不同碳源诱导绿色木霉产双功能酶的表达差异分析

采用酶活力分析、SDS-PAGE、RT-PCR等手段对不同碳源诱导Trichodrma viride XW01产双功能酶的差异表达进行分析。结果表明,酶的合成受培养基中碳源的影响。绿色木霉在不溶性多糖类独立碳源诱导条件下对双功能酶CCBE(66kDa)的合成量要优于可溶性碳源;其中羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为碳源时发酵液中壳聚糖酶活力最高,发酵96d后活力达8.29U/mL;壳聚糖次之,麸皮再次之;3种碳源均直接诱导绿色木霉产壳聚糖酶,以CBHE为主;微晶纤维素不能直接诱导产生壳聚糖酶,而是通过其水解产物间接诱导绿色木霉产生壳聚糖酶,发酵液中CBHE所占比例较低,组分中壳聚糖酶CCBEⅡ(52kDa)和Csn(45kDa)含量较高;且绿色木霉两种酶活力的合成和表达调节并不是协同发生的。可溶性淀粉和乳糖为碳源时,绿色木霉生长迅速,但是基本上不产双功能酶。     

绿色木霉复合木聚糖酶的固态发酵条件优化

目的研究不同发酵条件对绿色木霉产复合木聚糖酶性能的影响。方法采用固体发酵培养方式,通过改变发酵条件,包括碳源、氮源的种类、浓度及接种量,测定相应条件下发酵产物的酶活性来确定发酵工艺。结果绿色木霉产酶的最佳碳源为玉米芯和麸皮(4∶6);氮源为硫酸铵(4%);接种量为1×107个孢子/g培养基。30℃固体培养70h,发酵后用无菌水(pH5.0)28℃浸提3h测定酶活性。结论在优化的培养条件下,木聚糖酶的最高酶活性达到267U/g。     

一株海洋细菌产几丁质酶培养条件研究

从海洋环境中筛选出1株产几丁质酶细菌B-25。进行不同碳源、氮源、温度、pH值等对B-25菌株发酵产生几丁质酶的影响试验,研究几丁质酶的培养条件。该菌株产酶最佳碳源为甘露醇,最佳氮源为蛋白胨,通过培养条件优化,该菌株酶活力达到0.43U/mL,较始发菌株提高了4.9倍。     

三株产几丁质酶菌株的筛选、产酶条件优化及水解虾壳的研究

目的:筛选鉴定产几丁质酶的菌株并优化其发酵条件,最终应用于虾壳降解研究。方法:以盐城市滩涂海泥为样品,利用平板筛选水解几丁质的菌株,运用生物信息学方法鉴定菌株,通过单因素优化其发酵条件,并将筛选得到的菌株和优化后的发酵条件用于虾壳发酵。结果:鉴定得到三株显著降解胶体几丁质的菌,分别是发光杆菌（Photobacterium sp. LYM-1）、需钠弧菌（Vibrio sp. WM-1）和希瓦氏菌（Shewanella sp. ZXY-1）;优化发酵条件:发光杆菌的碳源为几丁质10 g/L,氮源为NH₄Cl 2.0 g/L,接种量为3%,发酵液pH为6.5,温度为32 ℃,发酵1 d酶活最高为15.37±0.55 U/mL,是优化前的4.37倍;需钠弧菌的碳源为几丁质10 g/L,氮源为NH₄Cl 2.0 g/L,接种量为3%,发酵液pH为7.5,温度为22 ℃,发酵2 d酶活最高为40.82±6.03 U/mL,是优化前的1.60倍;希瓦氏菌的碳源为几丁质10 g/L,氮源为(NH₄)₂SO₄ 2.0 g/L,接种量为3%,发酵液pH为6.5,温度为22 ℃,发酵1 d酶活最高为25.64±3.29 U/mL,是优化前的2.47倍;三株菌均能利用虾壳产几丁质酶,但利用效率均低于几丁质,酶活力分别为10.25±0.95、32.16±2.25和21.81±4.27 U/mL。结论:本研究从盐碱地筛选得到三株产几丁质酶的菌株,优化后酶活力均得到提高,且均能利用虾壳产几丁质酶,为发酵虾壳制备几丁质酶提供新的菌株来源。     

