1-芘丁酸人工抗原的制备及鉴定

为制备及鉴定1-芘丁酸（1-pyrenebutyric acid）人工抗原。采用碳化二亚胺（EDC）法将1-芘丁酸与牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）进行偶联,合成人工免疫原PBA-BSA和人工检测抗原PBA-OVA;紫外扫描及SDS-聚丙烯凝胶电泳（SDS-PAGE）结果显示抗原制备成功;鼠源多抗血清的效价均已超过1 000,IC₅₀=14.31 ng/mL;与多环芳烃1-芘甲醇、1-芘甲醛、芘的交叉反应率小于14.40%,与菲、萘、苯并芘、BSA以及OVA交叉反应率均小于0.05%。作者成功制备出了PBA-BSA抗原,并且得到了敏感性良好的鼠源多抗血清,为后期单克隆抗体的制备及免疫学快速检测方法的建立奠定基础。     

卵清白蛋白-没食子酸-葡聚糖共聚物对白藜芦醇稳定性和抗氧化性的影响

采用碱法接枝和干热美拉德反应制备卵清白蛋白-没食子酸-葡聚糖（ovalbumin-gallic acid-dextran，OVA-GA-DEX）共聚物，并通过与卵清白蛋白-没食子酸（ovalbumin-gallic acid，OVA-GA）和卵清白蛋白-葡聚糖（ovalbumin-dextran，OVA-DEX）的比较，分析其理化性质以及对白藜芦醇稳定性和抗氧化性的影响。结果表明：GA或DEX与OVA共价结合，改变OVA的二级结构组成，并提高了其亲水性和乳化稳定性；3 种共聚物（OVA-GA、OVA-DEX以及OVA-GA-DEX）在Pickering乳液中的粒径分布较均匀，其中OVA-GA-DEX具有更小的平均粒径（（85.07±10.74）nm）并显示出其更好的稳定效果；OVA-GA-DEX的包埋有效地保护了白藜芦醇，防止其氧化或降解，并使白藜芦醇具有较高的抗氧化能力。     

芴完全抗原和多克隆抗体制备与鉴定

以9-芴乙酸（fluorene-9-aceticacid,FLU）为原料,经活性酯法合成完全抗原FLU-牛血清白蛋白（bovineserum albumin,BSA）和FLU-卵清白蛋白（ovalbumin,OVA）,偶联产物通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及紫外扫描法鉴定。使用FLU-BSA足垫免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,间接酶联免疫吸附实验（enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA）测得多克隆抗体效价为51 200,间接竞争ELISA方法测得芴多克隆抗体的特异性,与荧蒽的交叉反应率为12%,与其他14 种多环芳烃交叉反应不明显。     

双酚A完全抗原的制备

采用重氮化法在双酚A(BPA)上引入羧基,将其与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备双酚A完全抗原BPAH-BSA.紫外扫描光谱和红外光谱实验表明偶联成功,为进一步制备抗BPA抗体提供了良好的免疫原.     

氯吡脲人工抗原的合成与鉴定

为合成新的、有效的氯吡脲（forchlorfenuron,CPPU）人工抗原,在无水三氯化铝的催化作用下,采用傅克反应对CPPU小分子进行结构改造。采用碳二亚胺（carbodiimide,EDC）法将半抗原分别与牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）和卵清蛋白（ovalbumin,OVA）进行偶联,获得CPPU的免疫抗原（CPPU-BSA)和包被抗原（CPPU-OVA）。采用质谱、元素分析和核磁共振氢谱对CPPU半抗原（CPPU-COOH）的分子结构式进行鉴定;采用紫外光谱和高性能基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱对偶联物的结构和相对分子质量进行鉴定。结果显示成功合成出CPPU人工抗原,为其抗体的制备和免疫学方法的构建提供了参考。     

DCC法制备脱氧雪腐镰刀菌烯醇人工抗原的研究

采用了DCC法制备了呕吐毒素完全抗原,通过LC/MS和ELISA法监控制备过程,结果显示,将呕吐毒素衍生化后,在4℃偶联反应20h,呕吐毒素与牛血清白蛋白偶联成功.呕吐毒素与牛血清白蛋白的初始摩尔比为50:1.得到呕吐毒素完全抗原中呕吐毒素与牛血清白蛋白的摩尔比为9.7:1.     

