植物乳杆菌和蛋白酶协同发酵水解大米蛋白ACE抑制肽高活性组分的氨基酸序列分析

利用低大米蛋白制备过程发酵水解液中富含大米蛋白和肽。以乳杆菌L2-18+风味蛋白酶/菠萝蛋白酶+胃蛋白酶/酸性蛋白酶分步获得的大米蛋白水解液为研究对象,通过超滤获得小于3 kDa蛋白肽。经阳离子交换、凝胶柱层析和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)三步分离纯化,确定出高活性ACE抑制肽组分,IC_(50)值为33.81μg/mL。经液质联用(liquid chromatograph-mass spectrometer,LC-MS)鉴定分析,其多肽序列为VVFFAAAL。     

混菌固态发酵榛仁粕制备降血压肽工艺优化研究

为探索固态发酵榛仁粕制备降血压肽的最佳工艺条件,以蛋白酶活力、水解度和粗多肽得率为指标,从枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌、米曲霉、酿酒酵母中筛选出3株蛋白酶产量较高的菌株,再将其分别两两组合以ACE抑制率、水解度和粗肽得率为指标进行混菌筛选,通过单因素实验和正交实验,优化降血压肽制备工艺条件。结果表明:枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、米曲霉更适合固态发酵榛仁粕制备降血压肽。枯草芽孢杆菌和米曲霉按2:3比例混合,接种量15%,含水量60%,发酵温度40℃,发酵时间72 h,在此条件下所得发酵产物的ACE抑制率、水解度及粗多肽得率分别为45.24%,30.13%和25.53%,ACE抑制率提高了104.61%。     

山羊酷蛋白不同酶解产物特性的研究

比较了四种酶(胰蛋白酶、胃蛋白酶、Alcalase及自制的枯草芽孢杆菌蛋白酶)对山羊酪蛋白的水解能力.水解度动态测定发现,酶解速度从高到低依次为Alcalase、枯草芽孢杆菌蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶;当40℃水解3h左右,水解度即达到相对稳定的最大值,依次为34.61%、25.28%、19.08%和7.22%.酶解物的SDS-PAGE分析发现,Alcalase、枯草芽孢杆菌蛋白酶能将山羊酪蛋白充分降解成小肽或游离氨基酸,而胰蛋白酶和胃蛋白酶的酶解物中还包含14kDa左右的大肽.山羊酪蛋白对四种酶的敏感程度均高于牛酪蛋白.山羊酪蛋白的胃蛋白酶解物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有一定抑制作用,枯草芽孢杆菌蛋白酶酶解物具有较强的超氧负离子自由基(O2-·)清除能力,清除率达到50.22%,是相同浓度维生素C(73.73%)的68%,四种酶解物清除O2-·的能力与水解程度呈正相关.     

酶解花生蛋白制备血管紧张素转化酶抑制肽

采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、复合风味酶（固／液）、木瓜蛋白酶水解花生蛋白制备血管紧张素转化酶（ACE）抑制肽,通过体外检测法测定其ACE抑制率。结果表明,碱性蛋白酶水解物的ACE抑制率最大。根据Box—Behnken的中心组合实验设计原理对碱性蛋白酶酶解工艺进行优化,结果表明：当温度为53．7℃,底物浓度为7．72％,酶与底物质量比4．18％,pH=8．0,水解时间为120min时,其ACE抑制率可达72．78％。     

菠萝蛋白酶水解泥鳅蛋白制备ACE抑制肽的研究

为了探讨利用泥鳅蛋白制备功能性肽的可能性,采用高效液相色谱法测定泥鳅肉水解物对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制作用,从胰蛋白酶、胃蛋白酶、菠萝蛋白酶、复合风味蛋白酶、复合蛋白酶5种酶中筛选出菠萝蛋白酶作为酶解泥鳅肉制备具有降血压活性水解物的适宜水解酶。在单因素试验的基础上,采用L9(34)正交试验设计对该酶的酶解条件进行优化。结果表明最佳水解条件为：温度55℃,固液比1:3,pH6.5,加酶量1000U/g pro,水解时间90min。在该条件下,水解物的ACE抑制率IC50值为0.0184mg/mL,ACE抑制肽的相对分子质量主要集中在924左右。     

