人参多糖对氧化应激损伤肝细胞的保护作用机制研究

目的:以氧化应激损伤模型,通过对人参中物质基础的筛选,研究其对氧化应激造成的肝细胞损伤的保护作用及其可能的作用机制的初步探讨。方法:采用浓度为25 μmol/L的过氧化氢溶液建立肝细胞损伤模型,对人参中总蛋白、总多糖、总皂苷的保护作用进行筛选。在此基础上,采用流式细胞术检测其凋亡程度、线粒体膜电位的改变,活性氧的含量变化。并采用ELISA法测肝糖原,超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)及ATP酶等指标的变化情况。结果:经过氧化氢诱导后的肝细胞,细胞活力极显著降低(P<0.01),通过对比人参中活性成分,发现人参多糖的保护作用较强,且呈现浓度依赖性;与模型组比较,人参多糖高剂量组大鼠肝细胞中MDA含量非常显著降低(P<0.001);中、高剂量组大鼠肝细胞中SOD含量显著升高(P<0.05);低剂量组大鼠肝细胞中G6P含量显著升高(P<0.05),中、高剂量组中G6P含量极显著升高(P<0.01);中剂量组大鼠肝细胞中PEPCK的含量显著升高(P<0.05),高剂量组中PEPCK的含量极显著升高(P<0.01);低、中剂量组大鼠肝细胞中ATP酶含量极显著升高(P<0.01);中、高剂量组大鼠肝细胞中肝糖原含量显著升高(P<0.05)。结论:人参多糖通过提高肝细胞中ATP酶的活力,升高线粒体膜电位来恢复肝细胞线粒体的功能,通过恢复G6P与PEPCK的含量来恢复肝脏糖异生的功能,同时通过升高SOD,降低MDA来减弱氧化应激带来的损伤,为后续研究氧化应激造成肝损伤提供一定的基础。     

小黑药亲电成分干预混合游离脂肪酸诱导的人肝癌细胞株HepG2脂肪变性研究

采用GSH功能化磁珠靶向敲出小黑药亲电成分并用LC-MS表征,基于游离脂肪酸(FFA)诱导的HepG2细胞脂肪变性模型,评价小黑药亲电成分降低肝细胞脂质累积和氧化应激的作用和机制。结果表明:小黑药亲电成分主要集中在乙酸乙酯部位;在0.5~2.0mg/mL浓度下,小黑药石油醚部位、乙酸乙酯部位、水部位均具有降低脂肪变性细胞脂质累积和ROS生成的活性,其中乙酸乙酯部位在各浓度下效果最好;乙酸乙酯部位在各浓度下具有降低细胞内TG、TC水平和提高细胞内抗氧化酶活性的作用;经过GSH功能化磁珠靶向敲出亲电化合物后,乙酸乙酯部位在2.0μg/mL浓度下对细胞内TG水平的降低和细胞内抗氧化酶水平的提高效果显著减弱。乙酸乙酯部位萃取物上调Nrf2及下游NQO1、HO-1、GCLC基因,下调脂质合成基因SREBP1c、ACC1、FAS的表达,促进脂质分解基因PPARα、CPT1A的表达;而靶向敲出亲电成分后,乙酸乙酯部位萃取物调控脂代谢和抗氧化相关基因的作用明显下降。LC-MS表征亲电成分敲出前后乙酸乙酯部位样品,发现了7个变化的主要质谱峰,推测其为主要的亲电化合物。小黑药中亲电化合物可以改善脂肪酸诱导的脂肪变性,其机制主要与抗氧化和脂代谢相关基因的调节有关。     

基于乙酰胆碱酯酶和氧化应激研究海胆酮对阿尔茨海默症的作用机制

海胆酮是一种酮式类胡萝卜素，主要从海胆及藻类等海洋生物中提取。本文研究海胆酮对乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase，AChE）的抑制作用，应用酶动力学、荧光光谱、圆二色光谱和分子对接技术研究海胆酮对AChE的抑制机理，并用淀粉样β蛋白片段25～35（amyloid beta-peptide 25-35，Aβ25-35）诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞）建立阿尔茨海默症（Alzheimer’s disease，AD）模型，研究海胆酮对AD细胞模型氧化应激损伤的作用。结果表明，海胆酮有很强的AChE抑制活性，其半抑制质量浓度为（16.29±0.97）μg/mL，抑制常数Ki为3.82 μg/mL，表现为竞争性抑制；海胆酮可诱导AChE二级结构改变，更容易与AChE活性中心氨基酸Ser200、His440、Trp84和Tyr121结合，阻碍底物碘代硫代乙酰胆碱（acetylthiocholine iodide，ATCI）与酶结合，从而引起酶活力降低。海胆酮能有效抑制Aβ25-35诱导PC12细胞的AChE活力，降低丙二醛含量，增加超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力，减轻Aβ25-35诱导的PC12细胞氧化应激损伤。本研究基于AChE和氧化应激阐明了海胆酮对AD的潜在作用机制，为海胆酮在功能食品、生物医药等领域的应用提供了数据支持和理论根据。     

