测定硫酸软骨素相对分子质量及其分布的方法

开发了一种简单、微量的测定硫酸软骨素相对分子质量(Mr)的方法.首先用Mr已知的硫酸软骨素校正葡聚糖凝胶G-200色谱柱和琼脂糖凝胶6B色谱柱.然后采用凝胶色谱法用已校正的色谱柱测定(M)w未知的硫酸软骨素样品的Mr及其分布,并考察洗脱液离子强度变化的影响.在95％置信度下,重复测定的(M)w均值变动为(M)w±3％.     

鸡胸软骨硫酸软骨素的制备及结构分析

首先分析了鸡胸软骨中主要营养成分,再用酶法提取生物活性多糖硫酸软骨素,并用三氯乙酸除蛋白、乙醇沉淀和柱色谱进行分离纯化得到高纯度产品。反相高效液相色谱和原子吸收光谱分析表明鸡胸软骨富含呈味氨基酸和钙、镁和锌等矿物元素。高效凝胶过滤色谱和琼脂糖凝胶电泳证明该纯化后的硫酸软骨素产品均一,纯度达到99%,其分子量为21007D。其红外光谱呈现4-硫酸软骨素的典型特征,没有发现6-硫酸软骨素存在。气相色谱分析发现其中中性单糖主要为葡萄糖、木糖和半乳糖,与猪喉软骨存在明显差异。     

GPC法测定香菇多糖的含量及相对分子质量

本文建立了用凝胶渗透色谱法(GPC)测定香菇多糖含量和相对分子质量的方法.采用TSK凝胶色谱柱,以KH,PO4缓冲液为流动相,示差折光检测器检测.以葡聚糖标准曲线作参照,测得香菇多糖L1、L2的重均相对分子质量(Mw)分别为34808和34168,测定L1、L2的质量分数分别为99.96%、95.57%.     

不同硫酸软骨素对口腔癌KB细胞的抑制作用

以鲟鱼软骨和鸡软骨为原料,采用碱提-酶解-醇沉的工艺流程提取硫酸软骨素后,利用Sephadex G-50凝胶色谱及Sephacryl S-300 HR凝胶色谱对硫酸软骨素进行纯化,并通过高效凝胶渗透色谱法进行分子质量测定与纯度鉴定。采用MTT法检测硫酸软骨素对口腔癌KB细胞增殖活性的影响,并采用流式细胞术检测口腔癌KB细胞凋亡情况。研究结果表明鲟鱼及鸡软骨硫酸软骨素粗制品得率分别为23.80%和25.23%。经高效液相凝胶渗透色谱分析可得纯化的鲟鱼及鸡软骨硫酸软骨素均为高纯度多糖,且鲟鱼软骨硫酸软骨素的平均分子量比鸡软骨硫酸软骨素的大。以体外抗肿瘤的方法研究硫酸软骨素粗提物和纯化样品对口腔癌KB细胞的抑制作用,结果所得鲟鱼软骨硫酸软骨素粗制品和纯化样品的IC50值分别为80.18μg/m L和58.78μg/m L;鸡软骨硫酸软骨素粗制品和纯化样品的IC50值分别为68.55μg/m L和53.71μg/m L。流式细胞术表明硫酸软骨素能够诱导KB细胞发生凋亡,细胞凋亡率与药物的浓度呈剂量依赖关系,且鸡软骨硫酸软骨素诱导KB细胞凋亡率高于鲟鱼软骨硫酸软骨素。     

鱿鱼硫酸软骨素糖蛋白的分离纯化和鉴定

目的:研究鱿鱼软骨硫酸软骨素的主要成分.方法:以鱿鱼喉软骨为材料,经提取、分离和纯化等步骤得到一酸性粘多糖组分C-S2:用高效凝胶过滤色谱和比旋光度鉴定其纯度,并用化学和光谱法研究其组成和结构.结果:C-S2为均一性较好的粘多糖,为硫酸软骨素C糖蛋白,其重均相对分子质量(Mw)149 595,比旋光度-25.3.软骨素含量95.31%,蛋白含量2.59%,葡萄糖醛酸(GlcA)含量35.02%,己糖胺含量34.02%,总硫酸基含量9.54%,并存在少量中性单耱,由鼠李糖(Rha)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glu)和半乳糖(Gal)组成;β-消去反应说明C-S2中糖链以O-糖肽键连接到苏氨酸上.结论:鱿鱼软骨硫酸软骨素的主要成分为硫酸软骨素C糖蛋白.     

