菜籽分离蛋白分子质量分布及酶解条件的研究

以脱脂"双低"油菜籽为原料,利用碱溶解酸沉淀法提取菜籽分离蛋白;用SDS-PAGE凝胶电泳研究菜籽蛋白的分子质量的组成;以水解度和氮回收率为考察指标,用响应面分析法拟合了Alcalase 2.4L酶解菜籽蛋白成菜籽肽的二次多项数学模型,优化了酶解菜籽分离蛋白的工艺参数。SDS-PAGE凝胶电泳研究表明利用碱溶解酸沉淀提取的菜籽分离蛋白主要是2S清蛋白。响应面分析法研究的试验结果表明,酶的使用量、pH、酶解温度、酶的使用量与pH的交互作用对Alcalase 2.4L酶解菜籽蛋白的水解度和氮回收率的影响均显著(P0.05)。通过求解菜籽肽的二次多项数学模型的逆矩阵方程,可得Alcalase 2.4L水解菜籽分离蛋白的最佳条件为:酶的使用量0.05 Au/g,pH 9.0,酶解温度54℃;在此酶解条件下,菜籽分离蛋白浓度为5%时,水解5 h,所得的水解度和氮回收率分别为35.12%及52.96%。     

Alcalase 2.4L酶解核桃分离蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

以核桃分离蛋白(WPI)为原料,利用Alcalase 2.4L酶解制备高活性的ACE抑制肽.以水解度和ACE抑制率为指标,通过单因素和二次回归正交旋转组合试验,优化了Alcalase 2.4L酶解核桃分离蛋白制备ACE抑制肽的工艺.得到的最佳酶解工艺条件为pH 7.94,酶解温度60℃,底物质量浓度20g/L,酶与底物质量比3.69∶100,酶解3h后,酶解产物的水解度达到24.78％,ACE抑制率达到76.58％,且在此条件下获得的ACE抑制肽具有一定的抗体内消化酶特性.     

不同酶水解马氏珍珠贝蛋白的特性研究

本研究采用Alcalase2.4L、Protamex、Papain、PTN6.0S、Flavorzyme500MG、Neutrase和内源酶水解马氏珍珠贝肉蛋白,探讨了各种酶的酶解特性、产物的氨基酸组成及肽相对分子质量分布规律和呈味特征的差异.结果表明,PTN6.0S酶解产物的蛋白质利用率、肽得率和水解度均较高,而内源酶均最低.各酶解产物中,谷氨酸,精氨酸和天冬氨酸的含量均较高.同一氨基酸在不同酶解产物中回收率存在较大差异,色氨酸、苏氨酸、脯氨酸和天冬氨酸在马氏-爹珠贝蛋白酶解产物中主要以多肽的形式存在,各酶解产物中氨基酸的回收率和释放率较高的氨基酸与各酶的主要作用位点有很好的对应关系;各种酶均能不同程度地降解马氏珍珠贝肉蛋白和相对分子质量大于5000Da的肽断.各酶水解产物肽相对分子质量分布差异主要体现在3000以下.在各酶解产物中,Papain酶解产物风味最佳,鲜味最高,苦味和腥味最低.     

草鱼源抗氧化肽的响应面法优化制备及活性评价

用5种蛋白酶(木瓜蛋白酶、Neutrase 1.5MG、菠萝蛋白酶、PTN6.0及Alcalase 2.4L)分别酶解草鱼肉糜制备抗氧化肽,发现酶解产物对DPPH自由基、羟自由基及超氧阴离子自由基清除力最强的分别是木瓜蛋白酶(IC50=2.66±0.41mg/mL)、Alcalase 2.4L(IC50=1.81±0.44mg/mL)及PTN6.0(IC50=8.57±0.32mg/mL)的酶解产物.将此三种酶进行复配,进一步用响应面分析法优化得到抗氧化肽的最佳制备条件为:酶浓度[E/S]=0.68 × 103U/g蛋白,酶解时间为3.83h,酶解温度为51.41℃,模型预测该条件下羟自由基清除力的IC50值为146.22μg/mL,而实际测定值为155.89±11.21μg/mL,与预测值吻合,且在最优条件下所得的酶解物具有较强的小鼠离体肝脂质过氧化抑制力及还原力.     

