菹草类胡萝卜素诱导Hela细胞凋亡的细胞学观察

本文研究了菹草类胡萝卜素提取物(CEPC)对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响,采用体外培养技术,用可见光显微镜、荧光倒置显微镜、透射电镜和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察Hela细胞的形态变化。结果表明:分别用浓度为2.5、5、10μg/ml的CEPC处理Hela细胞,在可见光、荧光显微镜、电镜和LSCM下观察细胞形态,分别出现了细胞数量明显减少、皱缩变形、体积缩小、触角伸长,显示亮黄色荧光的细胞核呈现“新月状”、条状甚至碎片状,细胞膜表面绒毛减少,胞浆内空泡明显增多,细胞核染色体发生固缩,细胞中RNA的含量明显增加等典型的凋亡细胞形态特征。实验结果表明CEPC对Hela细胞的增殖具有明显的抑制作用并能有效地诱导Hela细胞凋亡。     

几种植物多酚对Hela细胞抑制作用的初步研究

采用噻唑蓝比色法、吉姆萨染色法和吖啶橙荧光染色法研究了莲房原花青素、葡萄籽多酚和茶多酚对Hela肿瘤细胞株的体外抑制作用.结果表明,在一定的浓度范围内,这三种植物多酚对Hela细胞均有明显的抑制作用,且存在良好的剂量-教应关系.它们对Hela肿瘤细胞株的半数抑制浓度分别为茶多酚IC50=245.0μg/mL,葡萄籽多酚IC50=78.7μg/mL,莲房原花青素IC50=190.8μg/mL,其抑制效果依次是葡萄籽多酚>莲房原花青素>茶多酚.普通显微镜和荧光显微镜观察发现,Hela细胞经这三种植物多酚作用后,细胞形态发生明显的变化,可见凋亡小体,荧光强度增强,细胞呈现凋亡现象.     

辣木生物碱抑制宫颈癌Hela细胞增殖和诱导其凋亡的作用

研究辣木(Moringa Oleifera. Lam)叶生物碱对宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。通过采用MTT法、克隆形成法、流式细胞术和western blot法检测经不同浓度辣木生物碱(20~320μg/mL)处理48 h后的Hela细胞增殖、凋亡情况和蛋白表达水平。研究结果表明,随着辣木生物碱浓度的增加,Hela细胞的存活率逐渐下降,当辣木生物碱浓度为160μg/m L时,细胞的存活率为35.87%(p<0.001),人正常结肠细胞NCW460的存活率为91.91%;克隆形成实验表明,辣木生物碱(40~160μg/mL)显著抑制Hela细胞克隆形成,抑制率分别为26.04%(p<0.05)、37.19%(p<0.01)和67.77%(p<0.001);当浓度为80μg/m L时,Hela细胞形态发生明显变化;进一步流式细胞术分析得知,Hela细胞内的凋亡细胞数随着辣木生物碱浓度的增加而增加,当细胞经160μg/mL辣木生物碱处理48 h后,其细胞内凋亡细胞数为42.10%(p<0.001),通过对凋亡蛋白表达水平检测发现,Bax/Bcl-2比率和Caspase9表达水平随着辣木生物碱浓度的增加而增加,当辣木生物碱浓度达到80μg/mL时,与对照相比有显著性差异。此外,辣木生物碱显著降低Stat3蛋白磷酸化水平和Cyclin D1蛋白表达水平,当辣木生物碱浓度达到160μg/m L时,与对照相比有显著性差异。以上实验结果表明,辣木生物碱具有抑制Hela细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制Stat3信号通路活化相关。     

