辉光放电等离子体降解啤酒中TG2毒素

目的:探讨辉光放电等离子体(GDP)降解啤酒中T-2毒素的最佳工艺及对啤酒理化指标的影响。方法:通过Box-Behnken方法进行四因素三水平的响应面优化试验,确定啤酒中T-2毒素的最佳降解条件。结果:当放电电压为570 V,作用时间为18 min,放电电流为99 mA,T-2毒素初始质量浓度为8.5μg/mL时,T-2毒素降解效率最高(89.21%);经GDP处理后,啤酒泡持性显著降低(P<0.05),其他指标无明显变化。结论:通过响应面优化模型获得的GDP最佳降解条件可以用于啤酒中T-2毒素的降解;GDP处理能够影响啤酒泡持性,但对其他指标无明显影响。     

高效液相色谱-串联质谱法测定3种水产品中的T-2毒素与HT-2毒素

建立高效液相色谱-串联质谱定量快速检测罗非鱼、南美白对虾和黄金贝中的T-2毒素与HT-2毒素方法。以10 mL乙酸乙酯作为提取溶剂,振荡提取,无水硫酸钠除水,定量移取5 mL提取液氮气吹干后用1 mL含有0.1%甲酸的甲醇-5 mmol/L乙酸铵溶液（3∶7,V/V）复溶,正己烷脱脂净化,基质匹配法外标定量。3 种水产品中T-2毒素和HT-2毒素的检出限分别为2 μg/kg和4 μg/kg。T-2毒素质量浓度为2～100 ng/mL,HT-2毒素质量浓度为4～200 ng/mL,范围内线性良好。在3 种样本中进行3 个水平添加实验（n=6）,T-2毒素回收率为84.3%～109.9%,HT-2毒素的回收率为90.9%～103.2%。T-2毒素的相对标准偏差为2.0%～8.7%,HT-2毒素的相对标准偏差为2.6%～10.6%。本方法简便快速、准确度好、精密度高,适用于3 种代表性水产品中T-2与HT-2毒素的同时检测。     

T-2毒素对凡纳滨对虾的经口急性毒性效应研究

通过T-2毒素微胶囊毒饵料一次性染毒凡纳滨对虾,采用模型拟合法测定T-2毒素对凡纳滨对虾经口LD50,并分析Ca2+-ATPase、多酚氧化酶(PPO)活力以及肌肉病理组织学变化,进而探明T-2毒素对凡纳滨对虾急性毒性效应。结果表明,T-2毒素对凡纳滨对虾的急性毒性经口一次性暴露的LD50为1.22 mg/(kg·bw),T-2毒素对PPO酶活性和Ca2+-ATPase活性的急性毒性效应ED50分别为0.05和3.22 mg/(kg·bw),比较风险评估指数RI可知,PPO活性可作为生物学效应标记描述T-2毒素对对虾的急性毒性效应,且比Ca2+-ATPase更加灵敏。T-2毒素急性暴露可导致肌纤维间隙面积比增大,可导致对虾肌肉品质劣化。采用LC-MS/MS定量检测染毒对虾肌肉中的T-2毒素,但是没有发现游离态T-2毒素残留,说明对虾中T-2毒素急性暴露不会引起物质蓄积,但却产生功能蓄积,可能是T-2毒素以隐蔽态形式存在,导致初始轻微损伤逐渐累加的结果。     

基于毒性效应通路荧光细胞传感模型的T-2毒素毒性筛查

为实现T-2毒素的可视化毒性筛查,利用T-2毒素毒性通路中AP-1的关键靶点应答元件TRE与红色荧光蛋白（mCherry）的启动子构建pcDNA3.1-TRE-mCherry荧光质粒,建立荧光HEK293细胞传感筛查模型;同时,为验证该细胞传感模型的适用性,对实际样品中残留的T-2毒素和T-2毒素的主要代谢产物HT-2毒素进行了毒性监测。结果表明,T-2毒素刺激模式细胞8 h时,细胞内的红色荧光强度达到最高值并趋于稳定。当T-2毒素质量浓度在1~25 ng/mL时,其与荧光强度呈线性相关,线性方程为y=1.149 38x+64.72,R²=0.969。根据剂量曲线得出T-2毒素的EC₅₀为16.27 ng/mL,检测限为0.691 ng/mL。该细胞传感模型用于样品加标实验,平均加标回收率为86.13%~126.20%,对HT-2毒素进行毒性筛查得到EC₅₀为27.65 ng/mL。     

