硫醚类香料对沙门氏菌和副溶血性弧菌的抑制作用

研究硫醚类香料对沙门氏菌和副溶血性弧菌两种常见食源性致病菌的抑制作用,探讨该香料抑菌活性与其结构间的关系。采用滤纸片法测定抑菌圈直径,倍比肉汤稀释法确定不同香料的最小抑菌浓度(MIC),并用波长600 nm下菌液的吸光值绘制生长曲线。采用qRT-PCR法研究硫醚类香料对副溶血性弧菌特异性毒力基因tdh基因的调控作用。结果表明,这些硫醚类香料对两种菌的作用效果不同,其中甲基丙基二硫醚、甲基糠基二硫醚、糠基异丙基硫醚、二烯丙基硫醚、二烯丙基二硫醚对两种菌都有抑制效果。二烯丙基二硫醚抑制作用最显著,对沙门氏菌的MIC为19.5 mmol/L,对副溶血性弧菌为4.88 mmol/L。二烯丙基二硫醚对副溶血性弧菌毒力基因tdh的表达存在明显的抑制作用并与浓度呈正相关。硫醚类香料中硫原子个数和烯丙基可促进其抑菌效果,其中二烯丙基二硫醚抑菌效果最好。本研究结果为硫醚类香料在食品中的应用提供参考。     

异硫氰酸酯类香料对两种革兰氏阳性致病菌的抑制作用

选取9种异硫氰酸酯类香料,以金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌作为供试菌,通过测量抑菌圈直径考察此类含硫香料的抑菌活性,并探讨其构效关系。筛选抑菌效果最好的含硫香料,利用反转录荧光定量聚合酶链式反应技术考察其对金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因表达的影响。结果显示:4种异硫氰酸酯类香料——异硫氰酸苄酯(benzyl isothiocyanate,BZITC)、异硫氰酸苯乙酯(phenethyl isothiocyanate,PEITC)、异硫氰酸3-甲硫基丙酯(3-methylthiopropyl isothiocyanate,MTPITC)和异硫氰酸异戊酯(isoamyl isothiocyanate,IAITC)对2种革兰氏阳性菌的抑菌效果较好,且抑菌能力为BZITC≈PEITCMTPITCIAITC。对比9种异硫氰酸酯类香料的抑菌活性,BZITC对金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强,最低抑菌浓度为0.61 mmol/L,对单增李斯特菌的最低抑菌浓度为4.88 mmol/L。在亚抑菌浓度条件下,BZITC极显著地降低了金黄色葡萄球菌毒力基因nuc的表达(P0.01)。以上结果说明,苯基的存在可能增强异硫氰酸酯类香料的抑菌活性,该结构对BZITC抑制金黄色葡萄球菌毒力基因nuc的表达具有重要作用。     

含氧硫醚类香料对常见致病菌的体外抑菌活性研究

对11种含氧硫醚类香料的抑菌活性进行研究,并探讨其构效关系。以副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和单增李斯特菌为供试致病菌,通过测量抑菌圈直径考察硫醚类香料的抑菌活性,并通过统计分析探讨结构的影响。结果显示在浓度为5 mol/L的条件下,3-(甲硫基)丙醛(MTPD)、2-甲基-3-甲硫基呋喃(MMTF)、糠基异丙基硫醚(FIPS)和甲基糠基二硫醚(MFDS)对四种致病菌均有抑制作用,且抑菌能力为MTPDMFDS或≈FIPS或≈MMTF。对比11种含氧硫醚类香料的抑菌活性,双(2-甲基-3-呋喃基)二硫醚(BMFDS)对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强,MTPD次之,而BMFDS对其他三种致病菌无抑制作用。MTPD对副溶血性弧菌、大肠杆菌和单增李斯特菌的抑制作用均最强,且对副溶血性弧菌的作用效果最佳,其最低抑菌浓度为2.44 mmol/L。以上结果说明,醛基的存在对含氧硫醚类香料抑制副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和单增李斯特菌具有重要作用。     

