不同分子量真鲷鱼骨多肽抗氧化活性的研究

以真鲷鱼骨为原料,经胰蛋白酶、风味蛋白酶酶解后,用截留分子量分别为10、5、3ku的超滤膜将其分离成4个分子量段,研究了不同分子量段对·OH、DPPH·和O2-·的清除能力,对Fe3+还原能力以及对油脂的抗氧化性。结果表明:不同分子量多肽组分均具有抗氧化活性,其抗氧化活性强弱为:分子量小于3ku多肽组分>分子量在3~5ku多肽>分子量在5~10ku多肽>分子量大于10ku多肽。     

洋葱蛋白及多肽体外抗氧化活性研究

目的:测定洋葱蛋白及多肽的体外抗氧化性。方法:以Vc为对照品,采用普鲁士蓝法、邻二氮菲-Fe~(2+)氧化法、邻苯三酚自氧化法、DPPH法分别测定洋葱多肽与蛋白的总还原能力和对·OH、O_2~-·、DPPH·3种自由基的清除能力。结果:相同浓度的洋葱多肽总还原能力稍强于洋葱蛋白,并在0.032 g/m L时达到对照品Vc总还原能力的58%以上;浓度为0.24 g/m L时洋葱蛋白和多肽的O_2~-·清除率分别为53%和63%;浓度大于0.24 g/m L时,洋葱多肽及蛋白的DPPH·清除率分别为57%和42%;浓度高于0.032 g/m L时,洋葱蛋白的·OH清除效果稍高于多肽,达到Vc对·OH的清除率的50%以上。结论:洋葱蛋白及多肽均具有一定体外抗氧化能力,且洋葱多肽的总还原能力、对O_2~-·和DPPH·的清除能力强于洋葱蛋白,较高浓度时洋葱蛋白对·OH的清除能力则强于多肽。     

枸杞多肽的制备及其抗氧化活性研究

研究了中性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合水解制备枸杞活性肽的工艺条件,并采用离子交换层析和凝胶柱层析对酶解产物进行纯化,以制备具有较高抗氧化活力的枸杞多肽.以DPPH·清除率为指标,通过响应面优化得到最佳酶解工艺条件:酶解温度51℃,中性蛋白酶与木瓜蛋白酶质量比1∶2.65,酶解时间4.3 h,p H=7.0.此条件下得到的枸杞多肽对DPPH·清除率为(23.32±0.47)%.分别采用DEAE阴离子交换层析和Sephadex G-25凝胶柱层析对枸杞多肽进行分离,最终获得DPPH·和OH·清除率分别为(72.65±1.84)%和(58.72±1.88)%的A-1组分,该组分的DPPH·清除能力、ABTS+·清除能力和OH·清除能力均随浓度的增大而提高.     

超滤对大鲵多肽抗氧化活性的影响

为了获得具有高抗氧化性的大鲵多肽,以大鲵肌肉为原料,经复合酶(风味蛋白酶和中性蛋白酶)酶解后,水解度达到44.12%,制得多肽得率为90.28%的大鲵多肽酶解液,用截留分子量分别为20、5、2、0.3 ku的超滤膜将其分离成5个分子量段,研究不同分子量段大鲵多肽对DPPH·、·OH和O-2·清除能力的影响。结果表明:不同分子量段的大鲵多肽组分的抗氧化能力大小顺序为:0.3~2 ku组分2~5 ku组分小于0.3 ku组分5~20 ku组分。分子量为0.3~2 ku的大鲵多肽抗氧化活性最高,其对DPPH·、·OH和O-2·的EC50分别为0.4、0.7、1.5 mg/m L。因此,采用截留分子量为2 ku和0.3 ku的超滤膜可以分离得到具有高抗氧化活性的大鲵多肽。     

核桃多肽体外抗氧化活性研究

以提取油脂后的核桃渣为原料分离出核桃蛋白,利用酸性、碱性、中性3种蛋白酶复合酶解核桃蛋白,制备水解度高的核桃多肽。通过测定核桃多肽的总还原能力、超氧阴离子自由基(O2-·)清除能力、羟自由基(·OH)清除能力、二苯代苦味酰基自由基(DPPH)清除能力,研究核桃多肽的抗氧化活性大小。结果表明,3种酶协同对核桃蛋白进行水解,水解度可达到45.58%,核桃多肽有一定的体外抗氧化活性,其总还原能力、对羟基自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基清除率与质量浓度呈量效关系。     