酶法制备汉麻籽蛋白抗氧化肽

采用不同蛋白酶酶解汉麻籽蛋白,确定Alcalase 2.4L碱性蛋白酶是酶解汉麻籽蛋白制备抗氧化肽的优良酶源。通过单因素和响应面回归分析,得到Alcalase 2.4L碱性蛋白酶酶解汉麻籽蛋白的优化条件为:底物浓度50 mg/mL、水解时间2 h、温度50℃、加酶量2.2%、pH 9.4。优化酶解条件下,水解度约为20%,10 mg/ mL酶解产物的DPPH自由基清除率为82.65%,显示出较好的抗氧化活性。     

核桃蛋白酶法水解工艺条件研究

研究了核桃蛋白酶法水解的工艺条件,结果表明:蛋白酶种类对核桃蛋白水解作用影响较大,Alcalase 2.4L、Neutrase 0.8L对核桃蛋白水解作用较强;Alcalase 2.4L较适宜的酶解条件为酶与底物浓度比1000U/g,pH 8.0,温度60℃;Neutrase 0.8L较适合的水解条件为酶浓度为2000U/g,pH 6.0,温度45℃;Alcalase 2.4L、Neutrase 0.8L复合酶可以对核桃蛋白进行连续水解,并能提高核桃蛋白的水解度,产物肽链长度趋近于5。     

复合酶解制备核桃多肽工艺条件的优化

采用复合酶酶解核桃蛋白,以水解度为考察指标,研究了底物质量浓度、复合酶配比、加酶量、pH、酶解温度、酶解时间对酶解的影响,并采用响应面法优化了Alcalase2.4L与胰蛋白酶复合酶解核桃蛋白的工艺参数。最佳酶解条件为:底物质量浓度40 g/L,Alcalase2.4L与胰蛋白酶的复合配比3∶1,pH7.4,酶解温度60.46℃,加酶量5.71%,酶解时间5.05 h。最佳条件下核桃蛋白水解度可达14.54%。     

复合酶解裂壶藻渣制备抗氧化肽的工艺研究

以提取油脂后的裂壶藻渣为原料采用蛋白酶进行酶解,以水解度、蛋白回收率及产物抗氧化活性为指标,确定最佳复合酶解工艺。结果表明,在p H为7.5,水解温度为50℃,料水比为1∶12(w/w),加酶量为0.5%(E/S,w/w)条件下,采用复合蛋白酶与Alcalase 2.4 L复配方式(1∶1,w/w)酶解裂壶藻渣6 h后的产物水解效果与抗氧化活性均优于其他单酶或复合酶解产物。在此条件下,酶解产物的水解度为11.15%,蛋白回收率为70.82%,羟自由基半抑制浓度IC50为1.656 mg/m L,还原力为1.417(浓度3 mg/m L),具有较好抗氧化活性。     

双酶法制备葵花籽肽的工艺研究

利用双酶法水解葵花籽分离蛋白（SPI）制备葵花蛋白肽,探讨各因素对水解度（Degree of hydrolysis,DH）和肽含量的影响,目的在于确定葵花蛋白肽制备的最佳酶解条件。结果表明：最佳酶解条件为底物浓度5.0?10-2 g/mL,温度为53.5 ℃,pH 8.5,按照[E/S]为1.0?10-2 g/g加Alcalase 2.4 L,酶解104 min,调整pH为7.5,按照[E/S]为0.44?10-2 g/g添加Flavourzyme酶解120 min。此工艺得到水解液中肽含量为4.25 mg/mL,DH为30.97%,与单酶法相比,肽含量显著提高。     

蚕蛹蛋白酶法水解及美拉德反应改良其产物风味的研究

对多种蛋白酶的酶解效果进行比较,确定了制备酶解脱脂蚕蛹粉短肽和氨基酸的最佳条件,最终确定Alcalase 2.4L和风味蛋白酶的组合为最优方案,酶解液氨基氮含量达到43.17mg/g,总肽氮含量为47.13mg/g,蛋白回收率67.72%,酶解液感官评价值最高。在同等的美拉德反应条件下,Alcalase 2.4L和风味蛋白酶复合酶解的酶解液的香气最为浓郁,腥味被掩盖。     

Enzymatic hydrolysis of wheat gluten by proteases and properties of the resulting hydrolysates

The insolubility of gluten in aqueous solutions is one of the major limitations for its more extensive use in food processing. Wheat gluten was enzymatically hydrolyzed by several commercially available proteases (Alcalase 2.4L, PTN 6.0S, Pepsin, Pancreatin, Neutrase and Protamex™) with protein recovery of 81.3%, 42.5%, 53.3%, 61.6%, 46.3% and 43.8%, respectively. The hydrolytic efficiency of these proteases on wheat gluten was also compared. Alcalase served best for the preparation of wheat gluten hydrolysates with the maximum degree of hydrolysis (DH) 15.8%. Subsequently, the solubility of wheat gluten hydrolysates (WGHs) obtained with those enzymes was comparably evaluated. The products had excellent solubility (>60%) over a pH range of 2–12. The molecular weight distribution of WGHs was further determined by SDS-PAGE and size exclusion chromatography on Sephadex G-15. The results showed that with the increasing of DH values, there occurred a large amount of smaller polypeptides.     