不同贝壳煅烧粉的杀菌及抑菌效果

目的:研究不同贝壳煅烧粉对致病菌的杀菌及抑菌效果。方法:将贻贝、文蛤、溢蛏3种贝壳高温煅烧1000℃,2 h,并配制成1%、0.1%、0.01%浓度的煅烧粉悬浊液,作用于沙门氏菌、副溶血弧菌、金黄色葡萄球菌以及大肠杆菌,利用菌液杀菌以及培养基扩散抑菌方法,检测3种贝壳煅烧粉对不同致病菌的杀菌及抑菌效果。结果:3种贝壳煅烧粉对4种菌均具有杀菌作用,对于革兰氏阴性菌的杀菌作用明显大于革兰氏阳性菌,作用最强为缢蛏及文蛤贝壳煅烧粉对副溶血弧菌,分别作用5 min后菌落总数小于10 CFU/mL。培养基扩散法的抑菌实验表明,3种贝壳煅烧粉对4种菌均有抑菌作用,抑菌效果最强为缢蛏贝壳煅烧粉在0.1 g/mL浓度下作用于沙门氏菌,抑菌圈直径达16.42 mm;在各浓度阶段,贻贝和文蛤贝壳煅烧粉对副溶血弧菌的抑菌性明显强于于沙门氏菌以及大肠杆菌。结论:贝壳煅烧粉对食源性致病菌杀菌及抑菌作用明显,可用作抑菌剂。     

三种百合科葱属植物对五种食源性致病菌抑菌效果的比较

本文采用滤纸片法测定并比较了三种百合科葱属植物(沙葱、韭菜和大蒜)的水提取物对五种食源性致病菌,即大肠杆菌O157∶H7、肠炎沙门氏菌、副溶血弧菌、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌的抑菌作用。结果表明:三种葱属植物对五种食源性致病菌均有抑制作用且具有浓度依赖性。当提取物添加量为50μg(干重)时,沙葱水提物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最好(41.7±1.52)mm,韭菜水提物对沙门氏菌的抑菌效果最好(17.7±0.57)mm,大蒜水提物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最好(29.3±2.08)mm。沙葱水提物对大肠杆菌O157∶H7,金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、以及副溶血性弧菌的抑菌活性总体上高于大蒜和韭菜水提物,而对单增李斯特菌的抑菌活性却不及大蒜水提取物。三种葱属植物水提物对五种食源性致病菌的最低抑菌浓度(MIC)的结果表明:大蒜水提物对五种菌的敏感性强于沙葱水提物强于韭菜水提物。     

活的非可培养状态副溶血性弧菌实时荧光逆转录PCR检测方法的建立及其毒力研究

目的 建立检测活的非可培养(VBNC)状态副溶血性弧菌的荧光逆转录PCR方法并研究其毒力基因表达.方法 将副溶血性弧菌AS079菌株添加到陈化海水中,4℃冰箱内培养,使其进入VBNC状态,针对其管家基因、鉴定基因和毒力基因分别设计实时荧光逆转录PCR引物,通过不同的PCR反应程序和引物浓度组合试验,摸索最佳反应体系条件,用于VBNC状态副溶血性弧菌的检测和毒力研究.结果 用所建立的检测VBNC状态副溶血性弧菌的实时荧光逆转录PCR方法,对接种于陈化海水培养的不同时期的AS079副溶血性弧菌进行荧光定量逆转录PCR扩增,结果显示,随着培养时间的延长,毒力基因tdh2和鉴定基因toxR表达水平持续下降,但即使细菌进入VBNC状态,这两个基因也能够得到很好的扩增,说明以toxR基因和tdh2基因对进入VBNC状态的副溶血性弧菌进行检测和毒力研究方法可行.灵敏度试验表明,鉴定基因toxR的最低检测限可达到48 cfu/ml,研究毒力基因tdh2的表达需要细菌浓度至少为4.8×102cfu/ml,同时试验证明此方法与其他相近食源性致病菌无交叉反应.结论 该实时荧光逆转录PCR方法检测快速、特异性强、敏感度高,适用于VBNC状态副溶血性弧菌的检测和毒力分析.     