不同来源Lfcin诱导Jurkat细胞凋亡的对比研究

本文以牛乳铁蛋白素LfcinB和人乳铁蛋白素LfcinH为研究对象,研究其通过降低线粒体膜电位抑制Jurkat细胞增殖效果及两者的差异性。采用MTT法检测LfcinB和LfcinH对Jurkat细胞增殖影响;Hoechst33258染色法荧光显微镜观察Jurkat细胞核的变化;运用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术将LfcinB和LfcinH促进Jurkat细胞凋亡的阶段进行区分;JC-1染色激光共聚焦显微镜观察细胞线粒体膜电位的改变。结果显示:LfcinH和LfcinB对Jurkat细胞有显著的抑制作用(P0.05),呈剂量依赖性;经LfcinB和LfcinH处理后的Jurkat细胞在荧光显微镜下均可见细胞核皱缩、碎裂呈凋亡特征;激光共聚焦显微镜观察到Jurkat细胞线粒体膜电位下降;流式细胞术检测发现Jurkat细胞经LfcinB和LfcinH处理48 h时主要发生早期凋亡。研究结果表明:Jurkat细胞凋亡的机制可能是通过影响线粒体膜电位导致Jurkat细胞凋亡并抑制细胞增殖;当两者浓度小于250μg/mL时LfcinH对Jurkat细胞抑制效果较强,浓度大于250μg/mL时两者对Jurkat细胞抑制效果相近。     

猪软骨多糖对滚瓶培养MCF-7细胞的诱导凋亡作用及其差异表达蛋白的初步研究

本文研究了人乳腺癌细胞MCF-7在滚瓶培养形成大量细胞聚集体时,猪软骨多糖对MCF-7的诱导凋亡作用,并初步研究了其凋亡前后的差异表达蛋白。采用Hoechst 33342/PI染色于共聚焦显微镜下观察细胞的凋亡特征;Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期的变化;并提取MCF-7细胞的全蛋白,利用二维凝胶电泳(2-DE)结合MALDI-TOF质谱技术检测差异表达蛋白。结果表明:MCF-7细胞在猪软骨多糖作用后出现典型的凋亡现象,通过流式细胞仪检测发现在猪软骨多糖作用12 h,24 h的MCF-7凋亡率分别为20.23%和44.7%;同时发现MCF-7细胞在猪软骨多糖作用后,细胞周期被阻滞在了S期;初步鉴定出2个差异表达蛋白,其中一个为肌动蛋白actin,另一个为抗氧化类蛋白PRDX6。     

硒酸软骨多糖对K562细胞线粒体膜电位及凋亡的影响

本文研究了硒酸软骨多糖(CA-Se)对K562人慢性髓源白血病细胞线粒体膜电位的影响,及对K562细胞的凋亡诱导作用。采用MTT比色法测定CA-Se对K562细胞的增殖抑制作用;Hoechst 33342/PI染色后于显微镜下观察细胞的形态变化;罗丹明-123染色后用流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的变化;采用免疫荧光法检测caspase-9蛋白表达水平,并用RT-PCR检测其基因的表达。结果表明:CA-Se可显著抑制K562细胞的增殖,且具有浓度依赖性和时间依赖性;经CA-Se作用后,细胞形态发生明显改变,细胞体积变小,细胞膜变得不规则,染色质固缩;对照组与CA-Se处理组的线粒体膜电位分别为96.10%和78.07%,膜电位下降;CA-Se处理后,K562细胞中caspase-9蛋白表达显著增加,其基因表达水平显著上升。说明硒酸软骨多糖可通过降低细胞线粒体膜电位,上调凋亡起始酶caspase-9的基因表达,激活caspase-9蛋白来诱导K562细胞凋亡。     

基于柱前衍生化反相色谱分析的枸杞多糖产品的掺杂检测

为建立枸杞多糖产品的掺杂检测方法,采用多糖完全水解结合柱前PMP衍生化反相色谱分析的方法,研究发现正常枸杞多糖提取物与其掺杂样品中的葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和氨基葡萄糖这4个标志性单糖组分的相对百分比具有显著性差异,据此特征可进行枸杞多糖产品的掺杂鉴别;应用酶解和醇沉的方法去除糊精或可溶性淀粉的干扰,再将枸杞多糖完全水解,并进行柱前PMP衍生化反相色谱分析,即可实现掺杂枸杞多糖提取物产品的确证检测及其枸杞多糖实际含量的准确测定。其测定方法加标平均回收率为89.8%,相对标准偏差为2.48%(n=5)。该测定方法比起现有的苯酚流酸法,不仅在样品前处理方法上可以完全排除糊精或可溶性淀粉的干扰,且消除了用葡萄糖作标品测定杂多糖含量的苯酚硫酸法固有的较大误差,因此本方法更为科学合理、准确可信。     