不同苦荞蛋白酶解产物抗氧化活性研究

以苦荞蛋白作为底物,采用碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以及胃蛋白酶加胰蛋白酶模拟体内蛋白消化,制备苦荞麦蛋白水解物。采用DPPH及ABTS~+·法比较不同的蛋白水解物与水解前苦荞蛋白的体外抗氧化活性。结果表明:不同蛋白酶水解产物水解度由高到低的顺序为:碱性蛋白酶胃蛋白酶~胰蛋白酶胃蛋白酶木瓜蛋白酶胰蛋白酶,其中碱性蛋白酶水解苦荞蛋白水解度达29.95%。苦荞蛋白本身具有一定的抗氧化能力,其中DPPH清除率及ABTS~+·清除率最高分别达71.91%及11.25%,但均显著低于阳性对照Vc。随着水解程度的增加,苦荞蛋白水解产物抗氧化能力逐渐增强。其中,以碱性蛋白酶酶解产物抗氧化活性最高,其DPPH清除率及ABTS~+·清除率最高分别为91.65%(0.5 mg/mL)及16.67%(1 mg/mL),均显著高于原苦荞蛋白。其中,碱性蛋白酶水解产物的DPPH自由基清除率在高浓度(0.5mg/mL)条件下,与阳性对照Vc持平。同时碱性蛋白酶酶解产物抗氧化性(DPPH清除率及ABTS~+·清除率)显著优于其他蛋白酶解产物。因此,苦荞麦蛋白采用碱性蛋白酶解制备苦荞水解产物可作为天然的抗氧化剂。     

酶法水解蟹壳蛋白

对水解脱钙蟹壳中蛋白质的蛋白酶进行了选择,并探讨了蛋白酶水解的条件,通过扫描电镜(SEM)观察了采用不同脱除蛋白方法处理后的甲壳素表面状态,分析了蛋白水解液中的氨基酸组成及营养价值。结果表明,Alcalase2.4 L酶比较适于水解蟹壳中的蛋白质,水解度较其他蛋白酶高。Alcalase2.4 L水解蟹壳蛋白的最适条件为:温度60℃,pH8.0,料液比1∶3,酶底物比为3 000 U/g,水解5 h后水解度可达到14%左右。酶法与碱法脱蛋白对甲壳素表面微观状态影响不同,酶法脱蛋白后甲壳素表面较光洁。水解液中的氨基酸组成与FAO/WHO建议的理想模式基本一致,鲜味氨基酸含量较高。     

Secondary structure of proteins on oil release in aqueous enzymatic extraction of rapeseed oil as affected hydrolysis state

In this study, the relationship between protein hydrolysis and oil release was studied by fluorescence microscopy and Fourier Transform Infrared (FTIR) spectroscopy, respectively. Five commercial proteases (Flavourzyme 1000L, Neutrase 1.5MG, Protamex, Alcalase 2.4L, and Thermolysin) were evaluated for oil extraction from rapeseed, and Alcalase 2.4L was found to be the best enzyme for highest free oil yield (81.81%). When use this enzyme, the results showed that parts of proteins restricted the release of oil, and the oil released almost completely was achieved after hydrolysis for 3.0 h. To further reveal the relationship between oil release and protein hydrolysis, the effects of hydrolysis time on the degree of hydrolysis of protein, and free oil yield were studied. The results showed that the release of oil was only related to the hydrolysis of parts of proteins, and when the degree of hydrolysis of protein was more than 17.05%, the effect of protein hydrolysis on oil release was greatly reduced. The intrinsic relationship between the structural changes of proteins and the release of oil in the hydrolysis process was analyzed by comparing protein secondary structure of different hydrolysis time, and the results showed that the transition of protein structure from order to disorder was an important factor for oil release.     

