铁皮石斛多糖抗癌及免疫活性研究

研究了铁皮石斛多糖的抗癌及免疫活性。水提醇沉法提取铁皮石斛多糖,将其作用于癌细胞株(HepG2、A549、F9、NCCIT)和小鼠脾脏细胞、腹腔巨噬细胞,观察细胞形态变化,并用MTT法分析其对细胞增殖的作用。结果表明:铁皮石斛多糖能抑制癌细胞的增殖并促进脾脏细胞生长,铁皮石斛多糖具有一定的抗癌活性及免疫活性。     

石斛花鼓风干燥机理和感官品质变化规律

基于远红外鼓风干燥和低频核磁共振探索霍山石斛花和铁皮石斛花干燥过程,构建适合干燥不同种类石斛花的基础参数模型,并使用质构分析仪研究石斛干花的感官品质变化规律。结果表明:远红外鼓风干燥仪干制后的霍山石斛花和铁皮石斛花,通过低频核磁共振发现,干品水分含量均是结合水,干品泡制后的复水性佳;利用干燥动力学模型所得数据与试验数据的相关系数平方高于0.99,相关性很好;经质构仪测定,随着干燥次数增加,硬度和脆性也增加,干制品品质提高,延长了贮存期。     

铁皮石斛多糖调控线虫寿命及抗氧化作用的研究

摘 要: 目的 基于秀丽隐杆线虫自然衰老模型, 探讨铁皮石斛多糖(Dendrobium candidum polysaccharides, DOP)抗衰老作用及其机制。方法 将秀丽隐杆线虫野生型N2随机分为对照组和铁皮石斛多糖组(低、中、高), 观察铁皮石斛多糖对线虫N2寿命、运动能力和咽泵能力的影响; 通过检测氧化应激、抗氧化酶试剂盒以及活性氧评估铁皮石斛多糖对N2线虫抗氧化能力的影响。基于skn-1基因缺陷型突变株(EU1)线虫及带有荧光标记的转基因线虫CL2166分析铁皮石斛多糖延长健康寿限的可能作用途径; 采用实时荧光定量聚合酶链反应技术测定铁皮石斛多糖作用下线虫抗氧化、胰岛素信号途径相关基因转录水平。结果 铁皮石斛多糖中剂量组(250 μg/mL)可显著延长线虫N2的寿命, 平均延寿率达12.73%, 可显著提高运动、咽泵、抗氧化应激能力; 显著提高过氧化氢酶(catalase, CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide disumutase, SOD)活性和谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量, 降低活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量; 铁皮石斛多糖干预处理对skn-1基因缺陷线虫的延寿效果缺失; 但能够增强CL2166线虫的荧光强度; 同时上调sod-5、sod-3、ctl-1、ctl-2、daf-16和skn-1基因的表达水平, 下调daf-2基因的表达水平。结论 铁皮石斛多糖可能通过激活Nrf2/SKN-1和DAF-16途径拮抗氧化应激从而延缓线虫衰老。     

铁皮石斛叶多糖对秀丽隐杆线虫体内抗衰老作用

目的：基于模式生物秀丽隐杆线虫（以下简称线虫）探究铁皮石斛叶多糖的抗衰老能力。方法：采用含不同质量浓度（0.5、1.0、2.0 mg/mL）铁皮石斛叶多糖的大肠埃希氏菌OP50菌液每天饲喂线虫,以饲喂大肠埃希氏菌OP50菌液组作为空白对照,观察铁皮石斛叶多糖对线虫寿命、生殖能力、运动能力和应激能力的影响,同时测定线虫体内活性氧水平及抗氧化酶的酶活力,分析铁皮石斛叶多糖对线虫体内抗氧化能力的影响。结果：与空白对照组线虫相比,在本实验考察的质量浓度范围内,铁皮石斛叶多糖均可延长线虫的寿命,提高其运动、应激能力,同时不会损害线虫的生殖能力,并且能有效提高过氧化氢酶和超氧化物歧化酶的活力,显著降低线虫体内丙二醛含量（P＜0.05）。结论：铁皮石斛叶多糖可能通过提高线虫抗氧化酶活力及提高线虫抗应激能力,降低线虫体内活性氧水平并减缓细胞氧化损伤,进而发挥延长线虫寿命的功效。     

兜唇石斛发酵多肽Asp-Asp-Asp-Tyr和Asp-Tyr- Asp-Asp对LPS诱导RAW264.7细胞的抗炎作用

为了研究兜唇石斛发酵多肽Asp-Asp-Asp-Tyr（DDDY）、Asp-Tyr-Asp-Asp（DYDD）对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞抗炎活性。以合成的兜唇石斛发酵多肽为研究对象,采用噻唑蓝法筛选增殖活性最高的发酵多肽浓度,通过中性红吞噬实验和倒置显微镜观察发酵多肽对细胞的吞噬作用和分化形态变化,使用ELISA试剂盒测定细胞中NO及细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子TNF-α的分泌量。结果表明：12.5、25、50和100 μg/mL四组质量浓度的发酵多肽对细胞无毒性并有增殖作用;100 μg/mL的DDDY和DYDD和1 μg/mL的LPS处理可以激活细胞,增强细胞吞噬能力,相对吞噬率为2.05%、1.97%和2.19%;构建LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型,发现两种发酵多肽处理有效抑制细胞分化,使细胞恢复正常形态;抑制细胞NO分泌能力,100 μg/mL DDDY和DYDD处理组的NO分泌能力降低到LPS组的0.41倍和0.49倍;并且对抑炎细胞因子分泌能力的提高和促炎细胞因子的降低有显著效果,均表现出剂量反应关系。由此可知,DDDY和DYDD对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应具有抗炎作用,为后面探究发酵多肽的炎症机制提供理论支持。     