甲硝唑人工抗原的合成及鼠源多抗的制备

为了获得效价高、特异性好的甲硝唑（metronidazole,MNZ）的小鼠多抗血清,采用琥珀酸酐法将甲硝唑上的羟基改造成羧基,然后通过碳二亚胺法把改造后的甲硝唑分别与牛血清白蛋白（albumin from bovine serum,BSA）和卵清蛋白（ovalbumin,OVA）进行偶联,制备免疫原MNZ-BSA和包被原MNZ-OVA。经紫外扫描和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳初步鉴定偶联成功。将免疫原MNZ-BSA分成20 μg/只和50 μg /只2 个剂量分别免疫8 周龄的BALB/c小鼠。获得了效价高、特异性好的小鼠多抗血清,效价均达到1∶104以上,IC50值为61.39 ng/mL。     

特布他林人工抗原的制备

特布他林(Terbutaline,TBL)又名特布特罗,属于小分子化合物,其分子量为225.29,本身不具有免疫原性,需要和载体蛋白偶联后方可进行抗体的制备。本试验以1,4-丁二醇二缩水甘油醚将半抗原与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联,并运用碳二亚胺法将半抗原与卵清白蛋白(OVA)进行偶联,分别制备出免疫抗原TBL-cBSA与包被抗原TBL-cOVA。紫外分光光度法及SDS-PAGE进行鉴定。经紫外扫描,证明其偶联比分别为7.60∶1、7.65∶1,此特布他林完全抗原可以免疫动物,本研究成果为特布他林抗体的制备奠定了坚实基础。     

赭曲霉毒素A人工抗原的合成与鉴定

采用N-羟琥珀酰亚胺酯(N-hydroxysuccinimide NHS)法将赭曲霉毒素A(OTA)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备了免疫抗原OTA-BSA,采用1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)法将赭曲霉毒素A(OTA)与卵清白蛋白(OVA)偶联制备了包被抗原OTA-OVA。紫外扫描和SDS-PAGE凝胶电泳结果初步表明偶联成功。用OTA-BSA分10μg/只和50μg/只两个剂量分别免疫BALB/C小鼠,获得了高效价的特异性多克隆抗血清,效价可达1∶104,抑制效价达14.7ng,证明偶联成功,并显示低剂量免疫可以提高小鼠pAb的敏感性。本研究为OTA单抗的制备及其免疫学分析方法的建立奠定了基础。     

4种邻苯二甲酸酯塑化剂人工抗原的合成及免疫检测

以4-硝基邻苯二甲酸为原料,衍生合成4 种结构类似物,并分别通过重氮化法和活泼酯法与载体蛋白牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）和卵清白蛋白（ovalbumin,OVA）偶联制得人工抗原。利用紫外光谱扫描和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electroporesis,SDS-PAGE）检测鉴定人工抗原,并用4 种与BSA偶联的人工抗原作免疫原免疫新西兰大白兔。利用酶联免疫吸附实验（enzymelinkedimmunosorbent assay,ELISA）检测抗体灵敏度和特异性。经紫外光谱和SDS-PAGE证实人工抗原偶联成功,经免疫分析法检测抗体效价,4-氨基邻苯二甲酸二丁酯-BSA（dibutyl 4-aminophthalate-BSA,DBAP-BSA）抗体效价达到1∶64 000,4-戊二单酰邻苯二甲酸二丁酯-BSA（dibutyl 4-carboxylphthalte-BSA,DBCP-BSA）、4-氨基邻苯二甲酸二异丁酯-BSA（diisobutyl 4-aminophthalate-BSA,DiBAP-BSA）和4-氨基邻苯二甲酸二环己酯-BSA（dicyclohexyl 4-aminophthalate-BSA,DCHAP-BSA）抗体效价均达到1∶128 000。DBAP-BSA、DBCP-BSA、DiBAP-BSA和DCHAP-BSA分别对邻苯二甲酸二丁酯（dibutyl phthalate,DBP）、DBP、邻苯二甲酸二异丁酯（diisobutyl phthalate,DiBP）和邻苯二甲酸二环己酯（dicyclohexyl phthalate,DCHP）4 种抗体的IC50值为0.305、0.268、0.104、0.247 μg/mL。四者之间交叉反应率低,反应特异性较好。     