心脉隆对缺血性心肌病的疗效及对心功能和氧化应激水平的影响

目的:探讨心脉隆对缺血性心肌病的疗效及对心功能和氧化应激水平的影响。方法:选取本院2017年5月-2018年5月收治的缺血性心肌病患者90例,按随机数字表法分成对照组与观察组,各45例。在抗心衰常规治疗基础上,对照组服用安慰剂,观察组服用心脉隆胶囊。比较两组心功能指标、氧化应激水平及治疗效果。结果:两组治疗后超声心动图左室射血分数(LVEF)升高,胸片心胸比(CTR)降低,脑尿钠肽(BNP)减少(P<0.05)。观察组各心功能指标均优于对照组(P<0.05)。两组治疗后血清总抗氧化能力(TAOC)增强,活性氧(ROS)下降,超氧化物歧化酶(SOD)升高(P<0.05)。观察组氧化应激水平优于对照组(P<0.05),观察组总有效率为86.7%明显高于对照组的42.2%(P<0.05)。结论:心脉隆治疗缺血性心肌病的疗效显著,可恢复心功能,对氧化应激水平产生积极的影响,具有较高的应用前景。     

氧化应激参与丙烯酰胺致神经细胞凋亡及炎症反应的研究进展

丙烯酰胺（acrylamide，AA）是一种重要的工业原料，具有神经毒性、生殖毒性、遗传毒性及潜在致癌性。2002年，AA首次被报道作为美拉德反应的副产物之一，在油炸和焙烤等热加工高淀粉食品中广泛存在。氧化应激（oxidative stress, OS）是机体内氧化与抗氧化系统之间的平衡被破坏而造成的应激状态，可被多种环境因素激活，并与细胞凋亡及炎症反应的发生密切相关。大量研究发现，OS常伴随着AA诱导的中枢神经系统细胞凋亡及炎症反应发生，也是AA与神经退行性疾病相关性的重要连接纽带。本文就OS在AA诱导的凋亡及炎症反应中的作用进行综述，为AA神经毒性机制的深入研究及其毒性干预提供参考。     

葡萄糖诱导的线粒体蛋白氧化应激及调控机制概述

食品中的葡萄糖是人体细胞获取能量的重要来源,细胞中的线粒体是重要的能量代谢场所,在维持人体正常生理代谢功能中起重要作用。但葡萄糖代谢异常会导致线粒体功能紊乱,这是通过葡萄糖诱导的氧化应激导致的线粒体蛋白功能异常,进而引发相关疾病,例如糖尿病、阿尔茨海默症和脑中风。所以维持线粒体生理功能,研究氧化应激调控机制,探究相关疾病更有效的治疗手段至关重要。本文综述了氧化应激涉及的主要线粒体蛋白(包括顺乌头酸酶、腺嘌呤核苷酸转位酶、二氢硫辛酰胺脱氢酶、线粒体蛋白复合物Ⅰ、雌激素受体β、热休克转录因子1和缺氧诱导因子2a)、氧化应激调控机制(包括丙酮酸调节、线粒体蛋白之间的协同调节)和人工干预过程(包括乙醇戒断、亚甲蓝作电子受体和5-甲氧基吲哚-2-羧酸预处理)。     

三氧化二砷染毒小鼠肝脏中砷甲基化水平与肝脏氧化应激的关系

目的探讨三氧化二砷(As2O3)染毒小鼠肝脏组织中砷甲基化水平的变化及其与肝脏氧化应激关系,为揭示砷甲基化水平在砷毒性机制中的作用提供依据。方法将40只昆明种小鼠随机分为对照组(0.9%生理盐水)、As2O3低中高剂量组(1.0、2.0和4.0 mg/kg)组,连续灌胃5周;采用高效液相色谱与原子荧光联用技术(HPLC-HGAFS)测定肝脏组织中三价无机砷(As3+)、五价无机砷(As5+)、一甲基胂(MMA)、二甲基胂(DMA)含量及构成比(%),计算砷一甲基化指数(PMI)、二甲基化指数(SMI);利用试剂盒测定丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)。结果随着As2O3剂量增加,小鼠肝脏组织中各形态砷代谢产物含量增加(P<0.001),砷甲基化水平(i As%、MMA%、DMA%、PMI、SMI)提高(P<0.001);小鼠肝脏MDA显著高于对照组(P<0.001),GSH、SOD、T-AOC显著低于对照组(P<0.001);1 mg/kg染毒剂量时,PMI与T-AOC呈负相关(P<0.05),SMI与GSH、SOD呈负相关(P<0.05);在2 mg/kg染毒剂量时,PMI、SMI与MDA呈正相关(P<0.05)而与GSH、SOD呈负相关(P<0.05);在4 mg/kg染毒剂量时,PMI与MDA呈正相关(P<0.05),PMI、SMI与GSH、SOD呈负相关(P<0.05)。结论随着砷染毒剂量的增加,小鼠肝脏组织中各种形态砷含量增多,砷甲基化水平提高,进而导致小鼠肝脏氧化损伤严重。     