膜分离技术提取枸杞多糖的工艺

采用微滤、超滤操作对枸杞多糖提取液进行了处理,结果表明：操作压力、操作时间及料液温度对膜通量有很大的影响．由微滤和超滤相结合对枸杞多糖的截留率可达到90．4％．枸杞多糖的定量测定采用硫酸-苯酚显色法;枸杞多糖的相对分子量测定采用凝胶渗透色谱法。     

硒化乳酸菌胞外多糖对小鼠腹腔巨噬细胞及肿瘤细胞内游离Ca2+的影响

目的：研究硒化乳酸菌胞外多糖对小鼠腹腔巨噬细胞、SGC7901胃癌细胞及海拉细胞（Hela cells）内游离Ca2+的影响。方法：分离制备小鼠腹腔巨噬细胞,利用Ca2+荧光探针Fluo-3/AM及激光共聚显微镜测定加药后10 min细胞内Ca2+浓度的变化。结果：添加硒化多糖后,巨噬细胞内Ca2+浓度缓慢升高,而胃癌细胞与Hela细胞内Ca2+水平均有不同程度的下降。结论：通过对乳酸菌胞外多糖进行硒化修饰可增强其刺激巨噬细胞的能力,因而发挥其免疫功效。硒化多糖与肿瘤细胞表面受体结合后引起细胞内Ca2+内流的减少,提示硒化后的多糖可引起肿瘤细胞不同程
度的细胞凋亡。     

硒化乳酸菌胞外多糖对小鼠腹腔巨噬细胞及肿瘤细胞内游离Ca~(2+)的影响

目的:研究硒化乳酸菌胞外多糖对小鼠腹腔巨噬细胞、SGC7901胃癌细胞及海拉细胞(Hela cells)内游离Ca2+的影响。方法:分离制备小鼠腹腔巨噬细胞,利用Ca2+荧光探针Fluo-3/AM及激光共聚显微镜测定加药后10 min细胞内Ca2+浓度的变化。结果:添加硒化多糖后,巨噬细胞内Ca2+浓度缓慢升高,而胃癌细胞与Hela细胞内Ca2+水平均有不同程度的下降。结论:通过对乳酸菌胞外多糖进行硒化修饰可增强其刺激巨噬细胞的能力,因而发挥其免疫功效。硒化多糖与肿瘤细胞表面受体结合后引起细胞内Ca2+内流的减少,提示硒化后的多糖可引起肿瘤细胞不同程度的细胞凋亡。     

枸杞多糖对小鼠肠道上皮内淋巴细胞和杯状细胞数量、分布及对IL-2水平影响

为了研究枸杞多糖(LBP)对肠黏膜屏障结构的影响,给10只C57BL/J健康小鼠连续灌服枸杞多糖7d后,显微镜观察小肠上皮内淋巴细胞(IEL)、杯状细胞(GC)数量和分布变化及测定肠黏膜白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)水平。结果表明,应用枸杞多糖小鼠的肠黏膜IEL数量和GC的数量明显增加,且有向肠内层移动趋势,同时肠黏膜IL-2水平升高。证实枸杞多糖在一定程度上可促进小鼠小肠黏膜屏障结构趋于完整并提高其免疫功能。     

枸杞子多糖不同组分的双向免疫调节机制研究进展

枸杞子多糖是枸杞中的主要功能成分，具有良好的免疫调节活性。现有研究大多关注枸杞子多糖的免疫促进功能，对其免疫抑制机制缺乏深入探索。因此，本文从肠黏膜保护、肠道菌群变化、免疫细胞和神经内分泌系统等方面，针对枸杞子多糖不同组分的免疫增强/抑制机制展开综述，为其在抗病毒治疗、抗肿瘤治疗、多种疫苗开发、动物饲料免疫增强配方和抗过敏药物/食品中的应用提供参考。     