MPFC-QuECHERS结合超高效液相色谱串联质谱法快速测定铁皮石斛中56种农药残留

目的:对铁皮石斛的农药残留量进行风险分析与评估。方法:建立了超滤型净化分散固相萃取(MPFC-QuEChERS)结合超高效液相色谱—串联质谱法快速测定铁皮石斛中56种农药残留的分析方法。样品经0.1%甲酸—乙腈溶液提取,QuEChERS盐析包分层,经超滤净化柱单步净化,采用电喷雾正负离子切换(ESI),动态多反应监测(DMRM)模式进行分析,基质外标法定量。结果:56种农药残留在1.0～250.0μg/L线性范围内线性关系良好(R²>0.99)。方法的检出限(LOD)为1～5μg/kg,定量限(LOQ)为3.0～15.0μg/kg。56种农药残留在各自定量限1,2,10倍加标水平下,平均回收率为75.1%～107.0%,相对标准偏差(RSD)为2.7%～18.9%。采用该方法对20批次铁皮石斛中农药残留进行检测,结果显示,5份样品中检出烯酰吗啉、嘧菌酯、腈苯唑、丙环唑、苯醚甲环唑、啶氧菌酯6种农药,含量范围在0.066 7～1.872 mg/kg。结论:超滤型净化QuEChERS结合超高效液相色谱—串联质谱法测定农药残留具有前处理简单、快速高效等优特点,可用...     

基于Caco-2单层细胞模型的兜唇石斛多糖的转运机制研究

以兜唇石斛多糖(DAP)为研究对象,借助人小肠上皮细胞Caco-2(the human colon carcinoma cell line)单层细胞模型,体外模拟DAP在小肠中的转运情况。在前期得到的DAP为基础,探究DAP的粘度对其转运情况的影响,同时建立Caco-2细胞的模型,采用MTT法测定DAP对Caco-2细胞存活率的影响,并考察了DAP在小肠的吸收转运的特征。实验表明:DAP的粘度与其在Caco-2细胞中的转运能力呈负相关趋势,粘度越大,转运速率越慢;在测定TEER值及荧光素钠渗透情况,观察Caco-2细胞的形态,建立了良好的细胞模型;DAP的存在下,Caco-2细胞的存活率为91.8%以上,因此DAP对Caco-2细胞存活无影响;DAP在Caco-2不同单边层的转移率分别为0.35%±0.02%和0.32%±0.02%,表观渗透率分别为(0.42±0.02)×10-6 cm/s和(0.19±0.18)×10-6 cm/s,表明DAP在小肠中不易被吸收。本研究所得结果为进一步研究DAP在肠道中的吸收机制奠定基础。     

铁皮石斛对孕鼠及仔鼠胚胎发育的影响

目的观察铁皮石斛对妊娠大鼠及胚胎发育的影响。方法将妊娠SD大鼠分为溶剂对照组及625、1250、2500 mg/kg铁皮石斛组。于妊娠的第7～16 d经口给予孕鼠不同剂量的铁皮石斛。妊娠第20 d颈椎脱臼法处死孕鼠并解剖,取出子宫称重,检查活胎、吸收胎和死胎数,逐个记录活胎鼠的体重、身长、胎盘重量。每窝检查约一半存活胎鼠的内脏,其余存活胎鼠检查骨骼。结果 3种剂量对妊娠大鼠无明显毒性。其中2500 mg/kg组胎鼠体重与对照组比较有统计学差异(P0.05),胎鼠其余各项指标与对照组比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论铁皮石斛对妊娠母鼠无明显影响,未见致胎鼠畸形作用,可引起胎鼠体重增加。     

Health-promoting effects of dietary polysaccharide extracted from Dendrobium aphyllum on mice colon,including microbiota and immune modulation

The health-promoting effects of a polysaccharide (DAP) purified from Dendrobium aphyllum, on mice colon were investigated. The results indicated that consumption of DAP facilitated the differentiation degree of CD4⁺ T cells to Th₁, Th₁₇ and Treg cells; and depressed the differentiation degree to Th₂ cells, since DAP up-regulated IL-6 expression (from 1.08 ± 0.24 to 3.40 ± 0.36). Besides, oral administration of DAP reduced the gastrointestinal transit time from 255 ± 1.21 to 164 ± 0.46 min, decreased the pH from 6.70 ± 0.27 to 5.54 ± 0.31, improved faecal water-binding capability from 59.4% ± 0.35 to 63.5% ± 0.22. Additionally, the increase in four health-promoting short chain fatty acids were observed, which might result from the enrichment of the relative abundance of health-promoting microbiota genera, including Porphyromonadaceae and Ruminococcaceae. The DAP-induced up-regulation of the genus Erysipelotrichaceae might be related to the homeostasis in both Th₁/Th₂ and Treg/Th₁₇.