响应面法优化酶解制备核桃多肽工艺

以高蛋白核桃粉为原料,采用酶解法制备核桃多肽。在单因素实验基础上,根据Box-Behnken中心组合实验设计原理,以多肽质量浓度和水解度为响应值,研究p H、温度、加酶量和时间对其影响,在此基础上将酶解液通过超滤系统分离得到不同分子量多肽,并测定不同分子量多肽的抗氧化活性。结果表明:料液比1∶20 g/m L磨浆时蛋白质溶出较充分,碱性和木瓜蛋白酶按1∶1复配,风味蛋白酶添加量2000 U/g辅助酶解时水解效果较好,酶解法提取核桃多肽最优工艺:p H 7.10,温度50℃,加酶量8000 U/g,时间3.0 h,该条件下多肽质量浓度为10.01 mg/m L,水解度为11.45%,接近理论值。经超滤分离后得到≤5、5~10、10~30和≥30 k Da四种分子量多肽,不同分子量多肽都具有一定的抗氧化活性,并且≤5 k Da多肽的还原力(IC_(50)=5.47 mg/m L)、DPPH·清除能力(IC_(50)=1.03 mg/m L)、·OH清除能力(IC_(50)=5.02 mg/m L)、O-2·清除能力(IC_(50)=0.68 mg/m L)和总抗氧化能力(14.18 U/m L)均高于其它三种多肽。本研究为核桃产品的深加工和开发提供了一定的理论指导。     

大鲵多肽体外抗氧化活性研究

通过4种体外抗氧化评价方法(DPPH·清除能力、ABTS~+·清除能力、·OH清除能力、过氧化氢清除能力)综合评价大鲵多肽的抗氧化能力,在此基础上,采用超滤技术对大鲵肌肉酶解液进行分离纯化,比较各组分清除DPPH·和·OH的能力,最后分析比较大鲵肌肉、酶解物及超滤组分ADPP-Ⅰ中氨基酸成分。结果:大鲵多肽在不同的体外抗氧化模型中均具有良好的抗氧化能力;4个超滤组分ADPP-Ⅳ、ADPP-Ⅲ、ADPP-Ⅱ和ADPP-Ⅰ的比例分别为17.85%、10.02%、64.92%和7.21%,ADPP-Ⅰ清除DPPH·和·OH的能力最强,达85.83%,较超滤前提高了23.09%;对氨基酸组成进行分析,发现ADPP-Ⅰ中的疏水性氨基酸含量由酶解物的35.59%增加到41.69%,芳香族氨基酸含量由酶解物的6.42%增加到8.30%。结论:大鲵多肽具有良好的抗氧化能力,超滤组分ADPP-Ⅰ中的疏水性氨基酸和芳香族氨基酸含量均相应地提高,在一定程度上有利于大鲵多肽抗氧化活性的提高。     

罗非鱼内脏蛋白酶解超滤产物的抗氧化活性研究

将罗非鱼内脏蛋白水解得到可溶性多肽,利用超滤技术对水解产物进行分级分离,并检测酶解产物及其超滤产物的体外还原能力、清除DPPH自由基能力、清除超氧阴离子能力及抑制卵黄磷脂氧化能力。结果表明:酶解可以得到分子量范围宽、具有多种抗氧化能力的多肽;超滤分级后,分子量5kDa的多肽组分抗氧化能力最强,尤其是该组分清除超氧阴离子的能力及抑制脂质过氧化的能力接近VC,其IC50值与VC的IC50值处于同一个数量级。     

澳洲坚果抗氧化肽的分离纯化及肽段鉴定

为研究澳洲坚果抗氧化肽的抗氧化活性和氨基酸组成,以复配蛋白酶水解澳洲坚果粕制备粗多肽,利用超滤、大孔树脂纯化技术制备了抗氧化活性最佳的分子量小于1000 Da的多肽,采用Sephadex G-15凝胶对其分离并评价各组分对DPPH、羟基、ABTS+自由基的清除能力与还原能力,筛选出抗氧化活性最强组分,利用液相色谱-串联质谱技术(liquid chromatography and tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)进行鉴定并分析。结果表明,葡聚糖凝胶柱层析分离出G1、G2、G3组分,其中G3具有最佳的抗氧化活性,其羟基自由基清除能力半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC₅₀)6.18 mg/mL与还原能力IC₅₀ 2.19 mg/mL优于谷胱甘肽,DPPH自由基清除能力IC₅₀ 0.50 mg/mL,ABTS+自由基清除能力IC₅₀ 0.02 mg/mL;通过液相色谱-串联质谱鉴定G3含有46个肽段,肽段长度均小于...     