利用Biolog微生物自动分析系统对两株啤酒酵母的鉴定和比较

利用Biolog微生物自动分析系统对两家大型啤酒厂生产用酵母进行鉴定,并比较了它们在碳源利用方面的差异性.     

聚合葡萄糖的检测方法

本文介绍水溶性膳食纤维聚合葡萄糖定性定量的标准方法和快速定量的方法。     

花椒油素的纯化和鉴定

研究了从花椒中提取制备高纯花椒油素的方案。采用同时蒸馏萃取(SDE)提取花椒油素,利用硅胶柱色谱分离得到粗品,经过重结晶纯化得高纯花椒油素,利用核磁共振(NMR)和反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行定性和定量分析。在SDE过程中,料水比为1:10,溶剂(无水乙醚)用量为60 m L,提取时间为1.5 h时,粗提物中花椒油素含量达47.26%。以洗脱液配比(乙酸乙酯:石油醚)为1:15、径高比为1:12、样品与硅胶质量比(上样量)为1:40、洗脱液流速为4 m L/min的硅胶柱分离得到花椒油素粗品(纯度81.79%),回收率达99.12%。最后通过重结晶获得高纯花椒油素(纯度98.23%),总回收率达90.63%,得率为0.88%。NMR分析证实晶体确为花椒油素。该方案可实现从花椒中高回收地制取高纯花椒油素,为拓宽花椒的精深加工提供参考。     

珊瑚的鉴定与保养

珊瑚是一种低等腔肠动物珊瑚虫分泌的钙质为主体的堆积物形成的骨骼,常呈树枝状产出,用于宝石工艺品中的红珊瑚以较小的分枝群体珊瑚形成,依附于海底,红珊瑚属于有机宝石,从古今中外的历史来看,红珊瑚具有着崇高的地位,在佛教中被列为佛教七宝之一,红色珊瑚被视为如来佛的化身,常被用作祭佛的吉祥物,做成佛珠,或用于装饰神像;在清代,红珊瑚曾是二     

石榴石的品种及鉴定

本文通过对比不同品种石榴石的常规宝石学特征和红外光谱特征,以期找到一种可以快速区别不同品种石榴石的方法。结果表明,铝系列和钙系列石榴石之间的区别较为简单:铝系列一般为暖色系的红色、橙色等,而钙系列一般为冷色系列的绿色;铝系列石榴石B带频率一般高于870cm-1,且常缺少D带,而钙系列石榴石B带频率一般低于870cm-1,而且一般具有D带。钙系列中钙铝榴石、钙铁榴石由于完全类质同相混溶较少,通过折射率和红外光谱也可以较好区别:钙铝榴石折射率一般小于1.78,钙铁榴石折射率一般大于1.78;钙铝榴石的红外光谱B带一般在864cm-1左右,而钙铁榴石的B带一般在837cm-1左右。铝系列中镁铝榴石、铁铝榴石、锰铝石榴石由于相互混溶现象普遍,需要综合颜色、折射率和红外光谱特征才能进行准确的判定。     