绿色木霉发酵条件的优化

由于绿色木霉的广泛适应性、拮抗的多样性和寄生的广谱性,它是一种很有潜力的生防菌.木霉菌主要通过拮抗作用、竞争作用、重寄生作用、促生作用、溶菌作用等作用机制抑制病原菌的生长.本实验通过研究绿色木霉的最适发酵条件,从中找出合理的发酵条件用于工业化生产.不同的发酵条件会影响绿色木霉的抑菌效果.本实验研究了不同碳源、氮源、初始pH值、接种量、装样量、发酵天数等因素对木霉菌抑菌效果的影响.通过测定不同培养条件下绿色木霉的抑菌率,结果表明,碳源、氮源和pH等对绿色木霉的抑菌效果有明显影响.绿色木霉菌的最适碳源、氮源分别为3.0%葡萄糖和0.2%硫酸铵,在初始pH为6.0,接种量为6%,培养基装样为在250mL三角瓶中60mL装瓶量,和发酵周期为5天时,抑菌效果最佳.本研究结果为高效率、低成本、工业化生产具有生防作用的绿色木霉制剂提供了科学依据.     

在黑果腺肋花楸中共发酵里氏木霉和绿色木霉生产木聚糖酶

木聚糖酶在造纸、酿酒等方面有广泛的应用。为了获得低成本高活力的木聚糖酶，以黑果腺肋花楸作为主要培养基原料，通过单因素试验和正交试验，探索里氏木霉和绿色木霉共发酵生产木聚糖酶的培养条件。结果表明，木聚糖酶活性最高的培养条件为氮源(NH₄NO₃)质量浓度0.5 g/L,果渣质量分数25%,里氏木霉与绿色木霉的质量比3∶2,接种质量分数14%,pH 5.50,培养到第4天时，其木聚糖酶活性高达121.62 U/mL。同时还探究了无机离子添加量对木聚糖酶活性的影响，无机离子的最佳添加量是MgSO₄ 12 mg/L和MnSO₄ 1.4 mg/L。结合正交试验的最佳培养条件以及最佳无机离子添加量进行发酵后，木聚糖酶的活性高达(127.25±0.09) U/mL,与基础培养基相比，木聚糖酶产量增加了69.46%。使用里氏木霉和绿色木霉共发酵黑果腺肋花楸生产木聚糖酶在获得了高活性木聚糖酶的同时降低了成本，对木聚糖酶工业化生产有重要参考价值。     

不同碳源诱导康氏木霉产纤维素酶的研究

以不同碳源发酵培养康氏木霉,定时测定粗酶液的纤维素酶活:结合mRNA分析,提取诱导培养的菌体总RNA,进行RT-PCR扩增纤维素酶系的主要基因.结果显示,以微晶纤维素为碳源直接诱导培养康氏木霉3d,纤维素酶活力最高,CMC酶活达到17.58U/mL,P-NPC酶活达到11.39 U/mL,FPA酶活达到1.68U/mL;菌体的RNA进行RT-PCR能够较为稳定的扩增出纤维素酶系的主要基因CBH Ⅰ、CBH Ⅱ、EG Ⅰ、BG Ⅰ,推测结构相对完整的纤维类物质微晶纤维素对康氏木霉产纤维素酶诱导活性较高.表明纤维素酶合成的调节发生于预翻译水平,加入诱导物后引起纤维素酶基因转录表达,酶合成和表达调节是协同发生的.     

一株绿色木霉产纤维素酶摇瓶发酵条件优化研究

本文研究了利用纤维素刚果红分离培养基从废纸液里筛选出一株纤维素酶高产菌株,经鉴定为绿色木霉。同时对绿色木霉摇瓶发酵产酶进行了条件优化,实验结果表明其最佳发酵条件为:碳源纤维素粉:麸皮为12g∶8g;氮源(NH4)2SO4:玉米浆:豆饼粉为2g∶2g∶1g;起始pH2.5;接种量8%;转速200r/min;乳糖诱导添加量0.2%;发酵时间4d。在最佳产酶条件下CMCA酶活达到735.06U/mL,比未优化条件下酶活234.21U/mL提高了213.8%。     

