C4ST-1在大肠杆菌中的可溶性表达

软骨素-4-O-硫酸转移酶-1 (Chondroitin-4-O-sulfotransferase-1,C4ST-1,EC 2.8.2.5)催化软骨素N-乙酰半乳糖胺(N-Acetylgalactosamine,GalNAc)4号位羟基硫酸化生成硫酸软骨素A(chondroitin sulfate A,CSA)。C4ST-1含3对二硫键,在Escherichia coli细胞质内二硫键难以正确形成,故在E. coli中表达时主要以包涵体形式存在。为提高胞内可溶性蛋白质的表达水平,共表达了催化二硫键从头形成的巯基氧化酶(Erv1p)或/和促进二硫键正确折叠的二硫键异构酶(DsbC)。结果表明共表达DsbC可使C4ST-1融合蛋白的胞内可溶性表达水平显著提高,但C4ST-1和Erv1p共表达对胞内可溶性蛋白质的表达影响相对较小。C4ST-1和Erv1p或C4ST-1和DsbC共表达菌株的酶活分别为原始菌株的1.30和2.33倍,活力达到(12.32±0.76) U/L和(21.99±0.42) U/L。挑取同时共表达C4ST-1、Erv1p和DsbC的菌株进行摇瓶水平和3 L发酵罐放大培养,酶活分别达到(29.12±0.66) U/L和49.97 U/L。本研究为C4ST-1的大规模应用奠定了一定的基础。     

常压室温等离子诱变与微生物微滴培养选育几丁质脱乙酰基酶高产菌株

该研究将室温等离子（ARTP）诱变与微生物微滴培养（MMC）技术应用于几丁质脱乙酰基酶（CDA）高产菌株的诱变选育，构建高产CDA菌株的诱变及高通量筛选方法。结果表明，经过4轮的ARTP诱变及MMC筛选，从200个不同的液滴中共筛选出5个发酵产酶明显提升的液滴，并通过进一步的平板筛选、24-深孔板复筛，获得了17株产酶提高300%以上的诱变菌株。通过对比分析17株高产菌株产CDA的能力，确定了1株最佳CDA高产菌株B4，其CDA最大产量比出发菌株提高了3.15倍，发酵产酶总量达到419.11 U/mL，为原始菌种的3.90倍。该研究为CDA高产菌株的诱变选育及高通量筛选提供了借鉴。     

3-乙酰基香豆素肟衍生物的合成及抗肿瘤活性

以水杨醛为起始原料,经Knoevenagel反应得到3-乙酰基香豆素,将其酮羰基与盐酸羟胺反应得到肟,利用肟羟基与不同碳数的二溴烷烃反应得到相应的溴代肟醚,再与硝酸银反应得到5个3-乙酰基香豆素肟硝酸酯杂合物。目标化合物的结构经红外光谱、核磁共振氢谱和质谱确证。用检测灵敏度高的CCK-8法评价了目标化合物对人肝癌HepG2细胞、人前列腺癌22RV1细胞、人胃癌HGC-27细胞及人肺癌A549细胞增殖的影响,结果显示3-乙酰香豆素肟硝氧丁基醚对受试的HepG2、HGC-27癌细胞具有较强的增殖抑制作用。     

匙羹藤酸调节仓鼠血脂机理的研究

目的:研究匙羹藤酸对高脂仓鼠血脂的调节作用,并初步探究匙羹藤酸调节血脂水平的机理。方法:将40只雄性仓鼠随机分为正常对照组、模型对照组和匙羹藤酸低(20 mg/kg BW/d)、中(40 mg/kg BW/d)、高剂量组(80 mg/kg BW/d),正常对照组饲喂正常饲料,其余各组均饲喂高脂饲料,连续喂养8周。每两周称量一次体重,每四周眼眶静脉取血一次,用来检测不同阶段仓鼠血清中的血脂水平,8周后股动脉取血用于检测肝损伤指标谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)水平,胆固醇代谢相关调控酶羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、胆固醇7α羟化酶(CYP7A1)、胆固醇酰基转移酶(ACAT)的酶活,并取肝小叶进行检测肝脏中HMGCR的酶活。结果:干预前,各组仓鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和非高密度脂蛋白胆固醇(non-HDL-C)水平均无显著性差异(P>0.05)。干预8周后,匙羹藤酸剂量组仓鼠血清中TC、TG、non-HDL-C极显著低于模型对照组(P<0.01);匙羹藤酸剂量组的ALT、AST水平极显著低于模型对照组(P<0.01);匙羹藤酸中、高剂量组HMGCR的活性显著低于模型组(P<0.05),匙羹藤酸中、高剂量组CYP7A1活性显著高于模型组(P<0.05)。结论:匙羹藤酸可以通过抑制HMGCR的活性来降低高脂仓鼠胆固醇的合成,提高CYP7A1的活性来增加胆固醇的排泄,来调节高脂膳食仓鼠血脂水平,因此匙羹藤酸具有降脂、保护肝脏的作用。     