菊粉酶的分离纯化与鉴定

将无花果曲霉(Aspergillus ficuum)SK004菌株所产菊粉酶系进行分离纯化。通过活性炭脱色、硫酸铵分级沉淀、透析脱盐、DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析、Sephadex G-75凝胶色谱后,主要得到1种菊粉酶。经SDS-PAGE分析此菊粉酶为单一谱带,分子质量为53665u。     

杀菌剂抑霉唑人工抗原的合成和鉴定

以咪唑乙醇为原料,与6- 溴己酸乙酯发生取代反应后再经水解反应合成抑霉唑半抗原(6-[1-(2,4- 二氯苯基)-2-(1- 咪唑基)乙氧基]己酸)。产物经薄层层析和1H-NMR 鉴定后,采用活化酯法分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联得到免疫原(HIA-BSA)和包被原(HIA-OVA),紫外光谱分析法计算得其偶联比分别为13:1 和7:1,初步说明人工抗原合成成功。通过免疫动物获得效价为1:64000 的抗体,采用间接竞争ELISA 法测定抗体的IC50 值为1.76μg/mL,从而进一步证明人工抗原合成成功,所得的抗体可用于ELISA 检测试剂盒的研制。     

产赤藓糖醇菌株的筛选与鉴定

利用含有300g/L 葡萄糖的高渗培养基从蜂蜜、花粉、土壤等样品中筛选耐高渗酵母菌,经薄层层析和高效液相色谱分析得到两株产赤藓糖醇且不产甘油的酵母菌,通过高碘酸氧化法筛选出其中赤藓糖醇产量较高的一株菌株E54。菌株E54 在含葡萄糖200g/L、酵母膏5g/L 的发酵培养基中发酵90h,赤藓糖醇产量为41.1g/L,转化率为22.8%。通过形态观察、生理生化实验、5.8S rDNA 序列分析并构建系统进化树,初步鉴定E54 为Moniliellaacetoabutans(丛梗孢酵母)。     

3种微量化试剂对沙门氏菌及近源菌的生化鉴定结果比较

评价本实验室研制的沙门氏菌微量生化鉴定试剂盒（简称EasyID）的使用性能。用49株菌（包括沙门氏菌12株标准株,16株分离株;志贺氏菌8株标准株;柠檬酸杆菌1株标准菌和8株分离株;变形杆菌1株标准株和2株分离株;产气肠杆菌1株标准株）,测试EasyID,传统液态生化管（简称HKM）以及国内其他品牌（简称GSA和GSB）的四种鉴定试剂盒。结果表明：49株测试菌株的鉴定结果,EasyID、GSA和GSB三种试剂与HKM传统液态鉴定试剂盒鉴定结果相比总体符合率分别为100%、94.46%、95.10%,EasyID相比GSA和GSB,与HKM的符合率更高;EasyID、HKM、GSA和GSB四种鉴定试剂盒与伯杰氏手册相比总体符合率分别为97.96%、97.96%、93.00%、94.70%,EasyID和HKM符合率最高,其次为GSB,GSA稍低。结论：EasyID沙门氏菌微量生化鉴定试剂盒在可靠性上与传统生化管完全一致,在使用方便性上,采用一步加样技术的EasyID优于HKM、GSA和GSB。     

细菌纤维素高产菌株的筛选及鉴定

以残次的水果为原料,经静置富集培养、多次筛选纯化等步骤,分离出一株细菌纤维素产量较高且遗传性能稳定的菌株G-29。根据第二版《伯杰系统细菌学手册》和第九版《伯杰氏细菌鉴定手册》,对该菌株进行形态、生理生化特征和16S rDNA 分子序列分析。初步鉴定该菌为葡糖醋杆菌属(Gluconacetobacter sp.)一个新菌种或者中间葡糖醋杆菌(Gluconacetobacter intermedius)的一个亚种。菌株G-29 已保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M208234。