橙汁中的条件致病酵母菌及其控制策略

橙汁中普遍存在酵母菌,其中部分对人体是无害的。但是近年来的研究发现,一些酵母菌的存在不但会引起橙汁腐败,还会导致人体感染患病。酵母菌是橙汁中最常见的条件致病菌之一,随着人们对橙汁饮用安全和人体健康潜在威胁的深入认识,条件致病酵母菌日趋受到重视。对致病酵母菌的研究也成为生命科学研究的热点。目前已知的橙汁酵母致病菌有14种：近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)、星形假丝酵母(C.stellata)、热带假丝酵母(C.tropicalis)、无名假丝酵母(C. famata)、小丘假丝酵母(C. colliculosa)、涎沫假丝酵母(C. zeylanoides)、葡萄牙棒孢酵母(Clavispora lusitaniae)、新型隐球酵母(Cryptococcus neoformans)、汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)、葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)、东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis)、异常汉逊酵母(Pichia anomala)、粘质红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)、阿萨希丝孢酵母(Trichosporon asahii)。本文对这些橙汁中条件致病酵母菌的种类、鉴定方法及其控制策略进行了系统地的综述与评述,为橙汁生产、储藏、销售和消费提供参考。     

老白干酒曲中酵母菌多样性分析

采用微生物分离培养与分子鉴定相结合的方法,在对酒曲中的酵母菌进行分离、纯化和形态学鉴定基础上,进行菌株核糖体26S rDNA聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析技术结合的分子鉴定。并采用非培养方法,直接提取酒曲中的总DNA进行聚合酶链式反应扩增、电泳和切胶与回收,通过聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳（polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis,PCR-DGGE）法鉴定酵母菌。结果表明,采用培养方式分离到57?株6?种不同形态的酵母菌,经鉴定为5?种分子类型,分别为奥默毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）、葡萄牙棒孢酵母（Clavispora lusitaniae）、异常威克汉姆酵母（Wickerhamomyces anomalus）、胶红酵母（Rhodotorula mucilaginosa）、阿氏丝孢酵母（Trichosporon asahii）。经PCR-DGGE法鉴定得到10 株酵母菌,分别为W. anomalus、Wickerhamomyces sp.、T. asahii、热带假丝酵母（Candida tropicalis）和Candida sp.各1 株,Hyphopichia burtonii 2?株,另有uncultured Saccharomycopsis 3?株。培养与非培养两种方式共鉴定得到10 株酵母菌,分别属于8?个属,包括P. kudriavzevii、C. lusitaniae、W. anomalus、R. mucilaginosa、T. asahii、uncultured Saccharomycopsis、H. burtonii、Wickerhamomyces sp.、C. tropicalis、Candida sp.,该研究结果可为进一步研究酒曲的发酵能力提供参考。     

发酵玉米黄浆水与废糖蜜生产单细胞蛋白的菌种生长特性研究

通过对玉米提取结晶糖后的黄浆水与糖蜜中粗蛋白、非蛋白氮、总糖、还原糖、磷、水分、粗灰分、叶黄素、矿物质元素成分的分析,选择产朊假丝酵母(Candida utilis)、白地霉(Geotrichum candidum)和热带假丝酵母(Candida tropicalis)3种常见的工业酵母菌,通过对黄浆水与糖蜜混合液摇瓶发酵生产单细胞蛋白,研究三种酵母的生长特性,并筛选最佳的发酵菌种的组合。结果表明,当白地霉与热带假丝酵母两菌种等量混合发酵时,所得的单细胞蛋白干物质重量最大为5.87g,其中蛋白含量高达1.78g/100mL。     

DGGE法分析酱菜中酵母菌多样性

为了探究酱菜中酵母菌的多样性,以两种市售酱菜为研究对象,从酱菜汁中提取微生物基因组DNA。对26SrDNA基因片段进行扩增。经变性梯度凝胶电泳(denatured gradient gel electrophoresis,DGGE)技术分离混合酵母菌26SrDNA的基因条带。回收DGGE电泳中荧光度强的电泳带,经克隆后测定碱基序列,与GenBank库序列对比鉴定,并构建系统发育树。使用Quantity One软件分析DGGE凝胶图谱,分析酱菜中酵母菌的多样性。结果表明,袋装酱菜(用JA编号)样品与散装酱菜(用JB编号)样品的均匀度指数无显著差异(P0.05)。JA样品的多样性指数和丰富度指数显著大于JB样品(P0.05),表明JA样品的酵母菌种类较丰富。酱菜样品中的3条优势条带分别与Pichia fermentans(乳源酵母)、Candida tropicalis(热带假丝酵母)、Candida tropicalis(热带假丝酵母)的菌株相似,相似度分别为88%、98%、98%。两种酱菜样品的共有菌是Candida tropicalis(热带假丝酵母)。袋装酱菜样品的特有菌是乳源酵母(Pichia fermentans),散装酱菜样品没有特有菌种。     