T-2毒素对人肾小管上皮细胞HK-2体外增殖和凋亡的影响

探讨T-2毒素对人肾小管上皮细胞HK-2体外增殖和凋亡的影响。将体外培养的HK-2细胞,经不同浓度的T-2毒素作用72 h后,分别测定T-2毒素对HK-2细胞增殖抑制率、细胞形态、DNA片段化、细胞凋亡率、细胞周期分布和caspase-3活性的影响。结果表明,T-2毒素对HK-2细胞具有增殖抑制作用,抑制率随浓度升高而增大,IC50值为49. 34 nmol/L。T-2毒素在10～40 nmol/L可剂量依赖性的诱导HK-2细胞凋亡,且20 nmol/L下HK-2细胞即可出现染色质固缩等凋亡细胞的典型特征。同时,10～40 nmol/L,T-2毒素可通过引起G2/M期阻滞影响细胞的周期分布。此外,T-2毒素在10～40 nmol/L下可引起caspase-3活性剂量依赖性增强,与对照组相比,最大可提高1. 93倍(P 0. 05)。因此,该研究为阐明T-2毒素的肾脏毒性作用机制提供了理论依据。     

T-2毒素对凡纳滨对虾肌肉蛋白质含量与组成的影响

以凡纳滨对虾为研究对象,采用肌肉蛋白质分离法提取蓄积染毒的染毒组和对照组中对虾肌肉的各类蛋白质成分。以考马斯亮蓝法测定其含量,应用SDS-PAGE电泳分析各类蛋白的组成。结果表明:T-2毒素对肌肉蛋白质组成成分影响显著(P0.05);对于总蛋白,20 d蓄积染毒组和生物半衰期剂量组的对虾总蛋白中20.1ku条带的颜色变化随T-2毒素浓度的增加逐渐加深,且20 d蓄积染毒的高剂量组在29 ku处出现新增条带;对于水溶性蛋白,20 d蓄积染毒组的42 ku条带的颜色随T-2毒素浓度的增加逐渐加深,而生物半衰期剂量组的对虾则没有明显表现;对于肌原纤维蛋白,20 d蓄积染毒组的42 ku出现新增的条带,而生物半衰期剂量组未发现新增条带;对于碱溶性蛋白,两种染毒组均未发现明显变化。     

热处理对脱氧雪腐镰刀菌烯醇和T-2毒素的去除作用

研究热处理对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)和T-2毒素的去除作用。测试不同温度、不同加热时间、不同pH值条件下热处理对DON和T-2毒素影响,采用高效液相色谱-质谱测定毒素及其衍生物,采用外标法定量。DON在中酸性条件下,121℃加热60 min,DON浓度保持稳定,碱性条件能促进DON的热降解。T-2毒素在中酸性条件下,105℃加热30 min开始降解,121℃处理pH值为7的1.0μg/mL T-2毒素溶液60min,T-2毒素去除率分别为(51.98±3.37)%,碱性条件能促进T-2毒素的热降解。在一定条件下,热处理对DON、T-2毒素具去除作用。     

对虾中隐蔽态T-2毒素残留对雄性小鼠生长发育的影响及其遗传毒性效应

为探明对虾中隐蔽态T-2染毒对小鼠生长发育及遗传方面的毒性效应,采用定期递增剂量法进行20 d蓄积染毒实验,以对虾的虾头和肌肉匀浆液灌胃小鼠,连续7 d,记录小鼠器官指数、精子致畸率、微核率,分析对虾中T-2及隐蔽态残留物对小鼠的毒害作用。结果表明,低剂量染毒对虾对小鼠没有影响,高剂量组(12.2 mg/kg)染毒对虾引起小鼠增重率和器官系数下降,精子畸形率及微核率均显著高于对照组(P0.05);随着染毒剂量的增加,精子畸形率及微核率呈上升趋势。染毒对虾中存在隐蔽态的T-2毒素,对小鼠有一定的遗传毒性,虾头中隐蔽态T-2毒素的含量高于肌肉中的,并与染毒剂量呈正相关。     

不同条件对炭黑曲霉产赭曲霉毒素A能力的影响

为了解一株分离自新疆葡萄园的炭黑曲霉菌株在不同培养条件下产生赭曲霉毒素A(OTA)的能力,试验采用孟加拉红培养基,利用高效液相-荧光法对OTA进行定量检测,在单因素试验的基础上,采用响应面法优化产毒条件。结果表明,对该菌株产生OTA的条件影响从大到小依次为葡萄糖质量浓度、乙醇体积分数、SO2质量浓度。最优产毒条件:在温度28℃条件下,葡萄糖质量浓度92.26g/L、SO2质量浓度8.26mg/L、乙醇体积分数0.05%。在此条件下,OTA产量为7.427ng/mL。     

