牦牛血抗氧化肽制备方法对比及分离纯化研究

为研究牦牛血抗氧化肽最佳制备方法,以牦牛血为原料,分别采用枯草芽孢杆菌发酵法、碱性蛋白酶解法、菌酶联合法制备3种牦牛血抗氧化肽,依次简写为BF、AP、BA。应用羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(·O_2-)清除能力,脂质过氧化抑制能力、还原力4种体外抗氧化实验,对比3种牦牛血抗氧化肽的抗氧化活性。以超滤、凝胶层析法对制备的较高活性产物进行分离。结果表明:3种抗氧化肽活性大小为BABFAP,BA有最大的·O_2-清除能力、脂质过氧化抑制能力及还原力,表明制备牦牛血抗氧化肽的最佳制备方法为菌酶联合法;超滤分离菌酶联合制备产物获得分子量5 kD的抗氧化肽活性高于分子量10 kDa、介于5~10 kDa的抗氧化肽,对·OH的IC50值为1.62 mg/mL;该组分经凝胶层析分离后得到4个组分,其最高活性组分Ⅰ对·OH的IC50值达到0.72 mg/mL。     

双酶法制备具有促皮肤成纤维细胞活性的马鹿茸胶原蛋白肽

胶原蛋白作为细胞外基质的主要成分与细胞的增殖、分化等密切相关。为探究制备具有促进皮肤成纤维细胞增殖功能的马鹿茸胶原蛋白肽的适宜工艺条件,本研究以马鹿茸为原料,采用Alcalase和胰蛋白酶进行酶解,以水解度、多肽得率和正常人皮肤成纤维细胞(NHDF细胞)增殖率为目标值进行单因素实验和正交实验,确定适宜的工艺条件。实验结果表明,马鹿茸胶原蛋白肽适宜制备条件为:先在底物浓度1%,酶底比2%,p H 9.0,温度60℃条件下采用Alcalase进行酶解;再在底物浓度1%,酶底比6%,p H 8.0,温度42℃条件下采用胰蛋白酶酶解,酶解产物最终水解度为21.7%,多肽得率是86%,细胞增殖率为22.75%。Alcalase-胰蛋白酶双酶分步水解马鹿茸胶原蛋白可获得促进正常人皮肤成纤维细胞增殖率较高的胶原蛋白肽。     

EGCG对高脂饮食诱导的肥胖HFA小鼠脂质代谢的影响

利用高脂饮食诱导人源菌群(human flora-associate,HFA)肥胖小鼠模型,探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肥胖小鼠的降脂功效。无菌昆明(KM)小鼠灌胃健康人粪便悬液构建HFA模型后随机分为两组:高脂组40只和普通组10只,分别喂食高脂饲料和普通饲料,8周后各处死10只,测定小鼠体重、肝重、附睾脂肪垫重量、血糖血脂含量以及肝脏和附睾脂肪垫苏木精-伊红(HE)染色。将获得的肥胖小鼠随机分为三组,即对照组,0.2%EGCG低剂量组和0.8%EGCG高剂量组,喂食普通饲料,8周后全部处死,测定同上指标。结果表明高剂量组小鼠附睾脂肪垫重量、总胆固醇(Tch)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量均较对照组显著降低,分别降低了48.15%、28.64%和43.16%,同时脂肪细胞大小较对照组也显著减小,除此之外EGCG干预组肝脏病变程度较对照组有明显好转。由此证实,EGCG对肥胖HFA小鼠降脂及肝脏损伤修复有一定的作用。     

罗非鱼皮胶原蛋白肽制备的工艺优化

以罗非鱼鱼皮为原料,研究利用酶法制备胶原蛋白肽制品。测定了罗非鱼皮的基木组成成分,利用低温连续相变萃取技术进行脱脂处理;以水解度、水解产物分子量和感官评定为指标,研究蛋白酶种类对酶解的影响;以水解度为指标,研究酶解条件对水解度的影响,并采用响应面试验对鱼皮胶原肽制备工艺进行优化;用凝胶过滤色谱法测定酶解液分子质量分布。结果表明:采用碱性蛋白酶水解鱼皮效果最好,酶解的最佳工艺条件为:时间7 h、加酶量7%、温度60℃、pH值10.38,在此条件下碱性蛋白酶水解罗非鱼皮的水解度最高可达23.01%。由本法所得胶原肽是以分子质量180~1000 u之间的寡肽(约2~8个氨基酸残基)为主的物质,具有较好的生理活性,可作为功能因子广泛应用于保健食品、化妆品、医药等各个行业当中。     