黄浆水发酵生产SCP的菌种选配

以黄浆水为原料,采用液态发酵方式,选配适合其发酵生产单细胞蛋白(SCP)的菌种,进行单因素及正交试验。结果表明:扣囊拟内孢霉(Endomycopsis fiburiger CICC31258)、解脂假丝酵母(Candida lipolytica CICC32457)、产朊假丝酵母(Candida utilis CICC31268)、白地霉(Geotrichum candidum link SH501)是适合发酵黄浆水生产单细胞蛋白的优良菌种;菌种间的最佳发酵配比为白地霉(SH501)∶扣囊拟内孢霉(CICC31258)∶解脂假丝酵母(CICC32457)∶产朊假丝酵母(CICC31268)为2∶1∶1∶2或者3∶1∶1∶2。     

漆酶基因的克隆及其在产朊假丝酵母中的表达

为实现漆酶基因稳定高效的异源表达,利用基因工程技术构建同源整合表达载体pGQLR,删除其来自原核的DNA序列后电转化至产朊假丝酵母菌(Candida utilis,C.utilis),构建一株表达漆酶的产朊假丝酵母工程菌ZHQX1,并对其遗传稳定性和酶活进行评价.ZHQX1在连续传代100代时外源基因仍稳定存在,保持了...     

胀包酸奶有害酵母菌的分离鉴定

从吉林省收集到12份胀包酸奶样品中分离得到23株产气微生物。通过对分离菌株的表型、生理生化特征和26S rDNA序列进行分析,确定所有菌株都是酵母菌,其中东方伊萨酵母11株,马克思克鲁维酵母7株,阿萨希丝孢酵母3株,胶红酵母1株,季也蒙假丝酵母1株。本研究结果证实引起酸奶胀包的微生物菌群主要是酵母菌。     

天山冻土中嗜冷酵母菌生物多样性

采用麦芽浸膏富集平板涂布天山冻土中可培养酵母菌,通过麦芽浸膏分离培养基筛选菌株.采用酵母菌常规生理生化实验、最适生长温度、最适pH对分离菌株的生理学进行研究.以NL1和NL4为PCR扩增引物,通过26S rRNA基因D1/D2区序列同源性分析,初步确定酵母菌株的系统进化地位.分离筛选到4株嗜低温酵母菌,分属于隐球酵母(Cystofilobasidium infirmominiatum)、掷孢酵母(Sporobolomyces patagonicus)、棒孢酵母(Clavispora lusitaniae)和毕赤酵母(Pichia kluyveri).     

浓香型大曲中两株酵母菌的分离及其Biolog微生物鉴定

采取传统微生物手段从浓香型大曲中分离纯化得到两株酵母菌,对其进行菌落特征观察和镜检后,利用Biolog微生物自动鉴定系统进行鉴定.鉴定结果表明,两株菌分别是约氏掷孢酵母A(Sporidiobolus johnsonii A)和葡萄牙棒孢酵母(Clavisopora lusitaniae).     

5 种鲜切藕片胀袋微生物的分离与鉴定

为解决真空包装鲜切藕片的胀袋问题,本实验对鲜切藕片胀袋主要微生物的种类进行研究,分离出5 种优势微生物,并利用VITEK 2 Compact全自动快速微生物鉴定智能分析系统进行鉴定。得到2 株细菌,分别为阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）、蜡样芽孢杆菌（Bacilllus cereus Frankland & Frankland）;3 株酵母菌,分别为季也蒙假丝酵母（Candida guilliermondii）、无名假丝酵母（Candida famate）和葡萄牙假丝酵母（Candida iusitaniae）。     

