植物乳杆菌调节抗体和细胞因子水平缓解食物过敏的机制

食物过敏危害人体健康,利用益生菌特有的抗过敏作用来缓解食物过敏是治疗食物过敏的新方向,然而目前关于益生菌缓解过敏的机制研究还不够深入。本文以前期筛选出的具有抗过敏功能的4株植物乳杆菌为研究对象,利用Balb/c小鼠建立食物过敏模型,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)、荧光定量PCR(RT-PCR)等方法研究植物乳杆菌对Th1/Th2相关细胞因子、抗体分泌的影响。ELISA结果表明,将4株植物乳杆菌与致敏小鼠脾细胞共培养可降低IL-4的分泌水平,增加IFN-γ的分泌水平,而荧光定量结果证实IL-4及其转录因子GATA-3 m RNA表达水平显著降低,IFN-γ及其转录因子T-bet mRNA表达水平显著升高,这一结果与细胞因子分泌水平结果一致。此外,4株植物乳杆菌均可下调致敏小鼠血清中IgE分泌水平,缓解由食物过敏造成的肠道黏膜及肺泡组织损伤。这些结果说明植物乳杆菌通过调节Th1/Th2平衡来缓解食物过敏。     

荔枝果肉乙酸乙酯粗提物对Th1/Th2细胞平衡的影响

本研究分析荔枝果肉乙酸乙酯部粗提物对小鼠细胞因子分泌的作用,进而探讨其对Th1/Th2细胞平衡的影响。将30只BALB/C小鼠随机分成对照组(生理盐水)、乙酸乙酯部粗提物低剂量和高剂量组(4.6、9.2 mg/kg.bw.d),连续灌胃7 d,观察各组小鼠的胸腺和脾脏指数变化以及脾细胞增殖情况,用ELISA检测小鼠脾细胞以及血清分泌IFN-γ和IL-4的含量以及IFN-γ/IL-4比值。实验结果表明:乙酸乙酯部粗提物高剂量组小鼠的胸腺指数、脾脏指数显著提高。乙酸乙酯部粗提物低、高剂量都能显著提高小鼠脾细胞和血清IFN-γ分泌水平,同时,高剂量组小鼠脾细胞和血清IL-4的分泌水平也显著提高。低、高剂量的乙酸乙酯部粗提物都能显著提高小鼠脾细胞和血清IFN-γ/IL-4的比值。荔枝果肉乙酸乙酯部粗提物诱导Thl/Th2平衡向Th1方向漂移,可能进而诱导机体的炎症性反应。     

卵转铁蛋白对免疫低下小鼠Th1/Th2细胞平衡的影响

目的:研究卵转铁蛋白(OVT)对免疫低下模型小鼠的免疫平衡恢复作用。方法:将健康小鼠随机分为正常对照组、模型对照组及OVT高剂量组、中剂量组和低剂量组,每组10只。OVT高、中、低剂量组分别以10、1、0.1mg/mL的OVT溶液每天灌胃,灌胃量为20mL/(kg.d)(以体质量计)。模型组对照组和正常对照组灌胃生理盐水20mL/(kg.d)。连续灌胃15d,于第15天灌胃后注射环磷酰胺(正常对照组除外),继续灌胃至第19天(由模型决定)进行检测。测定血清中IFN-γ和IL-4含量、IFN-γ/IL-4比值以及脾脏和胸腺指数。结果:模型对照组小鼠血清IFN-γ的浓度和IFN-γ/IL-4比值与正常对照组相比明显降低(P<0.01);高剂量组小鼠血清IFN-γ的浓度和IFN-γ/IL-4比值显著高于模型对照组(P<0.01),与正常对照组比较,无显著性差异;高剂量组的脾脏指数和胸腺指数与模型对照组相比明显提高(P<0.01)。结论:OVT能修复由环磷酰胺所致免疫低下模型小鼠的体液和细胞免疫失衡,增强免疫低下小鼠的免疫功能。     