副溶血性弧菌毒素编码基因的微量、可视化检测

针对副溶血性弧菌主要毒素编码基因(tdh和trh),基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,以毛细管为反应介质,建立一种微量(5μL)、特异、灵敏、低成本、可视化、快速检测的毛细管LAMP(capillary LAMP,cLAMP)。本研究针对每个靶标基因分别设计6条特异性引物,系统优化Mg2+、dNTPs浓度和Bst DNA聚合酶使用量,以及反应时间及反应温度等参数,确立最适cLAMP反应体系;测定该方法的灵敏度和特异性。结果表明:优化后的5μL cLAMP反应体系为6 mmol/L或8 mmol/L Mg2+,1.44 mmol/L或1.28 mmol/L dNTPs、0.096 U/μL Bst DNA聚合酶、反应温度65℃、反应时间60 min。针对靶基因tdh和trh,c LAMP方法检测副溶血性弧菌基因组DNA的最低检测限分别为3 fg/μL和34 fg/μL,纯培养物的最低检测限分别为9.85×103 CFU/mL和8.25×105 CFU/mL;且与其他6种常见致病菌(霍乱弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌、嗜水气单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌)均无交叉反应。本研究建立的微量、可视化cLAMP方法为食源性致病菌副溶血性弧菌检测试剂盒的研发提供了技术支撑。     

长裙竹荪浸提液对食源性病原菌的抑菌作用

以长裙竹荪浸提液为天然抑菌物质,采用平板菌落计数法研究其对4种常见食源性病原菌的抑制作用,分析热处理对其抑菌活性的影响。结果表明:浸提液对病原菌的抑菌作用由高至低排序为大肠杆菌金黄色葡萄球菌副溶血性弧菌单增李斯特菌。其中,浸提液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌与单增李斯特菌的最小抑菌浓度为800μL/m L,对副溶血性弧菌的最小抑菌浓度为1 000μL/m L。将浸提液分别置于100℃水浴与121℃湿热条件下处理25 min,对其实际抑菌效果没有影响。     

乙醇促进副溶血性弧菌直接耐热溶血素的基因表达

研究乙醇对副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)直接耐热溶血素(thermostable direct hemolysin,TDH)产生和它的编码基因tdh表达的影响。以0.5%、1.0%、2.0%、4.0%、8.0%乙醇处理2株带有tdh副溶血性弧菌ATCC33847和SZ32,研究对副溶血性弧菌有氧或者无氧生长的影响。选取1.0%乙醇处理来研究TDH产量和tdh表达变化。使用TDH抗血清试剂盒测定副溶血性弧菌培养液上清中TDH水平;使用荧光定量PCR方法分析tdh基因表达状况。低浓度(0.5%、1.0%、2.0%)乙醇存在时,副溶血弧菌菌株的生长未受到显著影响,乙醇浓度4.0%时副溶血性弧菌生长受到明显抑制,8%时未见有细菌生长。1.0%乙醇处理副溶血性弧菌培养液上清中TDH水平较未处理显著上升。胞内tdh表达水平升高,ATCC33847在有氧和无氧时分别升高到6.6倍和5.7倍,SZ32在有氧和无氧时分别升高到5.9倍和8.6倍。乙醇能够促进tdh基因表达从而使得TDH蛋白产量升高。本研究还比较了甲醇、乙醇、正丙醇对tdh表达的影响,发现它们对tdh表达均具有促进作用但相互之间没有明显差异。     

副溶血性弧菌噬菌体的分离及其在即食虾中的应用

为了研究噬菌体作为天然生物防控剂应用于食品中的前景,本实验从水产品市场的污水中采用双层平板法分离纯化出一株烈性副溶血性弧菌噬菌体SHOU24,测定其生理特性,并探讨其在即食虾中的抑菌效果。结果表明:该噬菌体只对含有毒力基因tdh的副溶血性弧菌有裂解能力。电镜观察其形态表明该噬菌体属于长尾噬菌体科。SHOU24的最适p H为7~8。在50℃温度以下,存活率很高。抑菌实验结果表明该噬菌体在常温条件下对即食虾中副溶血性弧菌的生长具有良好的抑制作用,能使副溶血性弧菌的菌浓度下降1log CFU/g。本研究为副溶血性弧菌噬菌体SHOU24作为抑菌剂应用于食品中提供了一定的理论基础。     