沙城龙眼葡萄园土壤中酵母菌多样性研究

为分离筛选具有产区特色的菌种,本实验采用梯度稀释和划线分离技术,从沙城地区3 个龙眼葡萄园土壤中共分离得到210 株酵母菌。按照形态表型分为9 类,又利用核糖体5.8S rDNA-ITS 区域RFLP 方法将这9 类酵母在分子水平上进行了区分,其中两类酵母为常见酵母,分别为东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis)和热带假丝酵母(Candida tropicalis)。实验证明了该地区土壤中酵母菌的多样性。     

酒曲中酵母菌的分离鉴定及果酒发酵的初步研究

酵母菌是决定果酒品质的关键因素。采用稀释涂布平板法分离纯化酒曲中的菌株,以传统形态学及分子系统发育分析对酵母菌进行初步鉴定,从6种市售酒曲样品中分离出10株酵母菌,经 26S rDNA 序列分析,有3株为库德里亚夫毕赤酵母(Pichia kudriavzevii),1株为异常毕赤酵母(Pichia anomala),2株克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus),3株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),1株葡萄牙棒孢酵母(Clavispora lusitaniae)。通过初筛将筛选出的酵母菌CK-03用于猕猴桃汁发酵,发酵液经顶空固相微萃取-气质联用技术(solid phase microextractiongas chromatography/mass spectrometry,SPME-GC/MS)测定分析,结果显示共检测出25种挥发性成分,主要为酯类和醇类物质。     

贵州黔南地区泡制酸菜中酵母菌的分离与鉴定

采用纯培养的方法从贵州黔南地区20份自然发酵泡制酸菜中分离出115株酵母菌,通过WL培养基观察菌落特征,并结合显微细胞形态及生理生化特性,将115株酵母分为17种类型。从每种类型中挑选一株进行26S rDNA D1/D2区系列测定,通过序列分析及构建系统发育树,进行种属鉴定。结果表明：17类酵母共115株分属于11个属,其中30.43%为Kazachstania酵母、26.96%为毕赤酵母属(Pichia)、17.39%为地霉属(Geotrichum)、4.35%为假丝酵母属(Candida)、3.48%为耶罗威亚酵母属(Yarrowia)、3.48%为丝孢酵母属(Trichosporon)、3.48%为Meyerozyma酵母、2.61%为有孢汉逊酵母属(Hanseniaspora)、2.61%为Wickerhamomyces酵母、2.61%为Apiotrichum酵母、2.61%为棒孢酵母属(Clavispora)。     

两种非酿酒酵母与米曲霉互作特性研究

微生物互作在白酒酿造中扮演重要角色。费比恩塞伯林德纳氏酵母（Cyberlindnera fabianii）和葡萄牙棒孢酵母（Clavispora lusitaniae）是白酒酿造中常见的非酿酒酵母,但它们与霉菌的互作关系尚不清晰。本研究围绕感官评价、挥发性风味物质含量、酵母菌生物量、酶活力和代谢产物等方面,探讨了费比恩塞伯林德纳氏酵母HY-11和葡萄牙棒孢酵母HY-21与米曲霉（Aspergillus oryzae）M-08在酿造过程中的相互作用。结果表明,两种非酿酒酵母分别与米曲霉M-08混菌培养,费比恩塞伯林德纳氏酵母HY-11和葡萄牙棒孢酵母HY-21的生物量分别比单一酵母菌发酵提高4.96倍和0.97倍,α-淀粉酶活力分别提高70.31倍和107.73倍,表明两酵母菌对米曲霉M-08有依赖性。相比葡萄牙棒孢酵母HY-21,费比恩塞伯林德纳氏酵母HY-11与米曲霉M-08混菌发酵风味更好,发酵6 d具有浓郁哈密瓜香、酒香和酯香味,挥发性风味物质总量最高1408.97 μg/g,比单一条件下发酵提升381.87倍。米曲霉M-08与费比恩塞伯林德纳氏酵母HY-11和葡萄牙棒孢酵母HY-21有较好的相互作用,混菌发酵比单一酵母菌发酵体系游离氨基酸水平分别提高105.02和3837.29 μg/g,酯化酶活力分别增加27.67和387.82 U/g,从而促进挥发性风味物质的代谢。本研究阐明了两种非酿酒酵母与米曲霉M-08的相互关系和其风味特色,为其合理应用提供了理论依据。     