醋酸催化下枸杞多糖的硒化修饰及抗肿瘤活性

制备硒化枸杞多糖,初步了解其结构及体外抗肿瘤活性。利用亚硒酸钠对枸杞多糖进行修饰,通过将无机硒转化为有机硒,为得到高含硒量的枸杞多糖进行探索,找出最佳反应条件为:2mL冰醋酸作为催化试剂,硒化试剂硒酸钠用量为2g,室温下反应时间48h。通过紫外光谱、红外光谱分析,并进行了体外抗肿瘤的初步试验研究。结果:确定了硒化枸杞多糖的分子结构中存在亚硒酸基团,人宫颈癌细胞抑制率可达到26.1%。硒化枸杞多糖对人宫颈癌细胞存在一定的抑制作用。     

枸杞粉及其多糖对环磷酰胺致免疫低下小鼠免疫及肠道菌群的调节作用

枸杞是我国传统的药食两用资源,其鲜果喷雾干燥粉作为食品或功能食品原料被广泛应用,但其功效作用研究较少。本研究以环磷酰胺（cyclophosphamide,CTX）诱导免疫低下的小鼠为模型,探究枸杞粉（Lycium barbarum L. powder,LB）、枸杞多糖（Lycium barbarum L. polysaccharides,LBP）及复配物（LB＋LBP）对小鼠免疫力及肠道菌群稳态的影响。结果表明,LB、LBP及LB＋LBP均可不同程度地恢复免疫抑制小鼠的体质量和采食量,改善小鼠的脾脏、胸腺和结肠组织损伤,有效促进免疫抑制小鼠肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素（interleukin,IL）-1β、干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）和免疫球蛋白A（immunoglobulin A,IgA）的分泌,调节结肠中免疫相关基因的表达,促进短链脂肪酸（short-chain fatty acids,SCFAs）生成,显著调节Muribaculaceae_unclassified、Muribaculum、Mucispirillum、Helicobacter、Bilophila、Clostridiales等相对丰度（P＜0.05）,逆转CTX诱导的小鼠肠道菌群代谢功能异常,并使其趋于正常。相较于LBP,LB、LB＋LBP还可降低Clostridiales相对丰度,增加有益菌Duncaniella的相对丰度,LB＋LBP还可降低厌氧菌Anaerotruncus的相对丰度。本研究结果将为枸杞精深加工产业中功效针对性健康产品研发和多元化产品开发提供理论依据。     

枸杞多糖对顺铂诱导人胚肾细胞凋亡的影响

目的：研究枸杞多糖(LBP)对顺铂(CDDP)所致人胚肾细胞(HEK293)凋亡的影响,并探讨其可能机理。方法：体外培养HEK293,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法观察LBP对CDDP诱导HEK293细胞生长的影响,流式细胞仪检测LBP对CDDP诱导HEK293细胞凋亡率的变化：Western blotting检测LBP对CDDP诱导HEK293细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果：LBP能够拮抗CDDP诱发的细胞毒性,并且随着质量浓度的不同而产生变化。 流式细胞仪检测表明随着LBP质量浓度的增加,细胞凋亡率随之减少;Western blotting表明,加入LBP后能够使Bax基因的表达减少而Bcl-2基因的表达增加。结论：LBP对CDDP诱导人胚肾细胞凋亡有抑制的作用,其作用机理可能与其下调Bax及上调Bcl-2蛋白表达有关。     

Lycium barbarum polysaccharide inhibits the proliferation of HeLa cells by inducing apoptosis

BACKGROUND: Lycium barbarum polysaccharide (LBP), isolated with boiling water from the famous Chinese medicinal herb Lycium barbarum fruits, is one of the most important functional constituents in Lycium barbarum. In this study the effects of LBP on cell proliferation, cell cycle and apoptosis in human cervical carcinoma cells (HeLa cells) were investigated. RESULTS: LBP could inhibit the proliferation of HeLa cells by changing cell cycle distribution and inducing apoptosis. In addition, the loss of mitochondrial transmembrane potential (Δψ_m) was observed by flow cytometry and the increase of intracellular Ca²⁺ concentration was detected by laser scanning confocal microscope in apoptotic cells. At the same time, the nitric oxide content, nitric oxide synthase and inducible nitric oxide synthase activities were also increased. CONCLUSION: The inhibitory effect of LBP on the proliferation of HeLa cells was caused by inducing apoptosis through the mitochondrial pathway. The results showed that LBP can be developed as a potential chemotherapeutic agent candidate against human cervical cancer. Copyright © 2012 Society of Chemical Industry     

