硫酸软骨素含量测定法的说明与探讨

根据中华人民共和国卫生部药品标准,硫酸软骨素系自猪的喉骨、鼻中骨、气管等软骨组织提取制得的酸性粘多糖,按干燥品计算,含氨基己糖以氨基葡萄糖计算,应不得少于24.0％。这种生化药物硫酸软骨素是以硫酸软骨素A和硫酸软骨素C为主的各种硫酸软骨素的混合物。硫酸软骨素A和C都含D葡萄糖醛酸和2-氨基-2脱氧-D-半乳糖,且含等量的乙酰基和硫酸基,     

USP34标准——硫酸软骨素钠

软骨素,硫酸氢,钠盐[9082-07-9]。硫酸软骨素钠是从牛、猪、禽等家畜软骨组织中提取制得的硫酸化线形糖胺聚糖钠盐。主要由N-乙酰半乳糖胺(2-乙酰胺-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖)和D-葡糖醛酸的共聚物的硫酸酯钠盐组成,共聚物内己糖通过β-1,4及β-1,3糖苷键交替连接。在普遍的糖胺聚糖中,半乳糖胺部分主要为4-位单硫酸盐,较少为6-位。按干燥品计算,含硫酸软骨素     

硫酸软骨素在药品和保健食品中的应用

根据近年来硫酸软骨素(chondroitin sulfate)的相关研究和应用资料,对其在药品和保健食品中的应用进行概述。1 硫酸软骨素简介 硫酸软骨素是广泛存在于人和动物软骨组织中的一类黏多糖,主要由动物喉骨、鼻中隔、气管等软骨组织分离纯化而得。其结构是由D—葡糖醛酸与2—乙酰氨基—2—脱氧—硫酸—D—半乳糖组成。其分子约含50～70个双糖基本单位,分子量为1万～5万。根据结构中硫酸基的位置不同,主要有两种异构体。若分子中半乳糖上的硫酸基在4位上,称为硫酸软骨素A或4—硫酸软骨素;如果分子中半乳糖上的硫酸基     

不同硫酸软骨素对口腔癌KB细胞的抑制作用

以鲟鱼软骨和鸡软骨为原料,采用碱提-酶解-醇沉的工艺流程提取硫酸软骨素后,利用Sephadex G-50凝胶色谱及Sephacryl S-300 HR凝胶色谱对硫酸软骨素进行纯化,并通过高效凝胶渗透色谱法进行分子质量测定与纯度鉴定。采用MTT法检测硫酸软骨素对口腔癌KB细胞增殖活性的影响,并采用流式细胞术检测口腔癌KB细胞凋亡情况。研究结果表明鲟鱼及鸡软骨硫酸软骨素粗制品得率分别为23.80%和25.23%。经高效液相凝胶渗透色谱分析可得纯化的鲟鱼及鸡软骨硫酸软骨素均为高纯度多糖,且鲟鱼软骨硫酸软骨素的平均分子量比鸡软骨硫酸软骨素的大。以体外抗肿瘤的方法研究硫酸软骨素粗提物和纯化样品对口腔癌KB细胞的抑制作用,结果所得鲟鱼软骨硫酸软骨素粗制品和纯化样品的IC50值分别为80.18μg/m L和58.78μg/m L;鸡软骨硫酸软骨素粗制品和纯化样品的IC50值分别为68.55μg/m L和53.71μg/m L。流式细胞术表明硫酸软骨素能够诱导KB细胞发生凋亡,细胞凋亡率与药物的浓度呈剂量依赖关系,且鸡软骨硫酸软骨素诱导KB细胞凋亡率高于鲟鱼软骨硫酸软骨素。     

酶法提取人工养殖鲟鱼头中硫酸软骨素的工艺研究

旨在建立用酶法从鲟鱼头软骨中提取硫酸软骨素的工艺,采用胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的共同酶解,得到硫酸软骨素。通过单因素实验和正交实验研究,结果表明:木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶提取鲟鱼头软骨中硫酸软骨素的最佳工艺为:酶量1.00%(10mg酶/1g软骨粉),提取时间为48h,固/液比为1:14。在此条件下,硫酸软骨素的提取率为47.95%,其葡萄糖醛酸含量为33.86%,硫酸软骨素含量为95.78%,杂质蛋白含量分别为0.89%。另外对硫酸软骨素还进行了IR和UV分析。     