猪喉软骨硫酸软骨素的制备和自由基清除活性

直接用木瓜蛋白酶水解软骨,三氯醋酸除蛋白质,乙醇沉淀干燥得硫酸软骨素粗多糖,经DEAE-Sepharose fast flow离子交换层析分离纯化,高效凝胶渗透色谱和琼脂糖凝胶电泳测定其相对分子质量和纯度,比较硫酸软骨素粗品和纯品的体外自由基清除活性。结果显示硫酸软骨素粗品和纯品提取率分别为31.56±0.46%和19.79±0.78%,后者相对相对分子质量为75 174,粗品的DPPH.和.OH清除活性最强,随着产品纯度的提高,活性降低,而对于O2-.清除活性结果则相反。     

同时测定软骨酶解物中硫酸软骨素及透明质酸含量的高效液相色谱法的建立

为了准确快速同时测定软骨酶解物中硫酸软骨素和透明质酸含量，以半乳糖胺和葡萄糖胺为测定目标物，通过优化色谱条件和方法性试验，建立了一种高效液相色谱的测定方法。使用ZORBAX C18柱分离，用乙腈和乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱，流速为1.00 mL/min，在波长250 nm下测定。方法性试验表明，硫酸软骨素和透明质酸的质量浓度在100~500 mg/L范围与峰面积线性关系良好，其中硫酸软骨素的检出限为0.948 mg/L，重复性偏差0.089%，平均回收率99.71%，相对偏差0.35%；透明质酸的检出限为0.027 mg/L，重复性偏差0.045%，平均回收率97.74%，相对偏差0.92%。与传统方法相比，该法具有受杂质干扰影响小，准确度高，重复性优异，回收率以及精确度高的优势，可以实现准确快速同时测定软骨酶解物中硫酸软骨素和透明质酸的含量。     

鸡软骨中硫酸软骨素的分离纯化

以鸡软骨为原料,对酶法提取硫酸软骨素进行纯化工艺的研究,采用阴离子交换树脂和凝胶层析法对提取的硫酸软骨素粗品进行纯化。结果表明:D218型阴离子交换树脂纯化硫酸软骨素最佳工艺条件为,吸附液用量与树脂体积比为1∶1;吸附流速为1.0m L/min;吸附时间为60 min;洗脱剂Na Cl溶液的浓度为3.0mol/L;洗脱剂用量与树脂体积比为5∶1,最佳解析时间为75 min,硫酸软骨素纯度为72.03%。通过葡聚糖凝胶G-75纯化后得到的硫酸软骨素的纯度为99.30%,较第一次纯化提高了27.27%。通过高效液相色谱法对纯化后的物质进行检测,进一步证明从鸡软骨中提取的物质为CS。     

液相色谱法测定保健食品中硫酸软骨素的含量

目的建立一种快速、简便测定保健食品中硫酸软骨素的液相色谱方法,并进行方法学研究。方法样品经过前处理,以乙腈和0.005 mol/L戊烷磺酸钠溶液为流动相,等度洗脱,经Diamonsil C18柱分离,于192 nm波长检测。结果用本方法进行检测,能很好地分离硫酸软骨素,在浓度0.008 mg/m L~0.04 mg/m L之间呈现良好的线性关系,方法的相关系数可达1.000,平均回收率在98.5%~100.0%之间,相对标准偏差为0.6%。结论采用该方法能测定保健食品中硫酸软骨素,耗时短、操作简便、准确、重现性好,分离效果明显,可在实验室推广。     