不同蛋白酶水解牛肉蛋白产物的ACE抑制活力比较

以ACE抑制活力和水解度为指标,考察6种常用蛋白酶（复合蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶）对牛肉蛋白酶解产物的影响,比较不同蛋白酶酶解产物经模拟消化前后ACE抑制活力的变化,并分析了不同蛋白酶酶解产物的分子量分布和感官评价。结果表明：碱性蛋白酶最适于酶解牛肉生产降压肽,其酶解液ACE抑制率为51.19%,消化后活性降低幅度小,消化后酶解液ACE抑制率为39.65%,同时水解度为44.76%,大分子蛋白分解程度高。其次是复合蛋白酶和中性蛋白酶,两者的酶解液在消化前后都具有高ACE抑制活力,消化前抑制率分别为67.97%和62.00%,消化后抑制率分别为37.26%和43.12%,水解度分别为37.47%和36.35%,但大分子蛋白的分解程度较低。感官评价结果表明,不同酶解液的外观、气味和滋味与市售商品差异不大,无明显不良风味产生,可用于食品辅料的生产。     

鸡脑蛋白水解物的研究

选用中性蛋白酶和胃蛋白酶水解鸡脑蛋白,确定最佳水解条件为:先采用中性蛋白酶于50℃,pH7.0,加酶量0.8U/mg蛋白质,底物浓度0.5%,水解4h;再用胃蛋白酶于40℃,pH1.0,加酶量8U/mg蛋白质,水解3h。在该条件下,肽得率为70.38%,水解产物的氨基酸含量为2.01%,10kDa分子量以下的肽含量为47.72%,3kDa分子量以下的肽含量为40.14%,1kDa分子量以下的肽含量为29.03%。     

制备大豆降血压肽最佳用酶的筛选

以大豆分离蛋白为原料,选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和双酶复合来水解制备大豆降血压肽,以血管紧张素转化酶(ACE)抑制率为主要指标,筛选出制备大豆降血压肽最佳的酶。结果表明,大豆降血压肽ACE抑制率的大小与酶的种类及配比有关,筛选出碱性蛋白酶为最佳用酶,在6h左右达到最大抑制率68.54%。     

大米蛋白酶解物的ACE抑制活性研究

为了考察大米四种蛋白经模拟体外消化后能否产生ACE抑制活性肽及其活性状况,本研究以大米为原料,Osborne法提取大米四种蛋白。体外模拟胃肠道消化过程,研究消化酶解ACE抑制活性肽产生情况及其活性大小,同时检测酶解产物的水解度和分子量分布。实验结果表明,大米四种蛋白经胃蛋白酶消化30min,酶解产物的ACE抑制活性均达到较高水平,随后经过胰蛋白酶作用,酶解产物的ACE抑制活性下降。大米清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白的4h消化产物半抑制浓度IC50值分别为1.45mg/mL、0.91mg/mL、1.19mg/mL和0.75mg/mL,分子量集中在1000u以下,是易于被人体吸收的ACE抑制活性肽。同时,未经酶解的蛋白几乎没有ACE抑制活性。结果说明大米四种蛋白的体外消化酶解物具有不同大小的ACE抑制活性,其中大米谷蛋白消化产物的ACE抑制活性最高,人体正常食用大米蛋白,经胃肠消化可以产生被人体吸收的ACE抑制活性肽。     

三种物理法辅助蛋白酶水解合浦珠母贝蛋白的效果评价

目的:研究了微波法(W)、超声法(U)与传统水浴法(H)3种模式辅助7种常用酶(Alcalase 2.4L蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、胃蛋白酶和枯草蛋白酶)酶解合浦珠母贝蛋白的效果。方法:通过RPHPLC法与Tricine-SDS-PAGE电泳实验,结合水解度、DPPH·清除率、·OH自由基清除率等评价指标。结果:物理辅助酶解能有效促进水解,微波结合木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和枯草蛋白酶处理,其作用效果优于超声波法和传统水浴法;Alcalase 2.4L蛋白酶与复合风味蛋白酶在三种辅助模式下相似。结论:综合各指标结果得出,微波助解合浦珠母贝蛋白最佳的酶为Alcalase 2.4L蛋白酶与复合风味蛋白酶。     