Proteolysis characteristics of sarcoplasmic, myofibrillar, and stromal proteins separated from grass carp and antioxidant properties of their hydrolysates

Proteolysis of grass carp sarcoplasmic, myofibrillar, and stromal proteins by 5 commercial proteases were studied. Sarcoplasmic and myofibrillar protein could be well hydrolyzed by Alcalase 2.4 L to reach high protein recoveries (PR) (71.86±2.46 and 80.77±3.05%, respectively), while the maximum PR for stromal protein was only 42.83±2.84%. However, stromal hydrolysates, containing mostly 6–10 kDa fraction, exhibited higher ·OH scavenging activities due to its high content of antioxidant-assisting amino acids. Alcalase 2.4 L and pancreatin 6.0, which produced hydrolysates with relative high degree of hydrolysis (DH), were used for further hydrolysis of whole grass carp protein with the assistance of response surface methodology (RSM). The results showed that serine proteases (Alcalase 2.4 L and pancreatin 6.0) could produce sarcoplasmic, myofibrillar, or stromal hydrolysates with relatively high PR, DH, and strong ·OH scavenging activity, which may be used to prepare antioxidant hydrolysates from grass carp.     

Alcalase 2.4L碱性内切酶和Flavourzyme风味酶酶解大豆分离蛋白及脱苦工艺优化

以大豆分离蛋白为原料,选用Alcalase 2.4L碱性内切酶和Flavourzyme风味蛋白酶对大豆分离蛋白进行酶法水解及脱苦工艺研究。以水解度和苦味分值为考察值,对酶解工艺进行优化,确定最佳条件。结果表明:Alcalase2.4L碱性内切酶最佳酶解条件为加酶量14 000 U/g、酶解温度60℃、酶解pH8.5、底物质量分数5%,酶解时间2h,最终水解度为45.34%,此时水解液苦味值为4。Flavourzyme风味蛋白酶对水解液进行二次水解的最优酶解条件为加酶量300 U/g、酶解温度55℃、酶解pH 7.0、酶解时间3 h,此条件下大豆分离蛋白水解液苦味值最低为1.2。Alcalase2.4L碱性内切酶和Flavourzyme风味蛋白酶水解大豆分离蛋白使水解度得到较大提高的同时也解决了水解液的苦味问题。     

不同酪蛋白水解物对低脂发酵乳发酵参数的影响

研究了4种蛋白酶(中性蛋白酶Neutrase、木瓜蛋白酶PA2、碱性蛋白酶Alcatase2.4L和胰蛋白酶PTN6.0S)的酪蛋白水解物对低脂发酵乳的发酵参数(滴定酸度、pH值下降速度、终点酸度和产酸速度)的影响。结果表明,酪蛋白水解物具有明显促进低脂发酵酸奶发酵、缩短发酵时间的作用,中性蛋白酶的促进发酵效果最好,木瓜蛋白酶次之,碱性蛋白酶和胰酶的效果相差不大;各添加样在整个发酵过程中发酵速度都高于空白样,甚至高于双倍接种量的空白样。综合考虑,采用木瓜蛋白酶对酪蛋白进行水解后产物最适添加到低脂发酵乳。     

花椒籽仁抗氧化肽水解用酶的筛选研究

采用Protamex、Alcalase2.4L、Flavourzyme500MG、Neutrase0.5L、木瓜蛋白酶5种酶制剂水解花椒籽仁蛋白制备抗氧化肽,以水解度(DH)、多肽含量和水解产物的总抗氧化能力(TAC)、DPPH自由基清除能力、在亚油酸体系中的抗氧化性为指标对水解过程进行了分析,结果表明,Alcalase2.4L蛋白酶是制备花椒籽仁抗氧化肽的最适水解酶,其水解物的水解度(DH)为20.42%,多肽含量为21.83mg/mL,总抗氧化能力(TAC)和DPPH自由基清除能力分别为0.44mmol/L、65.47%,此外在亚油酸体系中具有一定的抗氧化性。     

响应曲面法在鸡骨架蛋白酶解工艺中的应用

采用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和复合蛋白酶水解鸡骨架蛋白制备富含氨基酸、生物寡肽的水解液,确定了酶解的前处理条件、理想用酶及适宜添加量。结果表明,理想用酶为复合蛋白酶,其适宜添加量为2400UP/g蛋白。采用响应面(RSM)法对复合蛋白酶酶水解条件进行了优化,最终确定复合酶的酶解条件为:[S]=2.8%(蛋白),T=54.0℃,起始pH=7.0,在优化条件下水解5h时的水解度(DH)=42.39%,较常规法水解度提高了约8%～10%,氨基酸分析表明,酶解液中富含各种必需氨基酸和生物寡肽。