食品中幽门螺杆菌荧光PCR快速检测方法的建立及评价

目的:建立一种快速、特异、灵敏的幽门螺杆菌检测方法,并对方法进行评价,为快速、准确、有效检测幽门螺杆菌方法的建立提供依据.方法:以尿素酶基因序列为靶位点,用Primer Express 3.0软件设计引物及探针,经Blast软件对相似序列搜索后,筛选出一套最优与常见致病菌无交叉反应的引物;分别用食品中常见致病菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、沙门菌和空肠弯曲菌DNA进行特异性实验;将计数过的幽门螺杆菌菌悬液与牛奶样品混合液,梯度稀释后分别提取DNA进行荧光PCR扩增,确定检测方法的灵敏度;对人工污染幽门螺杆菌的生奶及生肉样品进行检测验证方法的可行性.结果:利用尿素酶基因设计的引物及探针仅对幽门螺杆菌有扩增曲线,而其他对照以及阴性对照均未有明显扩增曲线;能够对生奶及生肉中污染的幽门螺杆菌进行有效扩增;设计的引物对幽门螺杆菌的检测敏感性可达到3 CFU·mL-1,检测可以在4 d内完成.结论:荧光PCR方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测食品中污染的幽门螺杆菌.     

荧光定量PCR方法检测畜肉食品中鸭源性成分

目的 建立一种快速、特异、灵敏的鸭源性成分检测方法。方法 本研究以鸭线粒体基因全序列为靶位点设计引物和探针, 进行荧光定量PCR扩增, 建立鸭源性成分检测方法; 以常见畜禽肉包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、猪肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种作特异性检测; 以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液对鸭肉DNA进行梯度稀释, 做灵敏度检测。结果 该方法能够有效对鸭源性成分进行快速检测, 具有较强的特异性, 灵敏度较高(可达0.1 μg/kg)并且羊肉成分的存在对鸭肉灵敏度检测没有影响。结论 该方法特异性强, 灵敏度高, 可以快速、准确检测畜肉食品中含有的鸭源性成分。     

金黄色葡萄球菌便携式计数测试片的研制

为了研制新型便携式计数测试片检测食品中金黄色葡萄球菌,本文通过正交试验对金黄色葡萄球菌测试片中培养基成份进行优化;研究冷水可溶性凝胶的复配比例,以及优化后的表面活性剂对复配凝胶质构特性的影响。结果表明,金黄色葡萄球菌测试片中培养基组分为胰蛋白胨10 g/L,牛肉膏5 g/L,酵母膏1 g/L,甘氨酸12 g/L,氯化锂5 g/L,尿素0.2 g/L,亚碲酸钾10 mg/L,卵黄粉6 g/L,表面活性剂最优添加量为D-甘露醇4 g/L,丙酮酸钠5 g/L;冷水可溶性凝胶复配比例为瓜尔胶:聚丙烯酸钠=7:3;添加优化后的D-甘露醇和丙酮酸钠的复合冷水可溶性凝胶可获得最优的凝胶质构,其硬度和黏性分别为1362.04 g和630.41 g。将本研究的测试片与国标平板计数方法相比,其检测结果相关性良好(R^2=0.995),可达到相同水平的检出限2CFU/m L和灵敏度(100%)。本文研究的金黄色葡萄球菌测试片可应用于食品中金黄色葡萄球菌的定量检测。     

改进的国标方法测定炒货类食品的可食部分与果壳中铝元素含量及其食用风险性探讨

目的 研究炒货食品可食部分与果壳中铝元素含量对人体摄入铝水平的影响,评估人体的食品安全风险暴露水平。方法采用HNO_3+H_2O_2+HF的酸消解体系进行微波消解前处理,运用电感耦合等离子体质谱法对炒货食品中可食部分与果壳的铝元素进行检测。通过对比每个样品的2部分数据,得出风险评估结果。结果 本方法在铝浓度为0～100μg/L范围内线性良好(r=0.9998),国家标准物质小麦、辽宁大米、茶叶的检测值都位于定值区间内,实际样品6次测定的相对标准偏差为3.45%,检出限为0.1 mg/kg,定量限为0.3 mg/kg。瓜子、花生、榛子样品的果壳部分铝含量高于可食部分,松子的果壳部分铝含量要低于可食部分,开心果的检测结果未収现明显觃律性。结论 为避克铝暴露量过高的风险,在炒货食用方式上,应注意减少与果壳的过多接触。     