两种胡桃醌脂质体包封率测定方法研究

目的:建立两种胡桃醌脂质体包封率的测定方法,并对测定结果进行比较。方法:分别采用透析法和葡聚糖凝胶色谱柱法对脂质体中的游离药物进行分离,然后使用紫外分光光度计对脂质体包封的药物进行测定进而计算包封率。结果:透析法透析14h达到稳定;葡聚糖凝胶色谱柱法在30min内即将游离药物与脂质体进行有效的分离。胡桃醌测定波长为425nm,在0.005~0.04mg/m L的浓度范围内,线性关系良好,经回收率实验、精密度及重现性实验证实两种方法可行。结论:对比两种方法可知透析法耗时较长测定的包封率值偏低,葡聚糖凝胶色谱柱法测定所需时间更短,更便捷,测出的包封率更接近真实值。     

凝胶渗透色谱净化-气相色谱法测定肉类食品中有机氯农药残留

使用疑胶渗透色谱净化-气相色谱方法能使肉类食品中25种有机氯农药的提取和分配一次完成,凝胶色谱柱使肉类食品中的脂肪和农药得到较好分离,采用的GC-ECD可以同时定性、定量地测定25种有机氯农药残留。     

简易凝胶柱净化-气相色谱法检测动物源性 样品中残留的敌敌畏

目的建立动物源样品中敌敌畏的简易凝胶色谱净化-气相色谱检测方法。方法采用凝胶净化粉湿法装填于玻璃层析柱,制成长约15 cm、直径1 cm的简易凝胶净化柱,对样品的净化洗脱液进行分段收集,分析其中敌敌畏回收率的规律。结果最终确定4.6~25 m L体积段的洗脱液为敌敌畏的最佳洗脱体积段,乙酸乙酯-环己烷(6:4,V:V)为最优配比的洗脱溶液,凝胶柱装填3.00 g凝胶粉时净化效果最佳。选取猪肉、牛肉、鸡肉、鱼肉样品,进行确证试验,回收率和变异系数均满足精确度要求,方法检出限为0.003μg/m L,加标回收率为88.2%~100.7%,相对标准偏差为0.4%~1.2%。结论该方法快速、灵敏、准确,适合动物源性食品中敌敌畏的测定。     

食醋中有机磷农药残留的测定

用气相色谱法(GC)分析测定并采用凝胶色谱净化(GPC)系统预处理,建立了食醋中有机磷残留量的检测方法。样品用乙腈提取,经凝胶渗透色谱柱净化,再经中等极性的毛细管色谱柱DB-1701P(30m×0.25mm×0.25μm)分离,气相色谱火焰光度检测器(FPD)检测。有机磷在食醋样品中的残留量检测的检出限为0.0040～0.050mg/kg。在样品中添加29种农药混合标准溶液,平均回收率为72.4%～120.8%,相对标准偏差为0.7%～14.5%(n=3),可满足食醋样品中有机磷农残的测定。     

鸡胸软骨多糖组分的分级及自由基清除活性研究

直接用木瓜蛋白酶水解鸡胸软骨,经三氯乙酸除蛋白质、乙醇沉淀、干燥得多糖粗品,采用DEAESepharoseFast Flow 离子交换柱色谱和Sepharose 6B Fast Flow 分离纯化粗多糖,并进行光谱学分析和自由基清除活性研究。结果显示：乙醇沉淀多糖的自由基清除活性显著高于初步透析后的粗多糖,纯化后的硫酸软素的活性最小。粗多糖经DEAE-Sepharose Fast Flow 离子交换柱层析和Sepharose 6B Fast Flow 凝胶柱层析后,得到硫酸软骨素和其他5 种非糖胺聚糖类多糖。5 种多糖的自由基清除活性均显著大于硫酸软骨素。     

仙人掌多糖的提取、分离纯化及GPC法测定其分子量

研究了仙人掌多糖水提法的最佳工艺条件,以及仙人掌多糖的分离纯化.试验结果表明,提取液用Savag法脱蛋白后,采用Sephacryl S-400柱层析纯化,得到仙人掌多糖OP,经过高效凝胶渗透色谱和常压凝胶柱色谱分析表明,OP为均一多糖,高效液相凝胶色谱法测定OP分子量(Mw)为172591Da.     

