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目的制备牛对氧磷酶-1(paraoxonase-1,PON-1)蛋白多克隆抗体,并建立PON-1的双抗夹心ELISA检测方法。方法将重组牛PON-1蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体,经AKTA蛋白纯化系统纯化抗体。以获得的多克隆抗体为捕获抗体,牛PON-1单克隆抗体为检测抗体,HRP标记的山羊抗小鼠IgG为二抗,构建牛PON-1蛋白的双抗夹心ELISA检测法,并对多克隆抗体(1∶100、1∶200、1∶400、1∶800、1∶1 600、1∶3 200、1∶6 400、1∶12 800)及单克隆抗体浓度(0. 2、0. 4、0. 8、1. 6、3. 2、6. 4 mg/mL)、包被条件(37℃孵育2 h、4℃孵育过夜)、封闭液(1%脱脂奶粉、5%脱脂奶粉、0. 5 mol/L氯化铵)、封闭条件(37℃2 h、37℃4 h、4℃过夜)进行优化,同时验证方法的线性及准确度。采用该方法及市售试剂盒同时检测酮病组及对照组奶牛血清中的PON-1含量。结果建立的双抗夹心ELISA法最适检测条件为:单克隆抗体浓度为3. 2 mg/mL,多克隆抗体工作浓度为1∶800稀释,封闭液为5%脱脂奶粉,包被及封闭条件均为4℃过夜。牛PON-1蛋白标准品浓度在90~3 125 ng/mL浓度范围内,与A_(450)值呈良好的线性关系,标准曲线方程为y=0. 618 6 x-0. 753 6,R~2=0. 981 3;5份样品检测结果均值为764. 21 ng/mL,回收率为97. 97%。市售试剂盒和本实验建立方法检测酮病组奶牛体内PON-1含量均显著低于对照组(P 0. 001)。结论成功获得了抗牛PON-1蛋白的多克隆抗体,并建立了牛PON-1蛋白的双抗夹心ELISA检测方法,且该方法具有良好的线性及准确度。 相似文献
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为探究不同腌制方式对煮制猪肉品质、组织形态和蛋白结构的影响,为猪肉制品的加工提供理论依据。以猪背最长肌为试验材料,采用湿腌,干腌及超声辅助腌制3种方式对猪肉进行腌制处理,测定煮制肉样的品质,组织形态及蛋白结构。结果表明:不同腌制方式对煮制猪肉品质特性(色泽、质构、保水性)影响显著,相较于其他2种腌制方式,超声辅助腌制的煮制猪肉红度值和嫩度最高,纵向(T1)、横向(T2)弛豫强度和不易流动水的比例(P21)最高,但自由水比例(P22)最低。组织形态结果表明,腌制处理显著影响了猪肉肌纤维组织形态,超声腌制的煮制猪肉肌纤维肿胀最明显,肌内膜分离降解,微观结构破坏最严重。蛋白结构结果表明,超声腌制的煮制猪肉表面疏水性最高,α-螺旋和β-转角含量最低,β-折叠和无规卷曲含量最高,说明超声腌制改变了蛋白质的空间结构,增加了蛋白质聚集程度。不同腌制方式处理的煮制猪肉品质与组织形态和蛋白结构显著相关。 相似文献
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