风干肠中产生物胺细菌的筛选鉴定及其产胺特性

以猪肉风干肠为研究对象,筛选鉴定产生物胺的微生物,并研究其产生物胺特性,以期对风干肠生物胺的控制技术提供试验依据。采用双层选择培养基显色法筛选产生物胺的菌落,并通过氨基酸脱羧酶试验确认产胺菌,采用全自动微生物生化鉴定仪进行菌种鉴定,并用高效液相色谱法分析不同菌种产生物胺的种类和能力。研究中筛选出两株产胺菌分别为大肠杆菌和克氏耶尔森菌,其中大肠杆菌主要产色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、酪胺,总产胺量为123.11μg/m L,尸胺产量最高为69.35μg/m L;克氏耶尔森菌主要产腐胺、酪胺,总产胺量为36.70μg/m L,酪胺产量最高为34.44μg/m L。     

传统中式香肠中产生物胺氧化酶菌的分离鉴定

结合培养基显色法和氧化酶试验,对发酵香肠中产生物胺氧化酶优势菌进行了初步分离。进而利用肉品发酵剂标准剔除不符合要求的菌株。利用高效液相色谱检测符合要求的产生物胺氧化酶菌株对生物胺的氧化减少能力。最后采用16S rDNA分子鉴定方法,通过同源性比对,得到4株符合发酵剂标准的产生物胺氧化酶菌株,即1株表皮葡萄球菌,3株模仿葡萄球菌。     

黄酒酿造过程中优势细菌产生物胺的检测与评价

采用显色培养基法、脱羧酶序列特异PCR技术和HPLC分析脱羧酶液体培养基生物胺含量变化3种方法检测和评价来自黄酒酿造过程的41株细菌产生物胺的情况。研究表明,3种方法检测结果大致相同,互补使用能够准确分析细菌产生物胺的情况;41株细菌中,53.7%以上都能产酪胺,31.7%以上产腐胺,24.3%以上产组胺;14株短乳杆菌均携带酪氨酸脱羧酶基因,其中11株菌的酪胺产量超过50.00 mg/L,且多数菌能代谢产生多种生物胺,因此推断其对黄酒中生物胺含量影响最大;细菌代谢是否产生物胺及产生物胺的能力无种属特异性,但有菌株特异性。     

一种改进的微球菌产生物胺的固体培养基检测法

自行设计了一种对产生物胺(BA)微球菌进行检测的固体培养基法,利用该方法对从自然发酵腊肉中分离出来的100株菌株进行了检测,同时以液体培养基法做对照,实验证明此方法可行,且该法简单,准确性高,对优良菌种发酵剂的开发很有帮助。     

传统香肠中产生物胺肠细菌和乳酸菌分离方法的研究

研究建立了单层培养,双层显色分离产生物胺肠细菌和乳酸菌的方法,并分离到96株产生物胺肠细菌和58株产生物胺乳酸菌。经变性凝胶梯度电泳分析(PCR-DGGE)和PCR扩增测序后与Genebank数据库比对得知,这154株产胺菌属于5种菌,分别为屎肠球菌、粪肠球菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希杆菌和产气肠杆菌。并采用特异性引物证明了产生物胺基因的存在。     

黄酒酒曲中产生物胺细菌的分离鉴定

为探明黄酒酒曲中产生物胺细菌的菌相,深入研究黄酒中的生物胺形成机制,分别以4种黄酒酒曲(麦曲M、麦曲L、小曲Q、红曲H)为研究对象,采用脱羧酶培养基对产生物胺细菌进行初筛,高效液相色谱法复筛,并通过16S rDNA基因序列分析,对分离得到的产生物胺细菌进行鉴定。共筛选出42株产生物胺细菌,包括肠杆菌属(Enterobacter sp.)17株,乳杆菌属(Lactobacillus sp.)6株,克雷伯氏菌属(Klebsiella sp.)5株,沙门氏菌属(Salmonella sp.)4株,肠球菌属(Enterococcus sp.)3株,克罗诺菌属(Cronobacter sp.)3株,埃希菌属(Escherichia sp.)菌株2株,柠檬酸杆菌属(Citrobacter sp.)1株,葡萄球菌属(Staphylococcus sp.)1株。分离的产生物胺细菌中多数可同时产生多种生物胺,其中产腐胺、尸胺、组胺的菌最多,但未分离到色胺和亚精胺产生菌。     