微生物固态发酵菜籽粕营养特性的研究

以普通菜籽粕为原料,选用枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌、啤酒酵母、季也蒙毕赤酵母及黑曲霉等菌种,通过单菌株与混菌株发酵试验,研究发酵对菜籽粕中粗蛋白和抗营养因子含量的影响。结果表明,芽孢杆菌的蛋白酶活性高于其他菌株;混菌株发酵效果明显优于单菌株发酵;混菌株发酵中枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌和啤酒酵母三菌种组合发酵能较好地提高菜籽粕作为饲料蛋白的品质,此时其粗蛋白质增加率和硫代葡萄糖苷(硫苷)、唑烷硫酮(OZT)、单宁、植酸降解率分别为5.37、93.44、99.99、34.86、18.15%(干基)。     

龙须菜蛋白的提取工艺优化及降血压组分制备

目的 优化龙须菜蛋白的提取工艺,并制备降血压组分.方法 从胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶中筛选能获得最佳蛋白提取率的蛋白酶,采用单因素试验考查pH、底物浓度、酶解温度、酶底比、酶解时间对蛋白提取率和ACE抑制率的影响,采用响应面法确定最佳工艺条件,采用超滤膜分离技术龙须菜蛋白酶解液中制备血管紧张素转换酶(a...     

大鲵肌肉ACE抑制肽的制备及其稳定性

以大鲵肌肉为原料,以血管紧张素转化酶(ACE)抑制率为评价指标,通过单因素试验筛选得到3种效果较佳的单酶。在此基础上,借助混料试验,对三酶复合的配比进行优化。当风味蛋白酶、中性蛋白酶与菠萝蛋白酶质量比为0.54︰0.23︰0.23时,产物具有最高的ACE抑制率,IC50值为0.55 mg/mL。探究金属离子和体外模拟胃肠消化道酶系对对产物ACE抑制率稳定性的影响,结果显示,Zn^2+、Al^3+、Fe^2+离子能显著降低大鲵多肽的ACE抑制率,胃蛋白酶系对大鲵多肽的ACE抑制率影响较小,但胰蛋白酶系能显著降低ACE抑制率。     

产抑菌物质乳酸菌的筛选及其抑菌特性研究

目的 本文旨在筛选具有广谱抑菌活性的乳酸菌,为其在食品保鲜中的应用奠定基础。方法 以MRS和M17为培养基,对韩国传统泡菜中乳酸菌进行分离鉴定,通过琼脂孔扩散法筛选具有广谱抑菌活性的乳酸菌,并分析它的耐酸、耐胆盐能力,以及对温度、pH、发酵时间的敏感性。结果 以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌、枯草芽孢杆菌为指示菌进行抑菌活性筛选,获得一株抑菌效果最佳的植物乳杆菌PC4-5。植物乳杆菌PC4-5在酸性条件（pH=2）处理2 h后存活率达到43.79%,0.5%胆盐处理2 h后存活率达到21.02%,说明植物乳杆菌PC4-5具有较好的耐酸、耐胆盐能力。经排酸排过氧化氢试验后,发酵上清依然保留抑菌活性,蛋白酶处理后抑菌活性丧失,表明该抑菌物质为细菌素。该细菌素在pH为2-6的范围有抑菌能力,且有较好热稳定性。结论 植物乳杆菌PC4-5适用于酸性食品的防腐保存,在食品保鲜中的应用有较大的潜力。     

嗜酸乳杆菌细胞壁蛋白酶的分离纯化及酶学性质的研究

为优化CEP的分离纯化方法,采用聚乙二醇(PEG)-20000浓缩粗酶液,用超滤离心管过滤酶液,40%~60%硫酸铵盐析分级沉淀,Sephacryl-S-300HR纯化,并通过Native-PAGE切胶回收得到纯酶。所得CEP的分子质量为28.3ku,比酶活力62.066U/mg,最适温度32℃,最适pH6.5,耐热性比较强,耐酸性明显好于耐碱性。Co2+、Mg2+、Ca2+对CEP有激活作用;Ba2+、Mn2+、K+、Na+对CEP的活力影响不大;Zn2+、Ni2+则表现出较强的抑制CEP活性作用;EDTA对CEP活性有抑制作用,表明CEP是一种金属离子激活酶;PMSF对CEP有显著抑制作用,表明CEP是一种丝氨酸蛋白酶。用嗜酸乳杆菌CEP水解乳清蛋白,其酶解液对ACE的抑制率为56.31%,表明CEP水解乳清蛋白可以产生ACE抑制肽。     