绿色木霉发酵生产纤维素酶及其降解壳聚糖的初步研究

目的:对绿色木霉发酵生产纤维素酶的最优化培养条件及其降解壳聚糖的条件进行研究.方法:以纤维素酶的活力和壳聚糖的黏度为指标,对各种影响因素进行优化.结果:发酵培养基中的碳源和氮源对绿色木霉产纤维素有较大的影响,其最佳碳源为1.5％的葡萄糖,最佳氮源为0.3％的硫酸铵;最佳pH 5.0,最佳温度30℃,最佳接种量10％;纤维素酶降解壳聚糖的最佳反应条件:温度50℃,pH 5.6,反应时间6h.结论:纤维素酶具有良好的降解壳聚糖的能力.     

响应面法优化根霉菌产麦角固醇的液体发酵工艺

以米根霉(Rhizopus oryzae ZW017)发酵产麦角固醇的产量为响应值,对其液体发酵工艺进行优化。采用HPLC法检测菌株产麦角固醇含量,在单因素筛选试验基础上,以PDB液体发酵培养为基础条件,应用响应面分析法(RSM)对碳源、氮源及发酵时间进行优化。结果表明:以葡萄糖、酵母膏分别为最佳碳、氮源;最佳工艺条件为:PDB基础培养基中添加葡萄糖3g/L、酵母膏5g/L、发酵培养9.64d,麦角固醇平均产量达5761.83μg/100mL,较优化前提高了247.86%,与构建模型理论预测值(5818.39μg/100mL)相吻合,且100mL液体培养基中麦角固醇产量占菌体细胞干质量(0.36g)的1.60%。     

链霉菌9-1-1产几丁质酶的发酵条件研究

从烟草根际土样中分离、筛选得到1株几丁质酶活性比较高的链霉菌9-1-1,为评价该菌株利用价值,对其发酵条件(碳源、氮源、初始pH、表面活性剂及发酵时间)进行了研究.结果表明:该菌株的最佳发酵条件以1%胶体几丁质为碳源,发酵液初始pH值为6.5,以1%蛋白胨为氮源,0.1%吐温80作为表面活性剂,发酵时间为96 h,接种量为1%,最高酶活达到56 U/mL.     

高产几丁质酶菌株的诱变选育及发酵条件的优化

以粘质沙雷氏菌G3-1为出发菌株,通过紫外-LiCl和微波-LiCl两轮复合诱变,得到一株产酶能力高且遗传稳定的突变株GF-21,通过单因素实验和正交实验对突变株GF-21的发酵培养基和发酵条件进行优化。结果表明,最优发酵培养基成分为:乳糖6 g/L,尿素10 g/L,KCl 1.0 mmol/L,NaCl 5 g/L,胶体几丁质10 g/L,此时,几丁质酶活力为4.73 U/mL,比优化前提高了109.3%,较出发菌株提高了470%;最优发酵条件为:培养基初始pH9.0,温度30 ℃,摇床转速220 r/min,接种龄5 h,接种量10%。本文为几丁质酶的生产应用奠定了良好的基础。     

酸橙内生菌Bacillus thuringiensis Bt028产几丁质酶的发酵条件优化

为了提高分离自酸橙果实中的一株内生细菌Bacillus thuringiensis Bt028产几丁质酶的性能。采用单因素实验方法考察了培养基组成和发酵条件对该菌株产几丁质酶的影响,并在此基础上采用响应面方法对该菌株产几丁质酶的摇瓶发酵条件进行了优化。单因素实验结果表明胶体几丁质浓度、培养温度和初始pH对该菌株产几丁质酶影响明显;响应面试验结果表明,当胶体几丁质浓度为0.8%、酵母粉浓度为1%、初始pH为6.9、接种量3%、装液量为100 mL/250 mL、30 ℃培养48 h时,该菌株产几丁质酶性能最佳,发酵液中几丁质酶酶活可达10.48 U/mL。研究结果为该菌株几丁质酶的进一步开发与应用奠定了基础。     