产生物胺菌株群体感应AHLs检测及分析

为探讨发酵肉制品中生物胺的产生、累积机理,采用高效液相法分析了新疆熏马肠样品产生物胺优势菌株克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae strain)和成团泛菌(Pantoea agglomerans strain)产生物胺能力。并选取克雷伯氏菌、阴沟肠杆菌、成团泛菌作为群体感应现象研究对象,利用微生物传感菌Agrobacterium tumefaciens A136及Agrobacterium tumefaciens KYC55平行线法检测AHLs。检测表明,3株产生物胺菌能够发生群体感应现象。通过β-半乳糖苷酶活性检测法测定AHLs活性试验、HPLC法对产生物胺菌株AHLs定性分析,结果表明,β-半乳糖苷酶活性越高,产生物胺菌株分泌的AHLs越多;Klebsiella sp.、Enterobacter cloacae strain均能分泌:N-butanoyl-L-homoserine lactone(C4-HSL)、N-hexanoyl-DL-homoserine homoserine lactone(C6-HSL)、N-octanoyl-DL-homoserine lactone(C8-HSL)类型的信号分子。     

海鲈鱼腌制过程中产胺菌的分离筛选与生物学特性研究

为探明海鲈腌制加工过程生物胺产生菌的菌相,通过生物胺对培养基进行初筛,采用高效液相色谱进行分析以,并通过VITEK 2菌种鉴定系统,对海鲈腌制加工过程中的产胺菌进行分离鉴定,研究了温度、p H和Na Cl浓度对产胺量较高的菌株生长和产胺能力的影响。结果表明,海鲈腌制加工过程中不仅存在假单胞菌(Pseudomonas)、弧菌(Vibrio)以及葡萄球菌(Staphylococcus)等常见的产胺菌,而且还分离到新的产胺菌——麻疹孪生球菌(Gemella morbillorum)、琼氏不动杆菌(Acinetobacter junii)、皮氏罗尔斯顿菌(Ralstonia pickettii)和格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)。这些生物胺产生菌生长和产胺的最适温度是30℃,p H值对其影响不大,具有较高的耐盐性,100~200 g/L的食盐质量浓度可以抑制产胺菌的生长,100 g/L的食盐质量浓度下可以抑制组胺的产生,但200 g/L的食盐才可以抑制腐胺、尸胺和酪胺的形成。     

鲭鱼生物胺生成菌的分离与鉴定

从鲭鱼体内分离7 株生物胺产生菌,其中3 株菌可以产生色胺,4 株菌可以产生2-苯乙胺,4 株菌可以产生腐胺,1 株菌可以产生尸胺,3 株菌可以产生组胺,1 株菌可以产生酪胺。组胺生成量较高的No.1菌株形态学、生理生化分析及菌种鉴定结果表明该菌株极有可能为侵肺巴斯德氏菌,可信度为99.9%。     

发酵肉制品中细菌群落结构及其表皮葡萄球菌生物胺相关基因分析

该研究首先利用高通量测序技术对发酵肉制品中细菌群落结构进行分析;然后利用传统培养分离法及双层显色培养基对产生物胺的细菌进行分离筛选,并基于16S rRNA基因序列进行鉴定;最后利用聚合酶链式反应（PCR）对产生物胺细菌的赖氨酸脱羧酶、组氨酸脱羧酶和酪氨酸脱羧酶编码基因ldc、hdc、tdc进行扩增。结果表明,发酵肉制品中细菌主要为厚壁菌门（Firmicutes）的葡萄球菌属（Staphylococcus）。从发酵肉制品中共分离得到52株细菌,其中43株具有产生物胺能力,主要为表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）;产生物胺能力较强的7株表皮葡萄球菌中均含有ldc和hdc基因,部分菌株检测到tdc基因,为评估发酵食品生物胺的潜在危害和快速检测奠定基础。     