不同酶切方式引发大豆蛋白构象变化及功能特性评价

本研究以枯草杆菌碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、枯草杆菌中性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解大豆分离蛋白产物为研究对象,借助十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外吸收光谱、荧光光谱、红外光谱解析不同酶切条件下蛋白产物构象变化,并对其乳化性及抗氧化活性等功能特性进行评价。结果表明：酶解促进蛋白解折叠,内部氨基酸暴露,并受到酶切方式的影响;菠萝蛋白酶酶解作用范围宽泛,疏水性氨基酸浓度达到最大值(27.10±0.08)%,氨基酸存在微环境发生改变,形成柔性结构单元,其乳化性及抗氧化性都得到明显改善,为具有最佳功能特性的酶解蛋白;酶特异性作用位点导致酶解作用程度较低的枯草杆菌碱性蛋白酶、枯草杆菌中性蛋白酶、胃蛋白酶及胰蛋白酶水解产物功能特性均高于未处理样品。值得注意的是,水解程度最低的胰蛋白酶水解产物呈现优异乳化稳定性,这是因为大豆中胰蛋白酶抑制剂抑制蛋白过度水解,提升蛋白溶解度同时,肽段长度适宜稳定包裹油滴。     

1株产广谱细菌素乳酸菌的筛选及其抑菌物质的特性

从植物性材料中筛选到1株对大肠杆菌有明显抑制作用的乳酸菌,在排除有机酸和过氧化氢的干扰后,该菌株的发酵上清液仍有较强的抑菌性;胃蛋白酶处理后,抑菌活性明显降低,说明其抑菌物质为蛋白质类物质,是一种细菌素。通过形态学和生理生化分析,初步鉴定该菌株为植物乳杆菌。生物学特性研究表明,该菌株发酵上清液经高温、吐温-80、SDS、EDTA处理后,仍保持较好的抑菌活性;在酸性条件下稳定;对蛋白酶K和胰蛋白酶较胃蛋白酶敏感。抑菌谱显示,该菌株的发酵上清液具有广谱抑菌性。     

Hydrolysis of casein: a comparative study of two proteases and their peptide maps

Gel electrophoresis (SDS-PAGE) and reversed phase-high performance liquid chromatography (RP-HPLC) techniques were used to illustrate the actions of two enzymes, a pineapple stem bromelain and a Bacillus protease ( Bacillus subtilis ), on bovine caseins. the aim of the study was to ascertain the possible future application of the enzymes in the production of bitter peptides.
The results illustrate that the individual actions of the two proteases produce hydrolysates of very different peptide composition. the Bacillus protease action on casein results in the production of a greater variety of hydrophobic, low molecular weight (<10 kDa) peptides, due to a more extensive proteinase activity. Bromelain action however results in a hydrophobic hydrolysate containing a greater number of high molecular weight peptides (>10 kDa), which are not normally associated with flavour fractions.
The results of the study, show that the hydrolysate produced by the Bacillus protease action on casein, is a greater potential source of bitter peptides for future study, than the hydrolysate produced by bromelain.     

益生菌发酵制备金针菇血管紧张素转化酶抑制肽

为了获得高活性的金针菇血管紧张素转化酶（ACE）抑制肽,该研究对益生菌发酵制备金针菇ACE抑制肽的工艺条件进行了优化,并采用超滤法对ACE抑制肽进行了分级分离和活性鉴定。试验以ACE抑制率为评价指标,对枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）和黑曲霉（Aspergillus niger）三种益生菌进行了筛选,优选出沉淀分离活性肽的最适pH,然后采用单因素和响应面设计对发酵条件进行了考察。结果表明,确定枯草芽孢杆菌为最适菌种;沉淀ACE抑制肽的最适pH为6;最佳发酵条件为蒸馏水与金针菇粉液料比5∶1（mL∶g）、发酵时间16 h、发酵温度37 ℃、金针菇粉用量35 g/500 mL三角瓶,于此条件下ACE抑制率实测值为（51.25±1.02）%;截留分子质量＜3 kDa的ACE抑制肽活性最强。