牡蛎生物活性肽的研究进展

生物活性肽是来源于蛋白质的多功能化合物,是可以调节生物机体的生命活动或具有生理活性作用的一类肽的总称。牡蛎肽又是生物活性肽的重要组成部分,含有丰富的蛋白质、人体必需的8种氨基酸、牛磺酸、维生素以及锌、硒、铁、铜、碘等微量元素;随着现代生物技术和医学技术的发展,制备牡蛎活性肽的方法多种,且牡蛎肽在抗氧化、降血糖、抗肿瘤、抑制血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)活性等方面具备特殊的生理活性。本文就牡蛎肽的制备以及牡蛎肽的生物活性等研究进行概述,为今后牡蛎肽的应用提供参考。     

食源性抗氧化肽分离纯化方法研究进展

食源性抗氧化肽是以食用蛋白质为原料经过酶解制备的具有抗氧化活性的肽。近几年来,食源性抗氧化肽因为具有分子质量小、结构简单、易于人体吸收、抗氧化活性高、在不同环境条件下稳定性强等特点,逐渐成为一种安全有效的抗氧化剂。分离纯化是获得较纯的食源性抗氧化肽的重要的一步,本文综述了几种抗氧化肽的分离纯化的方法,分别介绍了大孔树脂法,膜分离技术,色谱法,毛细管电泳法,质谱法,阐述了其在提高食源性抗氧化肽纯度方面的优缺点。未来,食源性抗氧化肽的分离纯化将是食品科学领域发展的重要研究方向。     

荞麦壳黄酮提取物对2型糖尿病大鼠的血糖改善作用及机制

目的:研究荞麦壳黄酮提取物(buckwheat hull extracts,BHEs)对2型糖尿病大鼠血糖水平改善作用和机制。方法:体外实验中,测定了BHEs抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性,并采用Lineweaver-Burk作图法确定其抑制反应的类型。体内实验中,高脂饮食与注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ)复合诱导制备2型糖尿病大鼠模型,分为正常组(未诱导,蒸馏水),模型组(诱导,蒸馏水),阳性对照组(盐酸二甲双胍,100 mg/(kg·d))和BHEs低、中、高剂量组(50、100、200 mg/(kg·d),分别标记为LBHEs、MBHEs、HBHEs)。灌胃给药,每天1次,连续干预28 d,观察大鼠体质量、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰岛素(fasting serum insulin,FINS)和C肽水平变化,并进行口服糖耐量实验(oral glucose tolerance test,OGTT)。结果:BHEs在α-葡萄糖苷酶-麦芽糖体系中与其抑制活性成剂量依赖关系,当BHEs质量浓度为1 mg/m L时抑制率为41.12%,酶促动力学数据表明其为竞争型抑制。STZ诱导的2型糖尿病大鼠实验结果显示,与正常组相比,模型组大鼠体质量减少了33.1%,FBG升高到(17.85±2.25)mmol/L,而FINS、C肽水平分别降低了24.80%和12.77%(P0.05);与模型组相比,BHEs实验组改善糖尿病大鼠体质量减少,且干预28 d后MBHEs组和HBHEs组大鼠FBG与干预前比较分别降低了39.4%和48.2%(P0.05),OGTT曲线下面积降低了47.36%、59.47%(P0.05),MBHEs组和HBHEs组同时改善大鼠血清FINS和C肽水平,与模型组相比分别提高了32.79%、34.44%和7.40%、13.08%(P0.05)。结论:BHEs抑制α-葡萄糖苷酶活性和修复胰岛细胞功能的双重机制改善STZ诱导的2型糖尿病大鼠的血糖指标,并呈现一定的剂量-效应关系。     