鱿鱼硫酸软骨素糖蛋白的分离纯化和鉴定

目的:研究鱿鱼软骨硫酸软骨素的主要成分.方法:以鱿鱼喉软骨为材料,经提取、分离和纯化等步骤得到一酸性粘多糖组分C-S2:用高效凝胶过滤色谱和比旋光度鉴定其纯度,并用化学和光谱法研究其组成和结构.结果:C-S2为均一性较好的粘多糖,为硫酸软骨素C糖蛋白,其重均相对分子质量(Mw)149 595,比旋光度-25.3.软骨素含量95.31%,蛋白含量2.59%,葡萄糖醛酸(GlcA)含量35.02%,己糖胺含量34.02%,总硫酸基含量9.54%,并存在少量中性单耱,由鼠李糖(Rha)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glu)和半乳糖(Gal)组成;β-消去反应说明C-S2中糖链以O-糖肽键连接到苏氨酸上.结论:鱿鱼软骨硫酸软骨素的主要成分为硫酸软骨素C糖蛋白.     

鸡软骨中硫酸软骨素的分离纯化

以鸡软骨为原料,对酶法提取硫酸软骨素进行纯化工艺的研究,采用阴离子交换树脂和凝胶层析法对提取的硫酸软骨素粗品进行纯化。结果表明:D218型阴离子交换树脂纯化硫酸软骨素最佳工艺条件为,吸附液用量与树脂体积比为1∶1;吸附流速为1.0m L/min;吸附时间为60 min;洗脱剂Na Cl溶液的浓度为3.0mol/L;洗脱剂用量与树脂体积比为5∶1,最佳解析时间为75 min,硫酸软骨素纯度为72.03%。通过葡聚糖凝胶G-75纯化后得到的硫酸软骨素的纯度为99.30%,较第一次纯化提高了27.27%。通过高效液相色谱法对纯化后的物质进行检测,进一步证明从鸡软骨中提取的物质为CS。     

鲟鱼软骨硫酸软骨素降解产物的结构分析

以鲟鱼软骨为原料,采取碱提-酶解-醇沉的方式提取硫酸软骨素后,采用普通粉碎、超微粉碎联合辐照技术分别对硫酸软骨素样品进行降解后,再利用离子色谱法、紫外-可见光光谱扫描法、红外吸收光谱法、核磁共振波谱法研究硫酸软骨素的化学结构。单糖分析表明,粗样中的鼠李糖经超微粉碎加辐照共处理后含量从56.16%增加到59.31%,粗样中的葡萄糖醛酸经超微粉碎加辐照共处理后含量由33.69%降低到31.84%;而纯化样品中葡萄糖醛酸含88.77%。紫外光谱分析表明硫酸软骨素经超微粉碎与辐照的共处理方式使硫酸软骨素的分子结构发生断裂即糖苷键的分裂及产生C=O基团。红外光谱结果表明普通粉碎及经超微和辐照降解共处理的硫酸软骨素均呈现4-硫酸软骨素和6-硫酸软骨素的典型特征。核磁共振分析得出经超微粉碎和辐照的处理使硫酸软骨素上的乙酰半乳糖胺和葡萄糖质子信号增强,且推测鲟鱼硫酸软骨素包含GlcA (β1→3) GalNAc-4SO3和GlcA (β1→3) GalNAc-6SO3重复单元结构。     

二次回归正交旋转组合设计优化羊软骨硫酸软骨素提取工艺

为提高羊软骨硫酸软骨素的得率,采用二次回归正交旋转组合设计对羊软骨硫酸软骨素碱-酶法提取工艺进行了优化,研究了料液比、碱提时间、碱提温度及碱液浓度对硫酸软骨素得率的影响。结果表明,各因素对硫酸软骨素得率影响的顺序为碱提温度>碱液浓度>碱提时间>料液比。在料液比1:6.5、碱提时间2h、碱提温度35℃、碱液浓度7%的条件下,硫酸软骨素得率最高可达12.43%,验证值为12.65%,与理论值基本一致。     

猪鼻软骨硫酸软骨素双酶法提取初探

采用双酶法,通过不同种类的酶、不同添加量、不同料液比提取猪鼻软骨中的硫酸软骨素,综合对比,分析不同种类酶对硫酸软骨素提取的影响。结果表明,猪鼻软骨硫酸软骨素提取最佳工艺为:料液比1:1.5,第1类酶使用碱性蛋白酶,用量为2.5%,第2类酶(胰酶)用量为1.2%,成品收率达到16.740%。     

