异硫氰酸酯类香料对两种革兰氏阴性致病菌的抑制作用

选取9种异硫氰酸酯类香料,研究其对常见的两种革兰氏阴性致病菌——副溶血性弧菌和沙门氏菌的抑菌活性。通过倍比肉汤稀释法测定最低抑菌浓度,根据OD600nm值绘制生长曲线。使用荧光定量PCR方法研究异硫氰酸酯类香料对副溶血性弧菌主要的毒力基因——tdh基因表达的影响。结果表明,调整香料浓度为0.04mol/L时,异硫氰酸苄酯、异硫氰酸3-甲硫基丙酯、异硫氰酸苯乙酯、异硫氰酸丁酯和异硫氰酸4-戊烯酯对两种供试菌均有明显的抑制作用(P0.05)。其中异硫氰酸苄酯的抑菌效果最佳,对副溶血性弧菌和沙门氏菌的最低抑菌浓度分别为9.54μmol/L和2.44 mmol/L。异硫氰酸苄酯对tdh的基因表达具有抑制作用,并且有浓度依赖性。综上,异硫氰酸苄酯对两种革兰氏阴性致病菌有很好的作用效果,苄基对异硫氰酸酯类香料抑制革兰氏阴性致病菌有一定的影响,说明异硫氰酸苄酯香料可作为抑制致病菌的添加剂应用。     

桑黄菌丝体液体发酵培养条件的研究

利用响应面分析法对影响桑黄菌丝体产量的液体发酵培养条件进行了优化。研究碳源,氮源,生长因子对桑黄菌丝体产量的影响。在单因素试验的基础上,利用Box-Benhnken设计和响应面分析法对碳源、氮源、维生素对菌丝体产量的影响进行分析。试验结果表明,桑黄的最佳液体培养条件:玉米淀粉0.5%,酵母膏0.1%,VB1 0.1%,培养时间6d,得到桑黄菌丝体干重为18.43g/L。     

养殖河鱼屯肠道细菌16S rDNA多样性分析

从养殖河鱼屯肠道内容物中提取细菌基因组DNA,通过PCR和TA克隆构建了细菌的16SrDNA基因文库研究肠道内容物细菌的多样性。结果表明,大部分序列通过NCBI数据库的BLAST搜索发现相似率为88%~99%,共有8个OTUs的序列相似率小于98%;鉴定出4类系统发育菌群,分别是变形菌门γ亚群(Gamma-Proteobacteria,44.8%)、CFB菌群细菌(Cytophaga-Flexibacter-Bacteroides,6.9%),厚壁菌门(Firmicutes,13.8%)、Unclassified group(34.5%),其中变形菌门γ亚群为肠道内容物中的优势细菌类群。文库多样性分析结果显示养殖河鱼屯肠道内容物中有着丰富的细菌多样性群落。     

沙门氏菌能力验证样品制备

目的研究制备适用于沙门氏菌(Salmonella)能力验证(PT)检测项目的冷冻干燥样品,通过能力验证确定实验室或检查机构的校准、检测能力。方法对目标菌与干扰菌进行10倍梯度稀释,对不同稀释度的菌液进行菌落计数并计算菌浓度,确定沙门氏菌与干扰菌的添加量,以冻干的绿豆粉为基质,脱脂奶粉为冻干保护剂,将细菌混合物与冻干保护剂混合均匀,采用真空冷冻干燥方式分别制备沙门氏菌能力验证阳性样品与阴性样品,采用西林瓶真空包装、4℃冷藏贮存;通过随机抽样和鉴定以评估样品的均匀性,通过观察样品在90 d内不同温度下目标菌的测试结果以评估样品的稳定性。结果每个样品最终添加10~100 CFU目标菌,添加104 CFU干扰菌;抽检的样品均能有效鉴定,显示PT样品具有较好的均匀性;通过保存温度和时间的稳定性检验显示测试结果符合预期效果,PT样品具有较好的稳定性。结论建立了有效的沙门氏菌能力验证样品制备的方法与评价程序。     

