对标准偏差均小于10%.     

生猪屠宰环节沙门氏菌携带状况、耐药性及其耐药基因分析

目的 调查河南省生猪屠宰环节沙门氏菌污染情况, 并分析其耐药性及耐药基因。方法 本研究从河南省不同规模的生猪屠宰企业共采集825份样品, 通过常规检测方法和分子生物学技术对样品进行沙门氏菌分离鉴定, 然后通过药敏实验检测沙门氏菌分离株对17种抗菌药的敏感性; 对部分沙门氏菌分离株进行了12种耐药基因检测。结果 样品中共分离出沙门氏菌241株, 总分离率为29.21%; 所有受试沙门氏菌分离株均对阿米卡星敏感, 而对多西环素耐受性最强(耐药率为95.00%), 其次对其他抗菌药都表现出不同程度的耐受性; 上述分离株存在着严重的多重耐药问题, 其中耐3种及以上药物的菌株占比高达98.34%。耐药基因检测结果显示, 受试菌株均含有针对全部5大类受试药物的抗性基因, 但aac(3)-Ⅰa、gurA、tetB 3个耐药基因均未有检出。结论 河南省生猪屠宰企业存在严重的沙门氏菌污染情况, 且菌株存在严重的耐药性。     

有机白萝卜表皮附生乳酸菌抗生素耐药性分析

以市售有机白萝卜为研究对象,分析其表皮附生乳酸菌对四环素（tetracycline,TET）、链霉素（streptomycin,STR）和青霉素G（penicillin G,PEN）的耐药性。分离菌株的生理生化特征、随机扩增多态性DNA聚类（random amplified polymorphic DNA,RAPD）、16S rRNA、耐药性和耐药表型多态分析表明：有机白萝卜表皮附生有约4.67×103 CFU/cm2的乳酸菌。分离的187 株乳酸菌分别属于Pediococcus pentosaceus（114/187）、Weissella cibaria（9/187）、Leuconostoc mesenteroides（18/187）、Leuconostoc pseudomesenteroides（7/187）、Leuconostoc citreum（20/187）和Leuconostoc holzapfelii（19/187）。其中,25 株（13.37%）对TET、STR和PEN表现出单一或多重耐药性。在P. pentosaceus中,分别有2 株对STR、TET和PEN三重耐药,13 株对STR和TET二重耐药和4 株对TET单一耐药;L. citreum中,分别有1 株对STR、TET和PEN三重耐药和1 株对STR单一耐药;L. mesenteroides中,分别有1 株对TET单一耐药和1 株对TET和PEN二重耐药;L. pseudomesenteroides和W. cibaria中,分别有1 株对STR和TET、STR和PEN二重耐药。     

武汉地区食源性沙门氏菌耐药特征分析

目的分析武汉市售肉类中分离的82株沙门氏菌的药物敏感性及耐药基因。方法根据美国临床和实验室标准协会(Clinical&Laboratory Standards Institute,CLSI)相应标准获得沙门氏菌耐药实验种类和浓度,定制药敏板,采用最低抑菌浓度法(minimum inhibitory concentration,MIC)进行药敏实验,并通过PCR方法检测耐药基因的携带情况。结果药物敏感性试验结果显示,82株沙门氏菌对四环素耐药率最高,有66株菌株对四环素耐药,耐药率高达79.52%,对复方磺胺和氨苄西林的耐药率较高,耐药率分别为49.40%和48.19%;对头孢类药物的耐药率较低,对亚胺培南未表现出耐药性。耐药基因检测结果显示,82株沙门氏菌中四环素耐药基因tetA的检出率最高,且有54株沙门氏菌携带多重耐药基因,头孢类药物耐药基因blaCTX检出率较低,仅为3.66%。结论武汉市食源性沙门氏菌耐药情况较为严重,部分常见抗生素耐药性较高,对临床用药治疗和食源性病菌预防造成巨大的影响。