一株副溶血性弧菌拮抗菌的筛选、鉴定及其抑菌物质特性研究

副溶血性弧菌是一种常见的食源性病原菌和水产致病菌。该研究通过琼脂扩散法从芦潮港海泥中筛选对副溶血性弧菌具有较强抑制作用的菌株,对其进行形态观察和16S rDNA分子鉴定,并对其所产抑菌物质进行抑菌谱和理化特性研究。结果表明,筛选出的枯草芽胞杆菌H5对副溶血性弧菌ATCC 17802具有强烈的抑制作用,抑菌圈直径达（32.05±0.10）mm,其产生的抑菌物质具有广谱抑菌活性,对革兰氏阳性菌的抑制作用大于革兰氏阴性菌。通过理化性质研究发现,H5所产抑菌物质在121℃处理30 min和较宽的pH值范围内（2～12）可保持良好的稳定性,并具有良好的紫外线稳定性和有机溶剂稳定性,且Mn²⁺和Zn²⁺可提高其抑菌活性而Ca²⁺和Mg²⁺可抑制其活性。H5所产抑菌物质经过蛋白酶处理后活性下降,证明其是一种抗菌肽。综上所述,枯草芽胞杆菌H5所产抗菌肽不仅具有良好的稳定性,而且抑菌谱广、抑菌活性强,在食品工业和医药行业具有广阔的开发和应用前景。     

水产品中副溶血性弧菌实时荧光PCR检测方法

建立了一种特异、灵敏、稳定的副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus,VP)致病基因的检测方法。对已建立的副溶血性弧菌致病基因tdh、trh和tlh荧光PCR方法的特异性、灵敏度和重复性进行检测,以验证该方法的有效性。该方法与副溶血性弧菌反应良好,与其他弧菌属和非弧菌属的6株常见食源性致病菌无交叉反应;检测了6株副溶血性弧菌标准菌株和分离株,3种致病基因检出限分别为tlh 6～43 CFU/mL,tdh 97～1 700 CFU/mL,trh 1 100～4 000 CFU/mL;3种致病基因20次重复组内变异系数在0.96%～1.50%,组间变异系数在2.70%～4.10%。该方法操作简便,特异性强,灵敏度高,能够准确、快速、灵敏地检测水产品中副溶血性弧菌。     

2017~2019年广东省动物性水产品7种致病微生物污染状况分析

目的 了解2017-2019年广东省水产品中7种致病菌的污染状况。方法 2017~2019年在广东省的17地市总共采集875份动物性水产品样品, 进行创伤弧菌、单核细胞增生李斯特氏菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、溶藻弧菌、河弧菌以及沙门氏菌共7种致病菌的检测。结果 2017~2019年致病菌的总检出率为43.20%(378/875), 淡水产品致病菌检出率略高于海产品; 根据水产品类型分类, 致病菌在虾类和蟹类在均有较高的检出率。7种致病菌中, 副溶血性弧菌、溶藻弧菌和沙门氏菌检出率较高, 分别为41.16%, 17.26%, 12.50%。各地市均有不同程度致病菌检出, 其中茂名、清远的副溶血性弧菌检出较高; 广州和潮州的溶藻弧菌检出较高; 清远的沙门氏菌检出较高。结论 副溶血性弧菌是广东省水产品主要污染致病菌; 小餐饮和实体店中的致病菌检出率相对较高, 存在一定风险。应加强多种食品的致病菌监测, 针对性的提升对小型餐饮业的卫生管理, 以降低食源性致病菌感染的风险。     