鲨鱼皮明胶水解肽的制备、分离纯化与抗氧化活性研究

目的:基于鲨鱼皮明胶水解肽的抗氧化活性,制备、分离纯化高活性的抗氧化多肽。方法:分别使用5种商业蛋白酶水解鲨鱼皮明胶,测定其水解产物的DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除活性以及对Fe2+诱导卵黄脂蛋白多不饱和脂肪酸过氧化反应的抑制作用;利用SP-Sephadex C-25阳离子交换色谱、Sephadex G-50凝胶过滤色谱和C18反向高效液相色谱(HPLC)对酸性蛋白酶的水解产物进行分离纯化。结果:酸性蛋白酶水解产物具有最佳的抗氧化活性;利用SP-Sephadex C-25、Sephadex G-50和C18-HPLC对酸性蛋白酶的水解产物进行分离纯化,所得洗脱组分E2具有最强的清除DPPH自由基活性。经过ESI质谱分析,其多肽组分的主要分子质量为1356u。结论:本研究制备并分离纯化得到高活性的抗氧化多肽,为将来的生产应用提供理论依据。     

内外源酶制备海参肽的组成及抗氧化性质研究

为了对比不同方法制备海参肽的组成和抗氧化性质差异,采用内源酶（海参自溶）方法制备海参肽,并与外源酶（中性蛋白酶,碱性蛋白酶和胰蛋白酶）酶解制备的海参肽相比较。结果表明,自溶方法制备的海参粗肽水解度从高到低依次为自溶8 h>自溶4 h>自溶2 h,外源酶制备的海参粗肽水解度从高到低依次为胰蛋白酶酶解>碱性蛋白酶酶解>中性蛋白酶酶解;自溶2、4和8 h 产生的海参肽94%以上分子量小于314 Da,酶解制备的海参肽分子量主要分布在1~8.5 kDa;随着自溶时间的增加,自溶制备海参肽的氨基酸种类逐渐增多,且自溶8 h时呈味氨基酸含量较高;自溶2、4和8 h制备的海参肽比酶解法制备的海参肽具有更好的羟基自由基清除能力、DPPH自由基清除能力以及Fe3+还原能力,在浓度10 mg/mL时,自溶8 h羟基自由基清除率为93.4%,DPPH自由基清除率为85.8%,Fe3+还原力为0.740。综上,自溶方法制备的海参肽具有自身独特的优势,本研究可为海参肽的制备提供理论支撑。     

不同蛋白酶制备藜麦麸皮多肽及其活性研究

以藜麦麸皮为原料,利用高浓度乙醇粗提藜麦麸皮蛋白,并用4种蛋白酶(碱性、中性、复合、风味蛋白酶)酶解蛋白得到多肽。测定醇沉蛋白的分子质量分布、氨基酸组成以及4种蛋白酶的酶解能力和所得多肽的活性。结果表明,藜麦麸皮蛋白分子质量主要条带分布在22.8 k、39.1 k和52.7 kDa,其含有17种氨基酸,必需氨基酸/总氨基酸为35.17%,疏水性氨基酸/总氨基酸为28.48%。碱性蛋白酶对藜麦麸皮蛋白具有较高的水解能力,在120 min时达到13%,肽得率高达88.88%。风味蛋白酶酶解的多肽具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性和Fe^2+螯合能力,分别为81.67%和89.03%;碱性蛋白酶酶解的多肽对酪氨酸酶的抑制率达到73.17%;中性蛋白酶酶解的多肽对DPPH自由基清除能力较强,为84.91%。研究结果表明藜麦多肽具有良好的生物活性,为藜麦麸皮进一步开发利用提供了一定的理论依据。     

响应面法优化秋刀鱼酶解制备抗氧化活性肽的工艺

采用酶解法从秋刀鱼肌肉中提取抗氧化活性肽,以水解度（DH）、TCA-可溶性肽含量、DPPH自由基清除率、Fe3+还原力、·OH清除率以及O₂?·清除率为指标,从六种商业用酶中（中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶）筛选出最适蛋白酶。以料液比、酶添加量、酶解时间、温度、pH五个因素进行单因素实验,选取影响酶解显著的三个因素进行响应面优化。并对最优条件下的酶解液进行分子量分布的测定和游离氨基酸含量的测定。结果显示:最适蛋白酶为中性蛋白酶。三因素对酶解液抗氧化活性的影响大小为料液比>酶添加量>酶解时间,秋刀鱼抗氧化活性肽的最佳制备工艺为料液比为1:2.67（质量体积比,g/mL）、酶添加量为0.60%、酶解时间为4.04 h、温度为50 ℃、pH7.0,在此条件下制得的酶解液DPPH自由基清除率为92.33%,Fe3+还原力为0.711（20 mg/mL）,与预测值无显著性差异（P>0.05）。可见,采用响应面法优化酶解工艺制备的秋刀鱼抗氧化活性肽具有较高的抗氧化活性。最佳酶解工艺条件下制得的酶解液中,分子量<3000 Da的组分占97.87%。共检测出16种游离氨基酸,其中必需氨基酸占总氨基酸含量的39.79%,抗氧化活性氨基酸占总氨基酸含量的37.01%。本文为秋刀鱼的高值化利用和多肽类功能性食品的开发提供了一定的参考。     