玛咖提取物对氢溴酸东莨菪碱所致小鼠记忆获得障碍模型学习能力的影响

目的:观察玛咖提取物对氢溴酸东莨菪碱所致小鼠记忆获得障碍模型的影响。方法:100只昆明种小鼠随机平均分为空白对照组,模型组,吡拉西坦片组,玛咖高剂量组(1.17 g·kg-1)、低剂量组(0.585 g·kg-1),每天灌胃1次,连续灌胃20 d,空白对照组和模型组给予同体积的蒸馏水。各组以跳台法和电迷宫测试小鼠学习记忆的能力,用比色法测定小鼠脑组织胆碱乙酰转移酶(choline acetyl transferase,Ch AT)、乙酰胆碱酯酶(acetylcholin esterase,Ach E)活性,用碱性羟胺法测定乙酰胆碱(acetyl choline,Ach)含量。结果:玛咖提取物可减少小鼠跳台错误次数,提高电迷宫小鼠空间辨别正确次数,并能增加小鼠脑组织Ach含量和Ch AT活性,同时降低脑组织Ach E活性,有助于氢溴酸东莨菪碱所致小鼠空间学习记忆能力的改善。结论:玛咖提取物可以显著提高小鼠学习能力。     

几种新的吡唑啉衍生物的合成

以水杨醛、乙酰乙酸乙酯为原料合成3-乙酰基香豆素,3-乙酰基香豆素与各种取代基的苯甲醛反应生成相应的查尔酮,查尔酮再与2-肼基苯并噻唑反应合成了5种未见报道的吡唑啉,并通过核磁氢谱等对吡唑啉进行了表征。并对合成吡唑啉条件中的溶剂的选择以及温度的单因素实验,对合成条件进行了优化。     

“一锅法”简便合成N-二氯乙酰基-4-乙基-1,3-噁唑烷

以2-氨基-1-丁醇、多聚甲醛和二氯乙酰氯为原料,氢氧化钠水溶液作缚酸剂,采用"一锅法"简便而高效地合成了标题化合物。通过正交试验设计获得最佳反应条件:甲苯作溶剂,反应温度-3~3℃,搅拌时间3h,2-氨基-1-丁醇与多聚甲醛的物质的量比为1∶1.4,产率为64.37%。产品经红外光谱、核磁共振谱和元素分析进行结构表征。本方法原料廉价易得,反应条件温和、操作简单,为该类化合物的合成提供了一种新的便利途径。     

2,6-二乙酰基吡啶缩合苯磺酰肼铕配合物的合成及性质研究

合成了2,6-二乙酰基吡啶-苯磺酰肼Schiff碱(DAPBSH)及其与稀土Eu3+的配合物,采用元素分析、红外、核磁等表征手段确定了配体的结构,采用元素分析及热分析初步确定了配合物的结构Eu(DAPBSH)2(NO3)3·2H2O并对配合物的紫外、荧光性质做了初步研究。     

苯并咪唑酮类有机颜料

文章简介了由双乙烯酮衍生的5-乙酰基乙酰氨基苯并咪唑酮的合成工艺。全面系统的介绍了由5-乙酰基乙酰氨基苯并咪唑酮作为偶合组分和一些芳胺或取代芳胺化合物的重氮物进行偶合反应,制备一系列黄色橙色的有机颜料。这些有机颜料性能非常优异,具有很高的对光和热的稳定性以及较高的耐溶剂性和耐迁移性,色泽非常坚牢,广泛用于塑料、高档涂料及油墨。     

血清 AFU、LAP 及 GGT 联合检测在早期原发性肝癌患者诊断中的应用价值

目的：探讨血清α-L-岩藻糖苷酶（AFU）、亮氨酸氨基肽酶（LAP）、r-谷氨酰转移酶（GGT）联合检测在早期原发性肝癌患者中的诊断价值。方法对85例肝病患者（肝硬化组45例、早期原发性肝癌组40例）及40例健康体检者（健康对照组）的血清 AFU、LAP 及 GGT 含量进行检测。结果早期原发性肝癌组、肝硬化组血清 AFU、GGT 的含量均高于健康对照组（均 P ＜0．05）。早期原发性肝癌组的 LAP 含量明显高于健康对照组,血清 AFU、LAP、GGT 单项检测及 AFU＋LAP＋GGT 联合检测阳性率均明显高于肝硬化组及健康体检组（均 P ＜0．05）,其中 AFU＋LAP＋GGT 联合检测阳性率最高（92％）。肝硬化组与健康对照组 LAP 含量比较差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论AFU＋LAP＋GGT 联合检测有利于原发性肝癌的早期诊断。