红茶菌菌相分析及优势菌的分离与鉴定

目的：了解红茶菌菌相结构及获取发酵菌株。方法：采用16S rDNA高通量测序技术和传统微生物培养法对红茶菌菌相组成和优势菌株进行分析。结果：高通量测序显示红茶菌的细菌群落丰富度与多样性大于真菌。结论：细菌中驹形氏杆菌(Kohmagataeibacter)、醋酸杆菌属(Acetobacter)、乳杆菌属(Lactobacillus) 为优势菌株,真菌中德克酵母属(Dekkera)、接合酵母属(Zygosacchaormyces)为优势菌株。传统平板培养法分离得到7株醋酸菌、3株酵母菌和1株乳酸菌,其中食糖驹形氏杆菌(Komagataeibacter saccharivorans)1株、腐烂苹果醋酸杆菌(Acetobacter malorum)1株、木驹形氏菌(Komagataeibacter xylinus)4株、醋酸杆菌属(Acetobacter)1株、拜耳接合酵母 (Zygosaccharomyces bailii)2株、布鲁塞尔德克酒香酵母(Dekkera bruxellensis)1株、植物乳杆菌(Lactobacillus.plantarum)1株。     

阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)分离鉴定及其对蔬菜中甲萘威农药降解作用的研究

目的 从寒地黑土中筛选甲萘威降解菌,并对筛选得到的菌株进行形态学及16S rDNA分子鉴定,将该菌株用于蔬菜样品中甲萘威农药残留降解规律的研究。方法 从土壤样品中用含甲萘威农药的培养基进行平板稀释法初筛、96孔板法复筛,分别在37℃(1 d)、4℃(6 d)下进行培养,筛选在OD₆₀₀ nm处吸光值高的菌株,即为可利用甲萘威生长的菌株。获得OD₆₀₀ nm为0.906的菌株D7,并对该菌株进行形态学以及分子生物学鉴定。结果 菌株D7经鉴定为阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai);菌株D7对所选5种叶菜和5种果菜中残留的甲萘威均有一定降解作用,且对生菜中甲萘威的降解率最高为58.7%。结论 筛选出阿氏芽孢杆菌D7,在低温条件生长良好。为微生物法降解甲萘威提供优良降解菌株,解决蔬菜中甲萘威残留的问题。     

杨梅贮藏期真菌的分离鉴定及基于ITS序列的聚类分析

目的 分离并鉴定杨梅贮藏期真菌。方法 通过稀释涂布平板分离法以及划线纯化, 从贮藏期杨梅果实中分离、纯化真菌菌种, 并结合传统形态学与ITS (internal transcribed spacer)全序列分析对其进行准确鉴定。结果 最终鉴定出共14株真菌, 其中1株毛霉(Mucor racemosus)、1株白地霉(Geotrichum candidum)、 1株腐皮壳属霉菌(Diaporthe sp.)、1株好食链孢霉(Neurospora sitophila)、3株出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)、4株酵母菌(Pichia kudriavzevii, Pichia terricola, Hanseniaspora opuntiae, Saccharomycopsis crataegensis)以及3株青霉(Penicillium sp., Penicillium expansum, Penicillium herquei)。从进化关系上看有3类显示较近的亲缘关系, 第1类为青霉属, 第2类为出芽短梗霉, 第3类为毕赤酵母。结论 结合传统形态学与ITS全序列分析可对杨梅贮藏期真菌进行更为准确的鉴定。     

Systematic hybrid LOH: a new method to reduce false positives and negatives during screening of yeast gene deletion libraries

We have developed a new method, systematic hybrid loss of heterozygosity, to facilitate genomic screens utilizing the yeast gene deletion library. Screening is performed using hybrid diploid strains produced through mating the library haploids with strains from a different genetic background, to minimize the contribution of unpredicted recessive genetic factors present in the individual library strains. We utilize a set of strains where each contains a conditional centromere construct on one of the 16 yeast chromosomes that allows the destabilization and selectable loss of that chromosome. After mating a library gene deletion haploid to such a conditional centromere strain, which corresponds to the chromosome carrying the gene deletion, loss of heterozygosity (LOH) at the gene deletion locus can be generated in these otherwise hybrid diploids. The use of hybrid diploid strains permits complementation of any spurious recessive mutations in the library strain, facilitating attribution of the observed phenotype to the documented gene deletion and dramatically reducing false positive results commonly obtained in library screens. The systematic hybrid LOH method can be applied to virtually any screen utilizing the yeast non-essential gene deletion library and is particularly useful for screens requiring the introduction of a genetic assay into the library strains.     