冬荪及其蛋托的成分分析和抗氧化活性研究

对冬荪及其蛋托的成分进行分析,并测定二者对DPPH自由基、羟基自由基清除能力和总还原能力,为冬荪蛋托的开发利用提供参考依据。研究结果表明,冬荪及冬荪蛋托多糖含量分别为2.82%、10.26%;蛋白质含量分别为8.22%、5.56%;粗纤维含量分别为11.43%、11.56%;黄酮含量分别为0.0588%、0.182%;总酚含量分别为1.55%、2.01%;两者均含有16种氨基酸,总氨基酸含量分别为14.09%、4.62%,其中必需氨基酸/总氨基酸比值分别为32%、33%;两者均含有Cr、Ca、Fe、Mg、Mn、Zn、Cu、Sr等矿物质元素,其中含量最高的元素分别为Mg(1916 mg/kg)、Ca(3216.07 mg/kg);冬荪及冬荪蛋托各提取物抗氧化能力差异较大,对DPPH?清除能力最强的提取物都是75%醇提物,对?OH清除能力最强的分别为粗多糖和95%醇提物,对Fe3+还原能力最强的为粗多糖和75%醇提物。     

酶法制备鸡肺抗氧化肽及其序列分析

在家禽屠宰工业中鸡肺一般用作低值饲料,为了增加鸡肺的附加值,本文测定了鸡肺的基本化学成分,并通过酶解的方式制备了抗氧化肽。首先以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）和肽含量为指标,利用单因素实验探索了酶的种类、pH、酶添加量、酶解时间对鸡肺抗氧化肽活性的影响。在此基础上,通过Box-Behnken响应曲面试验优化了胃蛋白酶酶解制备鸡肺抗氧化肽的最优反应条件,得到主要影响因素为pH、酶添加量、酶解时间（P<0.05）,拟合出最优酶解条件为pH3.60,酶添加量4200 U/g,酶解时间5 h,验证试验的DPPH·清除率和粗肽含量分别为94.96%和88.42%。与未经酶解的鸡肺匀浆上清液相比,酶解得到的粗肽液游离氨基酸含量显著升高（P<0.05）。超滤产物中<3 kDa组分抗氧化能力最强,该组分分子量<1000 Da的比例为86.70%,液质联用（liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry,LC-MS/MS）测序发现疏水残基比≥50%的肽段高达60.97%,Val和Leu占肽链N端出现频率的48.78%。研究结果可为屠宰副产物鸡肺的综合利用提供理论依据和技术支持。     

Alcalase降解水不溶性鸡肉蛋白规律及其产物清除DPPH活性研究

研究了Alcalase降解水不溶性鸡肉蛋白的规律及其产物清除DPPH自由基活性。结果表明,随酶解时间延长,可溶性蛋白质、氨基酸含量不断增加,而肽含量则在水解前8h达到最大,随后不断降低;肽的分子量分布趋势总体表现为大分子量的肽逐渐减少,小分子量肽的含量逐渐增多,肽分子量分布图中肽峰值不断向后推移;Alcalase对分子量在3000～15000Da间的肽段降解能力较弱,水解24h后,这部分肽占总肽量的比值仍为89.93%。水不溶性鸡肉蛋白Alcalase酶解产物有明显的清除DPPH活性,其清除DPPH活性在酶解4h时达到最大,随后不断下降;对于同一酶解时间的产物,浓度越大,其清除DPPH活性越强,但其清除DPPH能力并不与酶解液浓度成倍数关系。     

Fractionation and purification of antioxidant peptides from abalone viscera by a combination of Sephadex G-15 and Toyopearl HW-40F chromatography