乳铁蛋白对环磷酰胺所致小鼠免疫失衡的保护作用

探讨乳铁蛋白对环磷酰胺所致小鼠免疫失衡的保护作用。Balb/c小鼠随机分为6组,正常对照组,模型对照组,乳铁蛋白组(5、25、50、500 mg/kg)。连续灌胃给药27 d,第27天给药后除正常对照组外,其他小鼠均腹腔注射环磷酰胺80 mg/kg,继续灌胃至第30天,末次给药24 h后,放射免疫分析方法测定各组小鼠外周血CD4+T、CD8+T细胞。酶联免疫分析方法检测血清细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4,IL-10的变化。与正常对照组相比,模型小鼠外周血CD4+T、CD8+T百分率明显增加;血清IFN-γ明显降低(p<0.01),IL-4明显增高(p<0.05),IFN-γ/IL-4比值明显下降(p<0.01);乳铁蛋白25、50、500 mg小鼠外周血CD4+T、CD8+T细胞百分率明显降低(P<0.01或P<0.05)。乳铁蛋白500 mg组小鼠血清IFN-γ较模型组明显增高(p<0.05),乳铁蛋白50、500 mg小鼠血清IFN-γ/IL-4比值趋于正常。乳铁蛋白能不同程度修复环磷酰胺所致小鼠免疫失衡状态,具有免疫保护作用。     

不同时段嗜酸乳杆菌干预对β-乳球蛋白过敏缓解的作用

目的:分析和比较嗜酸乳杆菌预防和治疗β-乳球蛋白过敏的作用和效果,为抗过敏性能益生菌的使用提供科学依据。方法:BALB/c小鼠随机分为空白组、β-乳球蛋白过敏组、嗜酸乳杆菌预防组和嗜酸乳杆菌治疗组。建模结束后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组小鼠血清中IgE及Thl/Th2型细胞因子(IL-12、IFN-γ、IL-4)的含量;RT-PCR法检测脾脏中T-bet和GATA-3 mRNA的表达量。结果:嗜酸乳杆菌干预可有效缓解β-乳球蛋白过敏,与过敏组小鼠比较,其血清总IgE和特异性IgE水平明显降低(P0.05),IFN-γ、IL-12含量及T-bet mRNA表达量显著增加,IL-4含量及GATA-3 mRNA表达显著降低(P0.05)。特别是嗜酸乳杆菌预防组的抗过敏效果优于治疗组,且预防组调节IFN-γ/IL-4比值(代表Thl/Th2细胞平衡)的能力显著优于治疗组(P0.05)。结论:嗜酸乳杆菌预防β-乳球蛋白过敏的效果优于其治疗效果。     

嗜酸乳杆菌对β-乳球蛋白过敏诱发Thl/Th2细胞平衡的影响

目的:观察嗜酸乳杆菌对牛乳β-乳球蛋白(BLG)致敏小鼠Th1/Th2细胞平衡及血清抗体水平的影响,以研究其缓解过敏反应的作用。方法:用牛乳BLG和弗氏佐剂的混合液腹腔注射诱发BALB/c小鼠致敏,建立动物过敏模型。将实验动物随机分为空白组、过敏组与不同剂量的嗜酸乳杆菌组。采用ELISA法测定各组小鼠血清总IgE、BLG特异性IgE和总IgG含量。体外分离培养各组小鼠脾淋巴细胞,采用ELISA法检测细胞上清液中Th1型细胞因子(IL-12、IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4)的水平。结果:中、高剂量嗜酸乳杆菌组小鼠的IFN-γ/IL-4比值(代表Th1/Th2细胞平衡)显著高于过敏组(P<0.05);而其血清中的总IgE、BLG特异性IgE和总IgG水平显著低于过敏组(P<0.05),与空白组相比无差异性(P>0.05)。结论:嗜酸乳杆菌干预可改善小鼠的BLG过敏症状,其作用可能与促进Th1占优势的Th1/Th2细胞平衡,阻断IgE及IgG分泌相关。     