阿里红多糖对Aβ1‒42诱导的AD大鼠模型海马区及脑皮层ROS/8-OHdG/3-NT/4-HNE含量的影响

[摘要] 目的：观察阿里红多糖（Fomes officinalis Ames polysaccharides，FOPS）对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠海马区神经元的形态改变及脑皮层和海马区氧化应激水平的影响。方法：72只健康雄性SD大鼠称体质量并按随机原则分为空白组、模型组、盐酸多奈哌齐组（0.5 mg/kg）、阿里红多糖高、中、低剂量组(100 mg/kg、50 mg/kg、25 mg/kg)，每组12只。采用大鼠双侧海马CA1区注射（5μl/侧）Aβ1-42建立AD大鼠模型，给药30d后，苏木精-伊红（HE）染色观察海马神经元的形态改变，DCFH-DA荧光探针分析处理对各组大鼠海马区和脑皮质层中活性氧簇（ROS）的影响，酶联免疫吸附（ELISA）法检测8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）、3-硝基酪氨酸（3-NT）、4羟基壬烯醛（4-HNE）的含量。结果：干预30d后，与模型组比较，盐酸多奈哌齐及阿里红多糖组大鼠锥体细胞数目明显增多、形态较完整、海马神经元大多数较正常、排列较规整紧密、着色均匀、核仁清晰，大鼠海马区及脑皮层ROS含量明显降低(P<0.01)，8-OHdG、3-NT、4-HNE含量明显降低(P<0.01)。结论：阿里红多糖通过影响Aβ1-42诱导的AD大鼠脑内ROS、8-OHdG、3-NT、4-HNE含量，改善脑内氧化应激状态，起到改善认知障碍和保护神经的作用。     

亚麻籽油对多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗和氧化应激的保护作用

本文研究了富含α-亚麻酸(ALA)的亚麻籽油(FO)对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠胰岛素抵抗和氧化应激水平的影响。采用来曲唑造模法建立PCOS大鼠模型,建模成功后,FO对照组和FO干预模型组灌胃FO 8 W;阴性对照组和模型组灌胃等量生理盐水。干预结束后,检测各组大鼠血液中性激素、血脂、胰岛素抵抗与氧化应激指标含量。结果显示,膳食FO干预后雄激素(T)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和丙二醛(MDA)水平较模型组显著降低至3.26 nmoL/mL、1.78 mmoL/mL、1.45 mmoL/mL、5.37 mIU/L、1.22和5.33 nmoL/mL(p0.05);雌二醇(E2)和抗氧化指标总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)升高至26.54 pmoL/mL、5.11 U/mL、372.10酶活力单位和80.29 U/mL(p0.05)。本研究表明膳食FO能够改善PCOS大鼠的胰岛素抵抗和氧化应激状态。     

细胞焦亡介导慢性间歇缺氧大鼠肾脏损伤及依达拉奉的干预作用

目的：探究依达拉奉对慢性间歇缺氧导致大鼠肾脏损伤的保护作用及其对Caspase-1介导的细胞焦亡信号通路的影响。方法：24只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照（NC）组、间歇缺氧（IH）组、间歇缺氧+生理盐水（IH+NS）组、间歇缺氧+依达拉奉（IH+EDA）组,每组6只。将4组大鼠放置在密闭式饲养舱内造模,NC组舱内氧气浓度维持在21%左右,IH组、IH+NS组、IH+EDA组定时输入纯氧气、纯氮气、压缩空气,使舱内形成缺氧-复氧循环（60 s低氧期+60 s复氧期）,低氧期舱内氧浓度降至6%～7%,每日造模8 h（10∶00-18∶00）,同时IH+EDA组大鼠每天造模前按照5 mg/kg剂量标准予以腹腔注射依达拉奉,IH+NS组大鼠按照同等剂量标准腹腔注射生理盐水。造模8周后采集大鼠血液标本及肾脏组织标本,测定各组大鼠血肌酐（Crea）、尿素（Urea）水平;HE、Masson染色后光镜下观察肾脏病理形态变化、纤维化程度;化学法测定丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力;免疫组织化学染色法测定肾组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平;Western blot法测定肾组织Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平;RT-PCR法测定消皮素D（gasdermin D, GSDMD）、IL-18 mRNA扩增水平。结果：间歇缺氧暴露后,大鼠血清Crea、Urea明显升高（P<0.01）,肾小管发生病理损害、肾单位球囊间隙出现胶原纤维沉积,MDA含量增加、SOD活力降低（P<0.01）,Caspase-1、NLRP3、IL-1β蛋白表达增加（P<0.01或P<0.05）、GSDMD mRNA、IL-18 mRNA扩增增加（P<0.01）;而经过依达拉奉干预后,上述指标呈现出与间歇低氧暴露后相反的变化趋势,肾脏病理损害减轻（P<0.01或P<0.05）。 结论：慢性间歇缺氧可能通过氧化应激活化Caspase-1参与的细胞焦亡信号通路介导肾脏损伤过程,而依达拉奉可能通过清除氧自由基、下调机体氧化应激水平,抑制焦亡通路的活化,起到保护肾脏的作用。