Abalone viscera, a protein-rich by-products from the abalone processing industry, are normally discarded as wastes. In the present study, four different proteases were used to hydrolyse abalone viscera to prepare high-activity antioxidant peptides, and their hydrolysis effects were compared. Although the hydrolytic abilities of papain and trypsin were inferior to the alcalase and neutrase, their use resulted in significantly (P < 0.05) higher scavenging activities for DPPH. The hydrolysates mainly consisted of peptides with a molecular weight <3 kDa, and the fractionation was achieved using a combination of Sephadex G-15 and Toyopearl HW-40F gel filtration chromatography, which overcomes the disadvantages of traditional membrane separation technology in fractionating peptides with relatively similar molecular weight distribution. The DPPH scavenging activities of the components containing peptides <1 kDa (fractions E) were significantly (P < 0.01) higher than those containing peptides >1 kDa. The different fractions E were further purified by reversed-phase high-performance liquid chromatography, and a total of 16 target peptides, containing 4-8 amino acids, enriched in hydrophobic amino acids and C-terminal Arg, with molecular weights ranging from 500 to 850 Da, were identified.     

酶解牡丹籽粕蛋白制备抗氧化肽的工艺优化

利用制备的牡丹籽粕蛋白为原料,对其进行酶解以获得具有抗氧化活性的多肽,为牡丹籽粕的精深加工提供理论依据。首先进行蛋白酶的筛选,选取最佳的碱性蛋白酶对碱溶酸沉法制备的牡丹籽饼粕蛋白进行酶解;以水解度和DPPH自由基清除力为指标进行单因素实验,分别考察底物浓度、酶解时间、加酶量、pH和酶解温度对制备抗氧化活性肽的影响;以DPPH自由基清除力为响应值,对牡丹籽粕蛋白抗氧化肽的制备工艺进行响应面法优化,确定的最佳制备工艺为:底物浓度0.7%、酶解时间2 h、酶用量4.60%、酶解温度56℃和pH8.0。抗氧化实验结果表明,制备的抗氧化肽对DPPH自由基的清除率为52.49%;经17种水解氨基酸组成分析证明,必需氨基酸占水解氨基酸总量的32.24%,具有较高的营养价值。     

琥珀酸脱酰胺对小麦面筋蛋白酶解产物抗氧化性的影响

研究琥珀酸不同脱酰胺程度对小麦面筋蛋白胰酶的酶解产物抗氧化性的影响。在相同水解度下,以DPPH.清除率、.OH清除率、ORAC值为抗氧化指标,结果表明低脱酰胺程度(22.4%)的小麦面筋蛋白酶解产物的抗氧化性有较大幅度的提高,高脱酰胺程度(60.4%)的小麦面筋蛋白酶解产物的抗氧化性降低。水解度15%的酶解产物的肽分子量分布表明,低脱酰胺的小麦面筋蛋白酶解产物中分子量小于3000u的肽段增加,高脱酰胺的小麦面筋蛋白酶解产物中分子量小于3000u的肽段减少;在相同水解度下的氨基酸分析结果表明,脱酰胺后的小麦面筋蛋白酶解生成的肽的疏水性和抗氧化性的氨基酸含量提高。因此,低脱酰胺的小麦面筋蛋白酶解产物抗氧化性提高的主要原因是产物中含疏水性和抗氧化性氨基酸的小分子肽含量提高。     

3种鸭内脏基本成分及其酶解液体外抗氧化活性对比分析

摘 要: 目的 对比分析鸭心、鸭肠、鸭胗基本成分及酶解产物的理化性质。方法 参照食品安全国家标准测定鸭心、鸭肠、鸭胗的基本成分、水解度, 采用ABTS阳离子自由基清除能力和Fe2+螯合能力评价3种酶解产物的抗氧化能力强弱; 使用超高效液相色谱法与氨基酸测定仪测定鸭心、鸭肠、鸭胗酶解产物的分子质量及其氨基酸组成。结果 鸭心、鸭肠、鸭胗的基本成分存在一定的差异, 其中鸭心的蛋白质含量、灰分含量和粗脂肪含量最高, 占比分别为19.12%、2.35%和2.48%。鸭肠水分含量最高, 占比为86.01%, 粗脂肪含量最低, 占比0.58%。鸭胗灰分含量最低, 占比0.76%。鸭胗的水解度最高, 为10.59%。在ABTS阳离子自由基清除能力和Fe2+螯合能力测试方法下, 3种酶解产物均具有良好的抗氧化能力, 其中鸭心表现出的体外抗氧化能力最强。3种样品酶解后的肽主要分布在75~1 000Da。鸭心、鸭肠、鸭胗酶解产物中含有丰富的氨基酸; 3种酶解产物氨基酸组成中疏水性氨基酸序列占比分别为31.07%、29.19%和29.62%。结论 鸭心、鸭肠、鸭胗的基本成分组成存在一定的差异,鸭心体外抗氧化活性最强。 本研究可为鸭副产物的综合利用提供理论依据。