产低温几丁质酶菌株的筛选、鉴定与产酶条件优化

目的:筛选产低温几丁质酶菌株,并对其进行鉴定及发酵条件优化。方法:本实验以渤海海域海泥为样品,以胶体几丁质为唯一碳源,通过平板筛选法筛选产低温几丁质酶细菌,对其进行形态学鉴定和分子生物学鉴定,并对其发酵产酶条件进行了单因素优化。结果:菌株鉴定结果为发光杆菌(Photobacterium sp.),单因素优化结果为:胶体几丁质12.0 g/L、酵母膏6.0 g/L、发酵温度15 ℃、初始pH7.0、转速为220 r/min、装液量75 mL/250 mL、接种量1%、发酵时间96 h,酶活力达4.566 U/mL,比优化前提高389.91%。结论:为下一步酶学性质研究及低温几丁质酶在工业中的应用提供参考。     

发光杆菌产几丁质酶的工艺优化

为提高海洋发光杆菌Photobacterium sp.LG-1产低温几丁质酶的酶活性,利用响应面法对其发酵产酶条件进行了优化。Plackett-Burman实验结果表明,影响菌株产酶的三个主要因素分别为发酵温度、发酵时间和酵母膏含量。菌株产酶的最适条件为:胶体几丁质浓度12.0 g/L、酵母膏浓度4.5 g/L、转速220 r/min、发酵温度20℃、装液量75 mL/250 mL、接种量1%、初始pH7.0、发酵时间120 h,几丁质酶的最大酶活为5.10 U/mL。实际平均酶活经验证与预测酶活相近,几丁质酶活比优化前提高了11.50%。为下一步低温几丁质酶的降解机制研究及在工业中的应用提供参考。     

产几丁质降解酶菌株的筛选及其产酶条件

采用平板透明圈法从土壤中分离筛选到一株产几丁质降解酶菌株L12酶活力为0．63U／mL。通过产酶条件优化，初步确定了该菌株较适产酶培养基和摇瓶发酵条件。条件优化后酶活力提高约1．6倍，达到1．06U／mL。     

培养基影响大肠杆菌产L-天冬酰胺酶的研究

研究培养基的成分及添加量对大肠杆菌产生抗癌药物-L-天冬酰胺酶的影响.通过对大肠杆菌培养基中碳源、氮源以及微量元素的讨论,得知该菌株以蔗糖为碳源,添加量为0.7%,以0.5%牛肉膏 1.0%蛋白胨为氮源,添加0.01%的硫酸亚铁为微量元素,所产L-天冬酰胺酶的比酶活达到352.54 U/g,相比基本培养基培养提高了31%.     

发酵蛹虫草菌丝体胞外几丁质酶活性研究

胞外几丁质酶等多种水解酶系在虫草侵染宿主的过程中发挥着重要的作用,增强酶活对于提高虫草子实体人工培养的成功率有着重要的意义。文中研究考查了多种碳、氮源、初始培养基pH值和培养时间对于液态培养的蛹虫草菌丝体胞外几丁质酶活性的影响。结果表明,几丁质酶的活性主要取决于碳源,几丁质对几丁质酶的诱导合成十分重要,其中以1%胶状几丁质最佳。当培养基中不存在几丁质、细胞优先利用其它营养物质或存在酶解产物阻遏时,酶的合成就会被抑制。最终确定的优化培养基以2%胶状几丁质为碳源,0.1%酵母膏为氮源,初始培养基pH值6.0;培养时间5d,此时胞外几丁质酶的活性为12.0mU/mL以上。     

曲霉T3-5-1产单宁酶培养条件优化

以通过60Co 诱变得到的曲霉T3-5-1 为实验菌株,通过单因素与正交试验,对其产单宁酶的条件进行研究。结果表明：以β- 环糊精为碳源、蛋白胨为氮源、培养基初始pH 值为5.5、单宁酸质量分数为3.5%、接菌量为5%、摇瓶培养转速120r/min、250mL 三角锥瓶中装液50mL 培养基、培养温度30℃的培养条件为曲霉T3-5-1 的最佳产单宁酶条件。在此条件下,曲霉T3-5-1 产单宁酶比活力达到202.16U/mL,比优化前提高约4 倍。