麻竹竹叶多糖分离纯化及相对分子质量测定

为了获得更多竹资源的信息,对麻竹竹叶中的多糖进行了分离纯化及相对分子质量测定的研究。麻竹竹叶水提,提取物Sevage法去蛋白,95%醇沉,透析,DEAE-52纤维素柱和Sephadex G-200凝胶柱分离纯化,得到2种多糖,经高效凝胶渗透色谱测定其相对分子质量(Mw)分别为61500u和1780 ku,该实验为麻竹多糖研究打下基础,为竹资源的深度开发提供科学依据。     

瑶山甜茶可溶性糖的测定

为探明瑶山甜茶中可溶性糖的含量和种类,采用蒽酮—硫酸比色法测定其可溶性总糖含量,运用高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)测定多糖分子量分布范围,并利用高效液相色谱—蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法在两种流动相体系中测定和分析其低分子寡糖和单糖的种类与含量。结果表明,瑶山甜茶中可溶性总糖含量为15.20%,相对标准偏差(RSD)为0.996%;多糖分子量Mw范围为51551～55628,RSD为0.64%～1.23%;单糖种类主要为木糖、果糖和葡萄糖,相对含量分别是0.54%、52.18%和42.76%。     

分子排阻色谱法测定玻璃酸钠相对分子质量及其分布

目的使用分子排阻色谱（SEC）法测定玻璃酸钠（SH）相对分子质量（Mr）及其分布。方法考察进样浓度、柱温及流速对SEC法测定SH的Mr及其分布的影响。结果进样浓度对高分子SH的色谱峰形及测定结果影响较大,降低进样浓度色谱峰形明显改善,且测定结果精密度良好;柱温对SH的Mr测定结果有一定的影响;流速对SH的Mr及其分布基本无影响。结论在SH进样浓度0.1 mg/mL,柱温30℃,流速0.5 mL/min的色谱条件下,用SEC法测定SH的Mr及其分布的色谱峰形良好,结果准确可靠,可用于SH的质量控制和应用研究。     

基于凝胶渗透色谱-激光光散射联用技术的聚天冬氨酸分子量测定方法的建立

目的建立利用凝胶渗透色谱-激光光散射联用技术(gel permeation chromatography-multi-angle light scattering,GPC-MALS)对聚天冬氨酸分子量及分子量分布进行测定的方法。方法以市售聚天冬氨酸产品为样品,研究凝胶色谱柱的类型和样品浓度对检测结果的影响,利用GPC-MALS同时测定聚天冬氨酸的数均分子量、重均分子量和分子量分布等参数。结果采用Shodex Protein KW-803凝胶色谱柱,样品浓度为18.5 mg/m L时,可以得到较好的实验结果,聚天冬氨酸分子量和分子量分布测定的相对标准偏差分别为1.8%和0.7%。结论该方法操作简单,精密度良好,适用于聚天冬氨酸分子量及分子量分布的测定。     

分子排阻色谱法测定玻璃酸钠相对分子质量及其分布

目的 使用分子排阻色谱(SEC)法测定玻璃酸钠(SH)相对分子质量(Mr)及其分布.方法 考察进样浓度、柱温及流速对SEC法测定SH的Mr及其分布的影响.结果 进样浓度对高分子SH的色谱峰形及测定结果影响较大,降低进样浓度色谱峰形明显改善,且测定结果精密度良好;柱温对SH的Mr测定结果有一定的影响;流速对SH的Mr及其分布基本无影响.结论 在SH进样浓度0.1 mg/mL,柱温30℃,流速0.5 mL/min的色谱条件下,用SEC法测定SH的Mr及其分布的色谱峰形良好,结果准确可靠,可用于SH的质量控制和应用研究.