发酵木糖生产乙醇菌株的筛选与鉴定

从花圃土和腐朽树皮中各筛选得到一株可以发酵木糖产生乙醇的菌株。乙醇产量分别可达到6.98g/L和6.05g/L。经过18SrDNA同源性的分析,菌株3鉴定为间型假丝酵母（Candida intermedia）,而菌株621则为热带假丝酵母（Candida tropicalis）。对其发酵木糖、葡萄糖和混合糖的产物蒸馏后用气相色谱分析,主产物为乙醇,纯度高,副产物少。两菌株为下一步的菌种基因改造工作提供了研究基础。     

PCR-DGGE分析木瓜酵素自然发酵过程中微生物的多样性

为探究木瓜酵素自然发酵过程中的微生物多样性及变化规律,采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis,PCR-DGGE)技术分析木瓜酵素自然发酵过程中细菌和酵母的多样性及变化规律。结果表明,木瓜酵素自然发酵过程中主要细菌有植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、假肠膜明串珠菌(Leuconostoc pseudomesenteroides)、类肠膜魏斯氏菌(Weissella paramesenteroides)及不可培养的丙酸菌(Uncultured Propionibacterium sp.),其中植物乳杆菌为主要优势细菌;主要酵母有:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、假丝酵母(Candida xestobii、Candida intermedia)、毕赤酵母(Pichia guilliermondii、Komagataella phaffii、Pichia punctispora、Pichia galeiformis)、棒孢酵母(Clavispora sp.)及Cyberlindnera fabianii,其中酿酒酵母和毕赤酵母为主要优势酵母;Lac plantarum、Pic galeiformis分别与Uncultured Propionibacterium sp.、Cyb fabianii之间的亲缘性较高,与其他菌之间的亲缘性较小。木瓜酵素自然发酵过程中菌群交替生长,有一定的亲缘性,菌落结构变化较小,分布较为均匀,这为进一步的研究提供理论基础。     

武陵山区桑葚酿酒酵母菌种筛选研究

采用成熟的武陵山桑葚为原料,对其自然发酵液中的酵母菌进行筛选鉴定,经过初筛、复筛,得到4株起酵快、有明显酒香的优良的酵母菌。通过形态观察与生理生化试验鉴定,分别是红酵母属(Rhodotorula)中的胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)、有孢汉逊酵母属(Hanseniaspora)中的酒有孢汉逊酵母(Hanseniaspora vineae)、假丝酵母属(Candida)中的近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)、酵母属(Saccharomyces)中的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。并对这4种酵母菌进行了生长特性、残糖量、乙醇产量进行研究,为将来利用所筛选的酵母菌取代普通市售的葡萄酒酵母在桑葚酿酒工艺中的应用研究奠定了理论基础。     

胀袋番茄酱中分离出季也蒙假丝酵母和丛生丝孢酵母

酵母菌是单细胞真菌，广泛存在于自然界。由酵母菌引起食品腐败已有许多报道。本研究从腐败番茄酱中分离出季也蒙假丝酵母（Candida guiliermondii）和丛生丝孢酵母（Trichosporn Pullulans）。     

野生嗜杀白假丝酵母LFA418的产毒条件优化及其毒素粗提物特性

对1株分离自新疆楼兰葡萄酒厂野生白假丝酵母(Candida albicans)LFA418的嗜杀特征及其粗毒素特性进行研究。结果显示,C.albicans LFA418具有致死克鲁维毕赤酵母(Pichia kluyveri)、贝酵母(Saccharomyces bayanus)、Lachancea thermotolerans和葡萄牙假丝酵母(Candida lusitaniae)的嗜杀性。接种体积分数7%C.albicans LFA418到YEPD液体培养基中,25℃培养32 h,可以获得最大产量的嗜杀毒素;利用截留分子质量为8 000 D的透析袋制备的粗毒素,在温度分别-20、4℃时pH 4.2~4.6和pH 4.2时温度4~20℃具有嗜杀活性的稳定性。     

野生酵母的耐性研究和菌种鉴定

菌株3和621是本实验室筛选得到能发酵木糖产生酒精的野生酵母菌,具有较好的耐高渗透压生长特性,实验表明菌株3可以耐受12％的NaCl、6％的乙醇和58％的葡萄糖;菌株621可以耐受16％的NaCl、4％的乙醇和61％的葡萄糖。经过18S rDNA同源性分析,菌株3鉴定为间型假丝酵母（Candida intetmedia）,而菌株621则为热带假丝酵母（Canada tropicalis）。