11种精油对三种水产品特定腐败菌的抑制

通过抑菌圈、平板稀释法、气相扩散法等体外抑菌试验研究了11种精油对三种常见的水产品特定腐败菌(Specific spoilage organism,SSO)的抑制效果。结果表明:百里香和牛至精油的抑菌效果较好,对三种供试SSO的固相最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)均为0.3125μL/mL,对荧光假单胞菌与副溶血性弧菌的气相MIC为0.0625μL/mL,腐败希瓦氏菌的MIC为0.0313μL/mL。丁香精油在固相试验中有很好的抑菌效果,对三种菌的MIC不大于1.25μL/mL,但气相抑菌效果较差,对荧光假单胞菌与副溶血性弧菌的MIC>2μL/mL。     

淮安地区小龙虾及其外环境中致病菌分布规律和耐药性分析

目的了解淮安地区生鲜小龙虾及其外环境中致病菌的分布规律以及相关菌株的耐药性,为食源性疾病的防控提供依据。方法根据食品微生物检测国家标准,检测70份小龙虾样品(养殖环节30份、销售环节40份)和40份外环境水体样本(养殖环节15份、销售环节25份)中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希菌O157和副溶血性弧菌,并对沙门氏菌进行血清型鉴定,然后用纸片扩散法测定沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的耐药性。结果小龙虾中致病菌的总检出率为41.43%,致病菌类型包括沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌和单核细胞增生李斯特菌。外坏境水体中致病菌的总检出率为22.50%,致病菌类型包括沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌。沙门氏菌分离株主要对萘啶酸和氨苄西林具有较强的耐药性;金黄色葡萄球菌分离株则对红霉素、甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲(?)唑和克林霉素具有较强的耐药性。结论淮安地区小龙虾及其外环境水体中存在致病菌污染,并且沙门氏菌和金黄色葡萄球菌分离菌株的耐药情况严重。     

异硫氰酸苄酯及其类似物抑菌活性的初步探究

本文对异硫氰酸苄酯及其类似物(异氰酸苄酯、异硫氰酸苯酯、异硫氰酸苯乙酯、异硫氰酸乙酯)对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抑菌活性进行初步探究。通过对抑菌圈、最低抑菌浓度、最低杀菌浓度、生长曲线、能量代谢及构效关系研究,初步探究了异硫氰酸苄酯及其类似物的抑菌基团及抑菌机理。结果表明:5种物质对两种受试菌种均具有抑菌作用,尤其对金黄色葡萄球菌最为敏感;其抑菌活性是由异硫氰酸基团、亚甲基以及苯环三者共同作用的结果,并且异硫氰酸基团对其抑菌活性的决定性作用最大、亚甲基次之、苯环最弱。结构不同物质对细菌的代谢活性及相关酶活性的影响也不同。其中,异硫氰酸基团对能量代谢影响最大,氧原子被硫原子取代后进一步增强了这种作用,苯环的存在对能量代谢的影响产生反向作用。但对能量代谢影响最为明显的抑菌物质,其抑菌活性并不是最强的,这说明可能还存在其他抑菌机理。     

柠檬醛对副溶血性弧菌的抑制作用

有效预防和控制副溶血性弧菌对食品的污染对于保障公众健康具有重要意义。本研究首先利用琼脂稀释法测定7?种植物源活性物质（丁香酸、阿魏酸、绿原酸、硫辛酸、原儿茶酸、原儿茶醛和柠檬醛）对副溶血性弧菌的最小抑菌浓度,在此基础上选择柠檬醛进行后续实验;通过检测经柠檬醛处理后的副溶血性弧菌生长曲线、细胞膜电位、胞内ATP浓度、细胞膜完整性以及细胞形态的变化,探究柠檬醛对副溶血性弧菌的抑制作用及可能的作用机理。结果表明：柠檬醛相比于其他6?种植物源活性物质对副溶血性弧菌有更好的抑菌效果,其对两株标准菌株和8?株分离菌株的最小抑菌浓度在0.10～0.60?mg/mL范围内;柠檬醛能够引起副溶血性弧菌细胞膜电位去极化、胞内ATP浓度降低及细胞膜完整性下降,同时可使细胞皱缩变形。本研究结果表明柠檬醛具有良好的抑菌功效,并有潜力作为天然的抗菌物质应用于食品工业。     