同时测定软骨酶解物中硫酸软骨素及透明质酸含量的高效液相色谱法的建立

为了准确快速同时测定软骨酶解物中硫酸软骨素和透明质酸含量，以半乳糖胺和葡萄糖胺为测定目标物，通过优化色谱条件和方法性试验，建立了一种高效液相色谱的测定方法。使用ZORBAX C18柱分离，用乙腈和乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱，流速为1.00 mL/min，在波长250 nm下测定。方法性试验表明，硫酸软骨素和透明质酸的质量浓度在100~500 mg/L范围与峰面积线性关系良好，其中硫酸软骨素的检出限为0.948 mg/L，重复性偏差0.089%，平均回收率99.71%，相对偏差0.35%；透明质酸的检出限为0.027 mg/L，重复性偏差0.045%，平均回收率97.74%，相对偏差0.92%。与传统方法相比，该法具有受杂质干扰影响小，准确度高，重复性优异，回收率以及精确度高的优势，可以实现准确快速同时测定软骨酶解物中硫酸软骨素和透明质酸的含量。     

鸡胸软骨糖/肽水解物的结构表征及其抗炎活性

本研究从鸡胸软骨水解物中分离得到胶原蛋白肽和硫酸软骨素并对其进行了结构表征和抗炎活性研究。胶原蛋白肽和硫酸软骨素得率分别为68.32%和18.82%(以干重计)。氨基酸分析表明胶原蛋白肽中甘氨酸含量最高,达14.05 mg/g,其次为谷氨酸(9.09mg/g)和脯氨酸(7.44 mg/g);紫外光谱分析与圆二色性结果显示所提取样品符合胶原蛋白肽的典型特征;通过高效液相色谱分析发现92.38%的胶原蛋白肽分子量小于1000u。傅里叶红外光谱、琼脂糖凝胶电泳、二糖组成分析结果表明提取的硫酸软骨素主要由硫酸软骨素A组成,相对纯度为91.87%。通过建立关节炎大鼠模型并检测糖/肽水解物对炎症因子TNF-α、IL-1β、PGE-2水平影响,与模型组相比(TNF-α39.90 pg/mL、IL-1β22.38 pg/mL、PGE-2 89.41 pg/mL),灌胃软骨水解物、胶原蛋白肽和硫酸软骨素能显著降低关节炎大鼠TNF-α、IL-1β、PGE-2水平(p0.05)。本实验结果表明,使用软骨水解物、胶原蛋白肽和硫酸软骨素能够抑制炎症因子TNF-α、IL-1β、PGE-2水平,减轻关节炎大鼠炎症反应。     

不同来源和制备工艺硫酸软骨素的二糖分析

从猪、牛、鸡、鸭和鲨鱼软骨中提取分离硫酸软骨素,采用酶解-高效液相色谱法对不同来源和制备工艺获得的硫酸软骨素进行了二糖分析。结果表明,来源于猪、牛、鸡和鸭软骨的硫酸软骨素由非硫酸化二糖、4-硫酸化二糖和6-硫酸化二糖组成,而来源于鲨鱼软骨的硫酸软骨素还含有2, 6-硫酸化二糖、2, 4-硫酸化二糖和4, 6-硫酸化二糖,且各二糖单位的百分含量也不同;高温、强酸、强碱及双氧水的强氧化性均可降低硫酸软骨素中硫酸化二糖的百分含量。说明硫酸软骨素的组成与其来源和制备工艺密切相关,实际生产中可根据不同需求来选择合适的原料和制备工艺。     

保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定

正目的:建立氨糖软骨素类保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素含量测定的方法。方法:采用高效液相色谱法测定氨糖软骨素类保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量。结果:硫酸软骨素浓度在13.01~260.2μg/mL范围内呈良好的线性关系,盐酸氨基葡萄糖浓度在15.05~301.0μg/mL内呈良好的线性关系。结论:本方法简单、灵敏、快速、准确,可以用于氨糖类保健食品中盐酸氨基葡萄糖和硫酸软骨素的测定。     