卵白蛋白对变应性鼻炎小鼠模型的影响

目的研究卵白蛋白(ovalbumin, OVA)对变应性鼻炎(过敏性鼻炎)小鼠模型的影响。方法小鼠随机分为7组:对照组、高浓度OVA模型+PBS组、中浓度OVA模型+PBS组、低浓度OVA模型+PBS组、高浓度OVA+阳性药组、中浓度OVA+阳性药组、低浓度OVA+阳性药组。采用OVA全身致敏及局部攻击相结合的方法构建变应性鼻炎小鼠模型,以PBS、丙酸氟替卡松(0.008 mg/kg)滴鼻,观察小鼠鼻部抓挠、喷嚏数症状和脏器指数; ELISA法定量检测血清免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)和干扰素-γ(IFN-γ)的含量;制备脾细胞悬液对比脾细胞悬液CD4+CD25+T细胞变化。结果建模成功后,高浓度OVA+阳性药组与高浓度OVA模型+PBS组相比,血清IgE、IL-10、IL-4、IFN-γ水平和CD4+CD25+T细胞水平变化不明显,差异无统计学意义(P0.05);中、低浓度OVA+阳性药组与中、低浓度OVA模型+PBS组相比,血清IgE、IL-10和IL-4水平显著降低, CD4+CD25+T细胞水平和IFN-γ水平显著升高, IFN-γ/IL-4比值升高,差异有统计学意义(P0.001或P0.05)。结论卵白蛋白的浓度选择对变应性鼻炎模型影响较大,致敏用卵白蛋白为中浓度时对阳性药的检测效率较高。     

副干酪乳杆菌L9对卵白蛋白诱发的小鼠过敏性气道炎的调节作用

过敏性气道炎(哮喘)是一种以炎症细胞浸润,气道高反应性为特征,Th2主导气道炎症性疾病,主要是敏感人群因吸入花粉、尘螨等外界抗原而引起过敏反应。目前常见的治疗方式是糖皮质激素类药物,其副作用大,患者存在类固醇药物抗性等缺点。研究表明特定益生菌菌株具有免疫调节功能,在缓解过敏性气道炎症状等方面有着巨大的潜力。本研究采用卵白蛋白致敏小鼠急性哮喘模型,通过灌胃4.0×109CFU/d和4.0×107CFU/d活菌以及热致死副干酪乳杆菌L9,研究L9对哮喘的改善作用。结果表明:灌胃L9可以显著降低过敏性气道炎小鼠的气道高反应性,降低支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞比例(P0.05),减轻肺部中小型气道附近炎症细胞的浸润;L9通过降低小鼠血清中的总的IgE(P0.001)和IgG1(P0.05),上调血清中IgG2a(P0.05),纠正小鼠体内的系统性免疫失衡;L9降低支气管肺泡灌洗液中Th2细胞分泌的细胞因子IL-4、IL-5、IL-13的含量(P0.05),提高Th1细胞分泌的IFN-γ(P0.05)和Treg细胞相关的TGF-β(P0.05),纠正小鼠肺部的Th2/Th1免疫失衡。灌胃热致死L9同样可以显著改善哮喘,纠正系统性免疫失衡和Th2/Th1免疫失衡。结论:副干酪乳杆菌L9通过调节Th1/Th2免疫平衡减缓小时过敏性气道炎症状。     

乳源糖巨肽对小鼠IFN-γ和IL-4的调节作用

研究了乳源糖巨肽(GMP)对健康Balb、鼠IFN-γ和IL-4的调节作用,从细胞因子的角度探讨了GMP维系机体健康的机制.对健康小鼠用GMP灌胃后,分别检测一次灌胃GMP后12 h内小鼠IFN-γ,IL-4每2 h的表达量的变化和连续5 d灌胃GMP对小鼠IFN-γ、IL-4的表达量,及IFN-γ/IL-4浓度比值的变化.结果表明,一次灌胃GMP4短时间(12 h)内可促进小鼠IL-4的表达,以灌胃后第6h的增加最为显著,但对炎症细胞因子IFN-γ没有显著性影响;连续5 d灌胃GMP可促进小鼠IL-4的表达,其中第3天和第4天的变化呈显著性,对IFN-γ同样无显著性影响,因此第3天至第5天GMP组小鼠中IFN-γ/IL-4的比其他两组显著降低.本研究提示了GMP具有调节Th1/Th2失衡的功能.     