枸杞硒多糖的合成及对人体肝癌HepG2细胞增殖的体外抑制作用评价

根据有机硒化合物的合成方法,本文以枸杞多糖和亚硒酸钠为原料,采用响应面法优化枸杞硒多糖的工艺条件。利用原子荧光、体外化学反应等分析技术测定了枸杞硒多糖中的硒含量,并用MTT法对枸杞硒多糖抑制人体肝癌细胞增殖的活性进行了初步评价。结果表明:制备枸杞硒多糖的最优条件是按照LBP为1 g计算,加入0.62 g Na₂SeO₃,用1% HNO₃充分溶解,再加入BaCl₂ 1 g,74 ℃反应9 h。在此条件下,枸杞硒多糖中的硒含量为648.65 μg/g。活性结果显示,枸杞多糖和枸杞硒多糖对HepG2细胞均有一定的抑制作用,所有枸杞硒多糖的抑制作用明显优于枸杞多糖,并且硒含量最高的Se-LBP₄组对肿瘤细胞HepG2的抑制效果最佳,抑制率为38.15%。枸杞硒多糖抑制HepG2增殖能力与其硒的含量呈正相关,有望作为食品、保健食品和医药的原料进一步开发。     

枸杞多糖的提取方式、结构及生物活性研究进展

枸杞(Lycium barbarum)果实为传统的名贵滋补药材,在我国有2000多年的历史。枸杞多糖(Lycium barbarum polysacchavides,LBP)是枸杞中最重要的活性成分之一。在过去的几年中,LBP由于具有良好的生物活性而备受关注。然而,多糖的生物活性与其化学结构密切相关,而化学结构又被提取方式所影响。该文对LBP的提取方法、化学结构和主要生物活性的对应关系进行总结,比较通过不同提取方式制备得到的枸杞多糖的不同之处,旨在提出枸杞多糖的构效关系,关注特定结构和活性的枸杞多糖的定向提取。大部分研究表明,采用热水提取法制备的枸杞多糖多为含有酸性糖组分的杂多糖,其中的中性糖组分多以阿拉伯糖、葡萄糖及半乳糖为主。此外,枸杞多糖通过不同的机制显示出良好的抗氧化、免疫调节、抗肿瘤及神经保护活性。     

陕北野生枸杞多糖的体外抗氧化活性

目的：测定陕北野生枸杞中总糖含量、糖醛酸含量以及体外抗氧化活性。方法：采用苯酚- 硫酸法,测定枸杞提取物的总糖含量;用硫酸- 咔唑法,测定枸杞多糖的糖醛酸含量;通过红外光谱技术初步分析枸杞多糖基团的构成;并以VC 为对照,比较枸杞多糖对二苯代苦味酰基(DPPH)自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基的 体外抗氧化活性及还原力。结果：陕北枸杞提取物中的总糖含量为58.31%,糖醛酸含量为32.17%。 当枸杞多糖的质量浓度为1mg/mL 时,对DPPH 自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基清除率分别为81.30%、50.33% 和60.57%,还原能力比VC 稍低。结论：陕北野生枸杞多糖有很强的抗氧化活性。     

枸杞多糖缓解小鼠体力疲劳研究

研究枸杞多糖缓解长期过量运动小鼠体力疲劳的作用及其机制。将60只雄性昆明小鼠随机分成5组:空白对照组、模型组及枸杞多糖低、中、高剂量组(75、150、300 mg/kg),每组12只。通过小鼠游泳实验建立小鼠疲劳模型,测定小鼠血清中尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肌酐(creatinine,CREA)、乳酸(lactic acid,LA)含量以及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、肝糖原(hepatic glycogen,HG)和肌糖原(muscle glycogen,MG)含量,测定肝组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。在枸杞多糖干预下,与模型组相比,各剂量组血清BUN和CREA浓度降低,LD含量下降,LDH活性升高,肝组织中MDA浓度降低,SOD活性升高。结果表明枸杞多糖具有一定的缓解体力疲劳、增强小鼠运动能力的作用。