对虾肌肉中隐蔽态T-2毒素残留与脂溶性成分含量变化的相关性研究

为探明T-2毒素持续染毒后的对虾肌肉中m T-2s的残留规律,及其对对虾的脂溶性成分含量的影响。采用20 d蓄积染毒法获得不同染毒剂量组(0、0.5、1.2、2.4、4.8、12.2 mg/kg饲料)的对虾肌肉组织,采用LC-MS/MS检测经三氟乙酸(TFA)水解处理前后样本中的T-2毒素含量,以T-2增量表示m T-2s含量。同时采用索氏提取法测粗脂肪,HPLC法测VA、VD3和VE含量。结果表明,对虾肌肉经TFA水解处理前未发现游离态T-2毒素,水解后检出T-2毒素,即m T-2s,且其含量与染毒剂量呈正相关。而染毒剂量对不同脂溶性成分含量的影响表现出较大差异。高剂量染毒时,粗脂肪、VA和VD3含量呈显著下降(p0.05),而VE的含量呈波动性变化。低剂量染毒时,粗脂肪、VD3和VE含量显著升高(P0.05),表现出低剂量刺激效应,但是粗脂肪与VA含量与m T-2s呈负相关,可能二者与m T-2s的存在形式有关,此结论为挖掘m T-2s的预警指标提供参考。     

T-2毒素对不同生长期对虾的急性毒性及其分析方法的比较研究

比较T-2毒素对不同生长期凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的急性毒性及其分析方法,明确对虾作为T-2毒素毒性评价的生物标记物的最佳时期,建立T-2毒素对对虾的急性毒性互补评价方法。通过对不同生长期凡纳滨对虾的急性毒性试验,采用寇氏法和概率单位法,计算得到T-2毒素对不同生长期凡纳滨对虾的LD50,并通过u检验对两种方法求得的LD50值进行分析比较。结果得到T-2毒素对虾卵、幼虾和成虾的LD50值分别为2.33、1.79和3.34 mg/kg·bw,且经检验两种方法求得的LD50并无显著性差异。研究表明,T-2毒素对成虾的毒害作用最小急性毒性最弱,对幼虾的毒害作用最大急性毒性最强,即该生长期的凡纳滨对虾更适宜做评价T-2毒素急性毒性的生物标志物,同时采用寇氏法和概率单位法相结合的方法得到的LD50值更具准确。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)直接竞争ELISA方法的建立

利用前期制备得到的DON酶标抗原(辣根过氧化物酶标记)以及抗DON抗体,建立检测食品中DON含量的直接竞争ELISA方法。该方法的检测范围1～100ng/mL,灵敏度达0.56ng/mL,半数抑制浓度IC50为10ng/mL;与DON类似物T-2毒素的交叉反应率为12%;玉米淀粉样品回收率在80.2%～91.1%之间,平均批间变异<15%,平均批内变异<3%。     

低剂量T-2/HT-2毒素生物转化产物的遗传毒性研究

本文为了研究低剂量T-2和HT-2毒素经弯曲假单胞菌(Pseudomonas geniculata)生物转化至无游离态毒素检出时,降解产物是否具有遗传毒性。通过连续7 d给小鼠灌胃不同剂量T-2/HT-2毒素降解产物,检测小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率和精子致畸率。结果表明雄性小鼠产生的微核率均高于雌性小鼠,各剂量组的微核率与阴性组相比差异显著(P0.05),10/20 ng/m L和25/50 ng/m L的雄性小鼠微核率与阳性组相比差异不显著(P0.05)。2.5/5 ng/m L T-2/HT-2组的小鼠精子畸形与阴性组相比差异不显著(P0.05),畸形精子主要表现为胖头和折尾,随着T-2、HT-2剂量的增加,小鼠精子畸形率呈线性增加。说明经过弯曲假单胞菌(Pseudomonas geniculata)转化的T-2和HT-2毒素仍具有遗传毒性,而且雄性比雌性易感性更强,同时为T-2和HT-2毒素生物转化物中存在结合态的T-2毒素提供佐证。     

紫外光辐照对脱氧雪腐镰刀菌烯醇和T-2毒素的去除作用

目的：研究紫外光辐照对脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol,DON）和T-2毒素的去除作用。方法：测定不同辐照时间、不同辐照距离、不同pH值条件下紫外光辐照对DON和T-2毒素影响,采用高效液相色谱-质谱联用技术测定毒素及其衍生物,外标法定量。结果：经紫外光辐照后,溶液中DON、T-2毒素的质量浓度均随着辐照时间的延长而不断减小,随着辐照距离和pH值的减小而不断减小。pH 7的1.0 μg/mL DON、T-2毒素溶液,在紫外灯功率20 W、辐照距离150 mm条件下辐照60 min后,DON、T-2毒素去除率分别为（84.90±2.52）%、（74.60±2.74）%。紫外光辐照后,毒素溶液中不含有已知的毒素衍生物,可能被转化成新的未知产物。结论：在非碱性条件下,紫外光辐照对DON、T-2毒素具有明显的去除作用。     

Factors affecting the results of T-2 mycotoxin ELISA assay.