茶多酚对泥蚶中副溶血性弧菌的抑制效果

为了降低食用泥蚶引起的副溶血性弧菌食源性疾病的风险,研究了天然抑菌剂茶多酚对泥蚶中副溶血性弧菌的抑制作用并做出感官评价。副溶血性弧菌的定量采用三管最大可能值法(MPN法)。研究结果表明,茶多酚对副溶血性弧菌的最低抑制浓度(MIC)为0.5 g/L;带菌泥蚶经0.5 g/L的茶多酚处理后于0℃,5℃和10℃下贮藏60h,副溶血性弧菌数量分别下降了2.75 Log10 MPN/g,2.59 Log10 MPN/g和2.15 Log10 MPN/g,杀菌率均在99%以上。经感官评定小组评定,茶多酚浓度为0.5 g/L时,对泥蚶的色泽、气味、口感等感官特性不产生负面影响。茶多酚是一种理想的天然抑菌剂。     

北京市水产品污染与感染病例中副溶血性弧菌血清型和毒力基因型的比较研究

目的对北京市夏季市售水产品污染与感染病例中副溶血性弧菌血清型和毒力基因型进行比较研究,为评估食品安全风险监测的目的与意义提供思路,为北京市水产品副溶血性弧菌污染与临床感染病例的关联性研究提供技术支持。方法对采集的水产品样品和哨点医院腹泻患者粪便样本进行副溶血性弧菌的分离鉴定,采用血清玻片凝集法对分离出的副溶血性弧菌进行血清分型,PCR方法检测菌株的tlh、tdh、trh基因。结果 2014年7~9月共采集水产品样品164份,检出副溶血性弧菌80份,总污染率为48.78%;其中淡水产品污染率为38.78%(19/49),平均菌量浓度为66.63 MPN/g;海水产品污染率为53.04%(61/115),平均菌量浓度为38.14 MPN/g。80株副溶血性弧菌分属于9个血清群,其中O2群28株,占35.00%,O1群11株,占13.75%,O5群10株,占12.50%。80株菌tlh基因均为阳性,只有1株菌携带tdh毒力基因,所有菌株trh毒力基因均为阴性。哨点医院腹泻病人粪便样本中分离鉴定副溶血性弧菌21株,血清型O3∶K6占61.90%(13/21),O4:K8占28.57%(6/21);毒力基因型tdh(+)/trh(-)占95.24%(20/21),tdh(-)/trh(-)占4.76%(1/21)。结论来源于食品样品的副溶血性弧菌绝大部分不具备致病性,而导致消费者腹泻的副溶血性弧菌绝大部分携带致病性毒力基因,表明目前的食品安全风险监测结果不能作为评估副溶血弧菌导致的食源性疾病暴发和散发的依据。     

食品中副溶血性弧菌toxR和tdh基因双色荧光PCR检测方法的建立

目的 建立对副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）特异性检测toxR（跨膜转录激活蛋白）基因和tdh（热稳定性直接溶血素）毒力基因的Taqman探针双色荧光PCR检测方法。方法 根据副溶血性弧菌toxR基因和tdh基因,分别设计引物和探针,建立Taqman探针双色荧光PCR扩增体系,进行特异性、灵敏度试验;对副溶血性弧菌分离菌株实施检测,了解其tdh基因和tdh基因分布情况。结果 结果表明,副溶血性弧菌标准菌株和3株从食物中毒患者中分离获得的分离株均出现toxR基因和tdh扩增曲线,而溶藻弧菌、单增李斯特菌等31株弧菌属其他菌株和肠杆菌科的菌株未见扩增曲线。从食品中分离的37株副溶血性弧菌分离株均未携带tdh毒力基因。副溶血性弧菌检测灵敏度可达到3.6×102 cfu/mL。结论 该方法可用于同时检测食品中副溶血性弧菌的特异性和毒力基因。