实时荧光PCR方法检测食品中痕量荞麦成分

目的：建立一种快速、特异、灵敏的荞麦成分检测方法。 方法：针对荞麦内转录间隔区ITS(internal transcribed spacer)和5.8S rRNA基因序列设计一对PCR引物及探针,建立实时荧光PCR检测方法;以同源性(27个荞麦属相关物种)及非同源性(食品中常见的栽培型植物)参考植物物种作特异性检测;以50mg/kg小麦DNA作为稀释液对荞麦DNA进行梯度稀释,做灵敏度检测。 结果：该方法能够有效对荞麦成分进行快速检测,具有较强的特异性,灵敏度较高(可达0.1μg/kg)并且小麦成分的存在对荞麦灵敏度检测没有影响。结论：该方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测食品中含有的痕量荞麦成分。     

PCR方法快速检测食品中幽门螺杆菌

目的：建立一种快速、特异、灵敏的幽门螺杆菌检测方法。方法：以尿素酶基因序列为靶位点设计引物,进行PCR 扩增,建立幽门螺杆菌PCR 检测方法。以食品中常见致病菌作参考菌株作特异性检测,分别对幽门螺杆菌菌悬液及鲜牛奶中幽门螺杆菌菌悬液进行梯度稀释,提取DNA 后做灵敏度检测。结果：PCR 方法能够有效对幽门螺杆菌进行快速检测,具有较强的特异性,灵敏度较高(8CFU/mL)。结论：该方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测食品中污染的幽门螺杆菌。     

聚合酶链式反应快速检测畜肉食品中鸭源性成分

目的：建立一种快速、特异、灵敏的鸭源性成分检测方法。方法：以鸭细胞色素C氧化酶Ⅲ（COⅢ ）基因序列为靶位点设计引物,进行聚合酶链式反应扩增,建立鸭源性成分检测方法;以常见畜禽肉,包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、猪肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种进行特异性检测;以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液,对鸭肉DNA进行梯度稀释,检测灵敏度。结果：该方法能够有效的对鸭源性成分进行快速检测,具有较强的特异性,灵敏度较高（0.1 μg/kg）,且羊肉成分的存在对鸭肉灵敏度检测没有影响,可以快速、准确检测畜肉食品中掺杂的鸭源性成分。     

微滴数字PCR方法检测畜肉食品中鸭源性成分

目的利用微滴数字PCR技术,建立鸭源性成分的快速、特异、灵敏检测方法。方法根据鸭线粒体基因全序列设计的引物及探针,利用微滴数字PCR进行扩增,建立鸭源性成分检测方法;以市场中常见畜禽肉为参考物种作微滴数字PCR特异性检测;以羊肉为干扰物观察微滴数字PCR的抗干扰性;将鸭肉DNA进行梯度稀释,对方法灵敏度进行检测。结果该方法能够有效对鸭源性成分进行检测,特异性强,灵敏度高,并且其他物种成分的存在对方法灵敏度检测没有影响。结论该方法特异性强,灵敏度高,可以实现畜肉食品中的鸭源性成分检测。     

荧光定量PCR方法检测畜肉食品中猪源性成分

目的 建立一种快速、特异、灵敏的猪源性成分检测方法。方法 本研究以猪线粒体12S rRNA基因序列为靶位点设计引物和探针, 进行荧光定量PCR扩增, 建立猪源性成分检测方法; 以常见畜禽肉包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、鸭肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种作特异性检测; 以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液对猪肉DNA进行梯度稀释, 做灵敏度检测。结果 该方法能够有效对猪源性成分进行快速检测, 具有较强的特异性, 灵敏度较高(可达0.1 μg/kg)并且羊肉成分的存在对猪肉灵敏度检测没有影响。结论 该方法特异性强, 灵敏度高, 可以快速、准确检测畜肉食品中含有的猪源性成分。     

黑曲霉实时荧光PCR检测方法的建立

目的建立黑曲霉实时荧光PCR检测方法。方法对6种主要病原曲霉(黑曲霉、烟曲霉、杂色曲霉、构巢曲霉、土曲霉及黄曲霉)的GAPDH基因序列进行比对分析,选择黑曲霉特异位点设计引物和探针,对黑曲霉进行实时荧光PCR扩增,并检测该方法的灵敏度及特异性。结果该方法可检出2.78×10-10μg/ml的黑曲霉基因组DNA;对亲源关系较近的11株不同种曲霉及4株其他属临床常见的病原真菌进行实时荧光PCR检测,未发现有交叉反应。结论已建立了灵敏度高、特异性好的快速检测黑曲霉的实时荧光PCR方法。