鲫鱼贮藏过程中微生物菌相PCR-DGGE分析及其防腐保鲜

采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(polymerase chain reaction-amplification and denaturing gradient gel electrophorsis,PCR-DGGE)技术,分析4℃冷藏条件下鲫鱼肌肉和鱼鳃的菌相组成及变化,并利用不同浓度(效价分别为67 608、32 359、2 239、1 820、1 157 IU/m L)抗菌脂肽溶液对鲫鱼进行浸泡处理,以未处理作为对照,分别测定其菌落总数、挥发性盐基氮(total volatile basic nitrogen,TVB-N)、p H值和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)等指标,评价抗菌脂肽对鲫鱼冷藏保鲜效果。结果表明:鲫鱼贮藏过程中的微生物具有多样性,PCRDGGE技术确定气单胞菌属(Aeromonas sp.)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、不动杆菌属(Acinetobacter sp.)和热杀索丝菌属(Brochothrix thermosphacta)为鲫鱼鱼肉的主要腐败菌群,荧光假单胞菌是鲫鱼贮藏过程中的优势腐败菌。而棉子糖乳球菌属(Lactococcus raffinolactis)、从毛单胞菌属(Comamonas sp.)和气单胞菌属(Aeromonas sp.)为鲫鱼鱼鳃的主要腐败菌群,表明鱼肉和鱼鳃在贮藏过程中,导致腐败的主要腐败菌群有一定差异性。同时,不同浓度的抗菌脂肽对鲫鱼均有明显的防腐保鲜作用,有效抑制了鲫鱼菌落总数、TVB-N值和TBA值的增加以及p H值的升高。其中,高浓度抗菌脂肽(效价为67 608 IU/m L)在4℃贮藏条件下使鲫鱼的货架期延长了6 d,说明抗菌脂肽对鲫鱼具有良好的保鲜作用,能明显延缓鲫鱼的腐败变质。     

基于LC-MS/MS的酸乳肽谱及ACE抑制活性

利用液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)的方法,对4种酸乳(优味舒风味发酵乳、风味发酵乳、初乳24+K风味发酵乳和十天风味发酵乳)的肽谱进行分析,分别鉴定到152、125、364条和274条肽段。利用血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)的抑制活性比较以上4种酸乳的生物活性,在相同质量浓度2.0 mg/L时,4种酸乳ACE抑制率分别为46.84%、42.75%、77.41%和63.84%。初乳24+K风味发酵乳含有肽的数量大、ACE抑制活性高可能与其独特的原料成分相关。对4种酸乳的肽谱及ACE抑制活性的考察,为进一步研究酸乳肽的功能特点和ACE抑制活性提供了理论依据。     

白腐乳中呈味肽的分离与鉴定

目的:从白腐乳中寻找呈味肽,分析其氨基酸序列,人工合成肽样品,研究其滋味特性。方法:白腐乳提取液经过超滤、Sephedex G-15葡萄糖凝胶过滤层析,分离出3个呈味组分,通过感官评价筛选出呈鲜效果最优的组分,采用反相高效液相色谱对其进一步分离纯化,选择峰面积最大的组分,使用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱结合De Novo软件分析呈味肽的氨基酸序列,人工合成肽样品,对合成肽样品的呈味特性进行分析。结果:在白腐乳中发现并确定序列的肽链3条,其氨基酸序列分别为:Asp-Phe-Lys-Arg-Glu-Pro、Asp-Arg-Glu-Lys-Phe-AspGlu、Asp-Glu-Asp-Phe-Lys-Arg-Glu-Pro。其中肽Asp-Phe-Lys-Arg-Glu-Pro具有鲜味,肽Asp-Glu-Asp-Phe-Lys-ArgGlu-Pro兼具鲜味与酸味,肽Asp-Arg-Glu-Lys-Phe-Asp-Glu虽无明显特征滋味,但在味精溶液中则体现出较强的增鲜效果。结论:腐乳的鲜味不仅仅来自于谷氨酸等氨基酸成分,还与小分子肽类的呈鲜作用有关。