猪肺管硫酸软骨素的提取分离与抗氧化活性研究

首先比较稀碱、全酶和稀碱-酶法结合提取猪肺管硫酸软骨素的工艺,探究猪肺管硫酸软骨素的最大得率,再采用乙醇沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱层析和Sephadex G-75分离纯化得到高纯度硫酸软骨素,然后采用紫外光谱、红外光谱和核磁共振技术对其进行结构鉴定,最后探讨其抗氧化活性。结果发现,全酶法提取硫酸软骨素得率最高,得率为22.10%。纯化后,97%纯度的硫酸软骨素得率28g/100g粗品。光谱、核磁共振和抗氧化数据显示,该硫酸软骨素结构与鸡胸软骨和猪喉软骨硫酸软骨素的结构和抗氧化活性相似。因此,猪肺气管软骨可以作为硫酸软骨素的优质大宗提取资源。     

响应曲面法优化硫酸软骨素提取工艺条件

采用鸡胸软骨为原料,以硫酸软骨素得率为指标,对超声波辅助碱-酶法提取硫酸软骨素的工艺条件进行研究。首先,通过单因素实验确定了各因素的范围,再应用Box-Behnken中心组合实验设计建立二次多项数学模型,进行响应面分析。结果表明,超声波辅助碱-酶法提取鸡软骨中硫酸软骨素的最佳工艺条件为:碱浓度4%,酶添加量1.4g/L,料液比1000∶5923(g/mL),数据结果显著,硫酸软骨素得率为23.94%,通过紫外光谱检测确定提取物质为硫酸软骨素。     

秘鲁巨鱿软骨硫酸软骨素理化性质研究

探索一种新的硫酸软骨素来源。以秘鲁巨鱿软骨为原料,经过酶解、超滤浓缩和乙醇沉淀的方法获得硫酸软骨素。秘鲁巨鱿硫酸软骨素得率为3.2%,比旋度为-25.2°,黏均分子量为157 000,硫酸软骨素E型二糖占总二糖比例的17%。秘鲁巨鱿软骨可以作为一种硫酸软骨素新原料。     

美味猕猴桃根正丁醇提取物对小鼠急性肝损伤的保护作用

为研究美味猕猴桃根正丁醇提取物（BEAD）对四氯化碳（CCl4）、D-半乳糖胺致肝损伤小鼠血浆转氨酶活性的影响。采用CCl4、D-半乳糖胺灌胃建立小鼠实验性肝损伤模型，以不同剂量BEAD和阳性对照药联苯双酯灌胃治疗，测定小鼠血浆中丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）活性。结果表明不同剂量BEAD对CCl4、D-半乳糖胺造成的小鼠急性肝损伤ALT、AST活性升高具有降低作用，BEAD中、高剂量能显著降低ALT、AST的含量，与模型对照组相比，P〈0．01。说明BEAD中高剂量对小鼠急性肝损伤具有保护作用。     

鸡胸软骨硫酸软骨素的制备及其稳定性研究

采用木瓜蛋白酶水解法从鸡胸软骨中提取硫酸软骨素粗多糖,并用三氯乙酸除蛋白、乙醇沉淀和柱色谱分离纯化得到高纯度产品。以硫酸软骨素主要成分(总糖、还原糖、葡萄糖醛酸、游离硫酸根)及相对黏度为指标,研究热、酸碱、氧化剂处理对硫酸软骨素稳定性的影响及紫外光照射对其结构的影响。研究结果表明,经紫外光照射后,硫酸软骨素结构基本无变化;在温度低于80℃,pH=7时,硫酸软骨素稳定性较好。温度大于100℃、强酸、强碱或含有氧化剂时,硫酸软骨素极不稳定,各成分变化程度较大,游离硫酸根增加,分子量降低。但对于其降解机理,需做进一步研究。     

鲟龙鱼硫酸软骨素提取工艺优化研究

利用响应曲面法优化提取西伯利亚鲟龙鱼软骨组织提取硫酸软骨素的工艺条件。研究了碱浓度、沉淀时间、乙醇体积对硫酸软骨素提取率的影响,在单因素实验基础上采用Box-Behnken中心组合实验,以碱质量浓度、沉淀时间、乙醇体积为影响因素,以提取率为响应值建立二元多次方程,通过响应面分析法得到优化组合。结果表明,最佳工艺条件为:Na OH 0.5mol/L、乙醇体积1倍、沉淀时间20min,提取得硫酸软骨素产率为57.21%,预测值产率为59.31%。