虾制品致敏性诱发豚鼠相关细胞因子及Th1/Th2细胞平衡的变化

以消减致敏性南美白对虾的虾仁、虾肉和虾蛋白为样品,以pH 7.5的磷酸盐缓冲液为阴性对照,未处理的虾蛋白为阳性对照,建立豚鼠过敏模型,研究过敏豚鼠血清中相关细胞因子与食物过敏的相关性,并推断食物过敏对辅助性T（type 1/type 2 T-helper, Th1/Th2）细胞平衡的影响。收集过敏豚鼠的血清,采用酶联免疫吸附测定法检测血清中免疫球蛋白E（immunoglobulin E,IgE）、组胺（histamine,HIS）、相关细胞因子（白细胞介素（interleukin,IL）-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor α,TNF-α）、干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）质量浓度。结果表明,用未处理的虾蛋白致敏豚鼠,用致敏性消减程度不同的虾制品（虾蛋白、虾肉、虾仁）提取的蛋白激发,消减致敏性的虾蛋白、虾肉和虾仁提取蛋白激发后豚鼠血清中IgE含量分别为（3.905±0.120）、（4.813±0.188）、（5.199±0.327）U/mL,HIS质量浓度分别为（16.437±1.120）、（19.656±1.080）、（21.071±1.732）μg/mL,激发后血清中IgE和HIS质量浓度变化与致敏性程度呈正相关,致敏性越低,血清中IgE和HIS质量浓度越低。过敏豚鼠血清中IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、TNF-α质量浓度的变化与虾制品致敏程度呈正相关;同时,与IgE和HIS质量浓度变化规律具有一致性;血清中IL-10质量浓度变化与致敏性程度呈负相关;因此,这些细胞因子与食物过敏具有很好的相关性。过敏血清中IFN-γ没有呈现规律性变化,但IFN-γ/IL-4随着致敏性的增强而减小。因此,推测虾制品激发过敏豚鼠的Th1/Th2细胞平衡向Th2细胞偏移。     

乳铁蛋白对Th1/Th2细胞平衡影响的研究进展

乳铁蛋白是一种具有多种特殊生理功能的天然铁结合蛋白。本文阐述了Th1/Th2 细胞平衡对机体免疫功能的重要性及乳铁蛋白对Th1 和Th2 细胞平衡影响的最新研究进展,并对其应用前景进行了展望。     

Modulation of Th1/Th2 balance by Lactobacillus strains isolated from Kimchi via stimulation of macrophage cell line J774A.1 in vitro

Lactobacilli isolated from Kimchi, a Korean traditional food, were tested for their capacity to modulate the T helper (Th) 1/Th2 balance. Ovalbumin (OVA)-sensitized mouse splenocytes were cultured with 26 strains of lactobacilli; the highest IL-12 induction and lowest IL-4 production were then observed in 4 strains, including Lactobacillus plantarum CJLP55, CJLP56, CJLP133, and CJLP136. These strains produced a larger amount of IL-12, which enhances differentiation and activation of Th1 cells, in macrophage cell-lines more than positive control strains L. casei KCTC 3109(T) and L. rhamnosus GG, although they also induced production of IL-10, which is a suppressor of IL-12. Indeed, CJLP133-stimulated macrophages induced production of more Th1 cytokine IFN-γ and less Th2 cytokine IL-4 than KCTC 3109(T) and GG in co-cultivation with T cells. These findings suggest that lactobacilli from Kimchi may modulate the Th1/Th2 balance via macrophage activation in the hypersensitive reaction caused by Th2 cells. PRACTICAL APPLICATION: Allergic reactions including asthma and atopy are caused by predominance of Th2 response over Th1 response. Lactobacilli isolated from fermented foods such as yogurt, cheese, and Kimchi showed health-promoting activities. The present study indicated that several lactobacilli strains from Kimchi may reduce allergic reactions through macrophage-mediated induction of Th1 response.     