仙人掌黄酮类化合物的超声波提取和纯化

采用超声波萃取法,研究仙人掌黄酮类化合物的提取工艺。通过试验确定了超声波功率、乙醇体积分数及辐射时间的最佳参数。选用AB8、DM130、WXI大孔树脂对仙人掌黄酮提取液进行分离纯化。结果表明,乙醇体积分数65%、功率550W、辐射时间12s提取效果最佳,AB-8型树脂分离提纯效果最好,吸附率为8481%,解吸率达8842%。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定大豆中26种农药的残留量

目的建立高效液相色谱-串联质谱测定大豆中26种农药的多残留分析方法。方法样品经乙腈提取,乙腈饱和正己烷脱脂后,经C18固相萃取柱净化,采用高效液相色谱-串联质谱进行测定。结果 26种农药均在20 min分钟内流出,相关系数r在0.99以上,回收率均在65.28%~114.67%之间,重现性良好,相对标准偏差在10%以内。结论本方法可一次性检出大豆中26种农药残留,且简便、准确,适合大批量样品的测定。     

应用SYBR Green Ⅰ溶解曲线检测食源性单增李斯特菌

基于单增李斯特菌hlyA基因和李斯特菌属的16sRNA基因分别合成两对引物,确立SYBR Green Ⅰ荧光PCR检测单增李斯特菌两个特异性基因的最佳反应体系及条件,反应液经凝胶电泳验证,验证结果显示,扩增出的两条不同大小、不同Tm值的目的核酸片段,分别对应两条荧光PCR溶解曲线上的两个独立波峰.基于单增李斯特菌hlyA基因建立标准曲线,相关系数为0.996,最低检出限约为89CFU/mL.为检验方法的可行性,对鲜活白蚬子样品中分离出的疑似菌株进行实际检测,所得阳性结果经国家标准方法(GB 4789.30-2010)验证,验证结果表明,SYBR Green Ⅰ荧光PCR实际检测阳性结果与GB 4789.30-2010检测结果一致.     

仿刺参肠道可培养微生物多样性研究

为了解大连地区仿刺参肠道可培养微生物种群的多样性信息,用2216、TCBS和葡萄糖琼脂培养基从大连地区冬、春两季的仿刺参肠道中共分离得到141株细菌,通过16SrDNA-RFLP分析后,得到17个不同的类群。从各个类群中随机选取代表菌株进行16SrDNA序列测定和系统发育分析,结果表明,大连地区仿刺参肠道细菌主要包括假单胞菌属（Pseudomonas）,弧菌属（Vibrio）,芽孢杆菌属（Bacillus）,希瓦氏菌属（Shewanella）,交替假单胞菌属（Pseudoalteromonas）,不动杆菌属（Acinetobacter）,气球菌属（Aerococcus）,发光菌属（Photobacterium）,葡萄球菌菌属（Staphylococcus）和Kushneria菌属共10个菌属。说明大连地区仿刺参肠道可培养微生物具有一定的多样性。     

Pseudomonadaceae sp.胆固醇氧化酶产酶条件优化及其初步纯化

Pseudomonadaceae sp.可以发酵生产胆固醇氧化酶。本文对Pseudomonadaceae sp.进行产酶条件的优化及产物的初步分离。确定其最适培养基及培养条件,优化后胆固醇氧化酶的酶活力可达1691.72U/L,比优化前839.35U/L有较大提高。经过(NH4)2SO4沉淀及Sephadex G-75凝胶过滤层析初步纯化后酶比活力达24.95U/mg,纯化倍数为9.18。     

榆耳菌丝体多糖的体外抗氧化活性研究

利用乙醇分级沉淀法获得50%醇沉榆耳多糖、70%醇沉榆耳多糖及85%醇沉榆耳多糖,比较其抗氧化能力。结果表明:85%醇沉榆耳多糖的还原能力及对DPPH·的清除作用最强。0.5mg/mL85%醇沉榆耳多糖对DPPH·的清除率达到83.0%,IC50=29.94μg/mL。0.3mg/mL70%醇沉榆耳多糖对OH·的清除率达到84.3%,IC50=0.124mg/mL。榆耳菌丝体多糖清除超氧阴离子效果不理想,清除率仅为8.6%。榆耳菌丝体多糖具有较高的抗氧化活性。