Certain substances in the sample may increase or decrease the reaction between the enzyme and substrate in ELISA assays. During a survey of T-2 trichothecene in food and animal feed 75% of milled grain samples gave a higher O.D. value in competitive T-2 toxin ELISA than the negative control. In samples spiked with small quantities (10 micrograms/kg) of T-2 toxin this type of reaction resulted in underestimates of toxin content. However, the effect was weak and, owing to the high sensitivity of the assay, it did not result in false negative reactions. The low efficiency of the carrier solvent and natural peroxidases in food and feed were considered to be the cause of the inaccurate reactions. A few fermented and processed foodstuffs and feed gave positive results in the T-2 toxin ELISA assay, but verification of the results by gas chromatography (GC) showed that the reactions were false. Certain substances in the samples destroyed or decreased the enzyme activity. False positive reactions can be distinguished from correct ones by retesting the extracts in different dilutions.     

Occurrence of T-2 toxin in processed cereals and pulses in Turkey determined by HPLC and TLC

The purpose of this study was to investigate the T-2 toxin level of contaminated cereal and pulse products in Turkey. T-2 toxin was detected using high performance liquid chromatography (HPLC) with UV detection at 208 nm and thin layer chromatography (TLC) was used for confirmation of the T-2 toxin-contaminated samples (> or = 1 ppm). The recovery was 93 +/- 3.3% (SD 3.29, n = 5) for chickpea spiked with a known amount of T-2 toxin (1 ppm). The detection limits for T-2 toxin for HPLC and TLC were 25 ng per injection and 50 ng per spot, respectively. A total of 50 commercially available cereal and pulse product samples, collected from markets and street bazaars, were analysed. Incidences of T-2 toxin detected in cereal and pulse products were 23.5% and 31.2%, respectively and the maximum detected amount was 1.9 ppm in a sample of dried beans. The incidence of toxin-contaminated specimens is not so low relative to the volume of specimens produced.     

Analysis of deoxynivalenol as its trifluoroacetyl ester by gas chromatography-electron ionization mass spectrometry

Mass spectra of the trifluoroacetyl esters of the trichothecenes deoxynivalenol, diacetoxyscirpenol and T-2 toxin, as well as zearalenone, were obtained by gas chromatography-electron ionization mass spectrometry. Quantitation of deoxynivalenol as its trifluoroacetyl ester by selected ion monitoring was then possible down to 10 pg in the mass spectrometer (equivalent to 1 ng/g in a sample). The method was tested by extracting and analysing mouldy wheat which had previously given a positive result for deoxynivalenol when analysed by thin layer chromatography. The method was also suitable for the analysis of diacetoxyscirpenol and T-2 toxin; however, quantitation of zearalenone was unsuccessful because of the instability of the derivative.     

低质量浓度T-2处理对马铃薯块茎苯丙烷代谢活性的诱导

由镰刀菌引起的干腐病是导致甘肃省马铃薯块茎贮藏期间的主要病害。以‘陇薯3号’马铃薯为试材,用1 μg/mL T-2处理马铃薯块茎切片,观察T-2处理对马铃薯块茎切片损伤接种硫色镰刀菌（Fusarium sulphureum）后,其对病斑直径的抑制效果,以及块茎切片苯丙烷代谢关键酶活性及产物积累的影响。结果表明,T-2处理有效降低了块茎切片损伤接种Fusarium sulphureum的病斑直径,提高了切片苯丙氨酸解氨酶和4-香豆酰-辅酶A连接酶的活性,促进了木质素、总酚、类黄酮及花青素的积累。由此表明,低质量浓度T-2处理可通过诱导马铃薯的苯丙烷代谢增强块茎对干腐病的抗性。     

Distribution of T-2 Toxin in Wet-Milled Corn Products

The distribution of T-2 toxin in wet-milled corn products was studied by processing contaminated corn with bench scale wet-milling equipment. Approximately two-thirds of the T-2 toxin initially present was removed by the steep and process water, 4% was found in starch and the remainder was distributed between germ, gluten, and fiber. The toxin concentration in germ ranged from 163–194% of the toxin concentration in the corn from which it was derived, while the T-2 toxin concentration in starch was 6.6—8.8% of the concentration in corn. The steep water concentration was related to the concentration of T-2 toxin in the original corn and the human consumption products. This may provide a convenient substrate for toxin assay.