树胶降解酶菌种的选育研究

本文通过对废糖蜜培养基分离、纯化得到的25种微生物作多糖降解测定,选出18中疑菌种后,采用树胶琼脂培养基和透明圈法作进一步筛选出2个对树胶降解效果突出的菌种,为深入研究困扰着制糖业的多糖问题,以及对菌种的优化提供了宝贵的资料。     

泡菜发酵乳酸菌的分离鉴定及耐药性分析

对吉林地区朝鲜族自制泡菜中的发酵乳酸菌进行分离鉴定,并对菌株耐药情况进行分析,以期为泡菜发酵菌的风险评估奠定基础。采集吉林省多个不同地区的泡菜制品,通过MRS培养基分离,16S rDNA测序,分析其乳酸菌种类及数量,同时采用平板琼脂稀释法进一步检测了分离菌对10 种临床常用抗生素的药物敏感性。结果表明,从15 份不同厂家泡菜中共分离得到34 株乳酸菌,分别为植物乳杆菌12 株,短乳杆菌5 株,鼠李糖乳杆菌3 株,干酪乳杆菌2 株,清酒杆菌2 株,肠膜明串珠菌2 株,嗜热链球菌2 株,食窦魏斯氏乳杆菌1 株,弯曲乳杆菌1 株,棒状乳杆菌1 株,嗜酸乳杆菌1 株,坚强肠球菌1 株,Lactobacillus namurensis 1 株。药敏实验结果表明,所有菌株对氨苄西林和氯霉素敏感,对其他抗生素均有不同程度的耐药性,其中对环丙沙星耐药率最高。     

适于生产生物柴油的产油酵母菌的筛选

该文从土壤中筛选出10株产油脂的酵母菌,经摇床培养复筛确定其中2株优良产油酵母菌JM-B、JM-D。通过对2株菌生理生化特性的试验,进一步对其发酵性能进行研究并对酵母菌株油脂脂肪酸组成进行测定。菌株JM-D油脂脂肪酸组成与植物油相似,适合用于发酵生产生物柴油,是今后发酵生产生物柴油的优良菌株。     

Experimentally induced intramammary infection with multiple strains of Streptococcus uberis

The effect of infusing a mixture of 5 Streptococcus uberis strains into mammary quarters of 10 lactating cows was investigated. All 5 strains, which included 2 originally isolated from the dairy environment and 3 from clinical cases of mastitis, were capable of establishing an intramammary infection when infused individually. However, when the 5 strains were infused together, a single strain predominated in 7 out of 10 quarters. One strain in particular prevailed in 4 mammary quarters and was also found to inhibit the growth of the other 4 strains with deferred antagonism on esculin blood agar. The genes required for the production of bacteriocins nisin U and uberolysin were identified in this strain, whereas the other 4 strains contained only uberolysin genes. Direct competition may have occurred between strains within the mammary gland but competition was not apparent when cultured together in UHT milk, where no strain predominated. Although the mechanism is unknown, these results imply that a selection process can occur within the mammary gland, leading to a single strain that is detected upon diagnosis of mastitis.     

藏灵菇中高产胞外多糖乳酸菌的筛选及其发酵性能的研究

本研究采用高通量筛选技术和苯酚-硫酸法获得高产胞外多糖的乳酸菌菌株，并对其发酵性能和酸奶品质进行测试。筛选的八株菌均具有高产胞外多糖和良好的发酵性能。其菌种鉴定结果是：菌株KTx、 KL1、J1为干酪乳杆菌（Lactobacillus casei），菌株Tx为嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus），菌株KS4、J4、Pl、P5为乳酸乳球菌乳酸亚种（Lactococcus lactis subsp．1actis），其中嗜热链球菌Tx制备发酵剂的粘度最高，凝乳时间最短，感官综合评分最高，可利用此菌株进一步开发研制具有良好稳定性的功能性酸奶。     

市售生鲜湿面中腐败菌的分离与鉴定

采用涂布平板法从生鲜湿面中分离腐败菌,通过形态观察及分子生物学技术对分离腐败菌进行菌种鉴定。结果表明,从生鲜湿面中分离得到8株典型菌株,包括3株霉菌和5株细菌。经鉴定,3株霉菌（A1,B1,C1）分别为草酸靑霉（Penicillium oxalicum）、黄曲霉（Aspergillus flavus）、黑曲霉（Aspergillus niger）;5株细菌（S1～S5）分别为3株蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）、1株肠炎沙门氏菌（Salmonella enterica）、1株副芽孢杆菌（Bacillus paramycoides）。