Anti-inflammatory effects of 27 selected terpenoid compounds tested through modulating Th1/Th2 cytokine secretion profiles using murine primary splenocytes

This study investigated 27 selected terpenoid compounds, including 8 monoterpenoids, 7 sesqui-terpenoids, 3 di-terpenoids, 8 tri-terpenoids, and 1 tetra-terpenoid, for their Th1/Th2 immunomodulatory potential using mouse primary splenocytes. Changes in Th1 cytokines, including interleukin (IL)-2 and interferon (IFN)-γ, and Th2 cytokines, including IL-4, IL-5 and IL-10, secreted by terpenoid-treated splenocytes were measured using the ELISA method. The results showed that triptolide, a diterpenoid, was most cytotoxic, reflecting an IC₅₀ value of 46 nM. Eucalyptol, limonene, linalool, thymol, parthenolide, andrographolide, 18β-glycyrrhetinic acid, lupeol, ursolic acid and β-sitosterol showed a strong Th2-inclination and anti-inflammation potential in vitro. In addition, (−)-trans-caryophyllene, oridonin, triptolide, diosgenin, betulinic acid, escin, and β-sitosterol treatments significantly inhibited both IL-2 (Th1) and IL-10 (Th2) cytokine production at the same time, suggesting that these terpenoid compounds have an anti-inflammation potential through the inhibition of T-cell immune responses. Diosgenin treatments significantly increased IFN-γ secretion levels using mouse splenocytes, suggesting that diosgenin may be useful in treating a viral infection through the stimulation of IFN-γ production. Menthone, farnesol and oridonin treatments did not markedly increase IL-10/IL-2 (Th2/Th1) cytokine secretion ratios, suggesting that menthone, farnesol and oridonin may have a relative Th1-inclination property, compared to the other selected terpenoid compounds. The relative Th1-inclination property of menthone, farnesol and oridonin may be applied to improve Th2-skewed allergic diseases.     

Protective effect of isoquinoline alkaloid berberine on spontaneous inflammation in the spleen, liver and kidney of non-obese diabetic mice through downregulating gene expression ratios of pro-/anti-inflammatory and Th1/Th2 cytokines

This study investigated anti-inflammatory effects of berberine using non-obese diabetic (NOD) mice that spontaneously develop type 1 diabetes. The NOD mice were randomly divided into four groups, including control group (intragastric gavage with water), berberine low dose, berberine medium dose and berberine high dose groups, which were respectively administrated with 50, 150, and 500 mg berberine/kg BW through 14 weeks by consecutive tube feeding. Imprinting control region (ICR) mice were also selected as a species control group, to compare with NOD mice. Cytokine expression profiles in the spleen, liver and kidney were determined using enzyme-linked immunosorbent assay or real-time quantitative polymerase chain reaction assay. The results showed that berberine supplementation significantly (p < 0.05) decreased the expression ratios of pro-/anti-inflammatory and/or Th1/Th2 cytokines in the spleen, liver and kidney of NOD mice, suggesting that berberine supplementation alleviated spontaneous inflammation in the spleen, liver and kidney of NOD mice.     

双歧杆菌对Treg/Th17细胞平衡及中国对虾蛋白致敏性的影响

目的通过体内实验研究婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis 13.085)和雷帕霉素对中国对虾原肌球蛋白致敏BALB/c小鼠过敏反应的治疗作用,从Treg/Th17细胞平衡及相关细胞因子角度探讨其缓解过敏的免疫调节作用机制。方法将中国对虾原肌球蛋白和弗氏佐剂混合液腹腔注射诱发BALB/c小鼠致敏,建立动物过敏模型。将实验小鼠随机分为正常对照组、致敏对照组、双歧杆菌治疗组、雷帕霉素治疗组。观察分析小鼠过敏症状,采用ELISA测定小鼠血清中特异性IgE、IgG2a的含量,采用流式细胞术测定脾脏T淋巴细胞亚群(Treg、Th17)数量,采用荧光定量PCR测定脾脏中Treg型和Th17型细胞因子和转录因子的表达量。结果第56天实验周期结束后结果发现,相比于致敏对照组,双歧杆菌和雷帕霉素治疗组小鼠过敏症状有明显的缓解,血清中特异性IgE显著降低(P0.05),脾脏Treg/Th17比值显著升高(P0.05),Th17型细胞因子IL-17A m RNA表达水平显著降低,Treg型细胞因子Foxp3 m RNA表达水平显著升高。此外,不同剂量的雷帕霉素治疗组缓解过敏反应存在剂量差异性。结论双歧杆菌13.085和雷帕霉素能有效缓解小鼠过敏症状,其作用可能通过平衡Treg/Th17细胞亚群数量,促进Treg型细胞因子表达而抑制Th17型细胞因子分泌有关。