4株抗致病菌Canidia albicans YTS-03的潜在工程酵母菌抗性及其抗菌能力

为了获得对致病菌Canidia albicans YTS-03具有强抗性的嗜杀酵母工程菌,以开发抗真菌制剂。对所筛选的4株优良菌株PA1、SY3-1A、DD21-2、WM1进行了耐高温性、耐酸碱性、耐盐性、抗生素抗性及抗菌能力检测。结果表明:PA1、SY3-1A、DD21-2、WM1对温度和环境pH的适应范围较宽,可以在12~37℃及pH3~9的条件下生长繁殖,并且其耐盐性存在较大的差异,分别为10%、8%、7%和4%;温度、pH和盐度均对实验菌株生长有显著影响(P<0.05)。4株菌对抗菌素较为敏感,对伊曲康唑和低浓度(5 μg/mL)的制霉菌素或低浓度(5 μg/mL)的氟康唑有抗性,并且4株嗜杀酵母菌株具有不同的抗药性特征。另外,4株嗜杀酵母菌株PA1、SY3-1A、DD21-2、WM1均能杀死白色假丝酵母、二尖梅奇酵母和热带假丝酵母,而且表现出高嗜杀活力,其菌液嗜杀因子对C.albicans YTS-03菌株的抑菌圈直径分别达到23.0、14.1、22.3和21.5 mm。     

嗜杀酵母发酵苹果酒的研究

对筛选得到的S1嗜杀酵母,通过单因素试验和正交试验确定其最佳发酵苹果酒工艺条件,结果表明,糖度25%,酸度2 g/L,发酵温度为20℃,接种量6%为其最佳工艺条件.发酵果酒澄清透明、具有苹果香气、酒体醇厚,酸甜协调.S1嗜杀酵母分泌的嗜杀毒素的活力与发酵温度和发酵基质pH值有关,在25℃、pH 4.2时毒素活力最高.(孙悟)     

嗜杀酵母的生物学特性及应用展望

嗜杀酵母能够分泌嗜杀毒素杀死特定的微生物。将嗜杀酵母作为工业生产用菌株,可以有效防止生产过程中的杂菌污染,净化发酵体系,保证发酵的正常进行;嗜杀毒素还可以制备成为抗真菌剂,用以抵制病原酵母及类酵母等微生物的侵染。综合论述了嗜杀酵母的分类学地位及生物学特性,嗜杀毒素产生和作用的机理,并阐述了环境因素对嗜杀酵母菌自身及其分泌嗜杀毒素的影响。     

嗜杀酵母的研究进展及其在酿酒工业中的应用

嗜杀酵母能够分泌毒素蛋白抑制或杀死敏感细胞,在发酵生产中利用其特性可以净化环境,提高产品的质量。文中介绍了嗜杀酵母的分布、作用机理以及嗜杀酵母质粒的提取和选育,并概述了嗜杀酵母在酿酒工业中的应用和研究进展。     

酒曲用嗜杀酵母的选育及其生长发酵特性研究

通过原生质体融合技术选育到一株嗜杀酵母Sa2,对Sa2的嗜杀特性及其和出发菌株(酿酒酵母1445)的生长发酵特性进行对比研究.结果表明,嗜杀酵母Sa2既对麸皮中的主要杂菌有不同程度的抑制作用,又不影响小曲根霉菌的正常生长;其最适生长发酵温度为30℃,最适pH值为6.5,Sa2与出发菌株相比表现出较好的耐酒精和耐糖特性;用Sa2发酵籼米酒醪酒精度可达15.2％vol.嗜杀酵母Sa2可以用于低碳模式(生料或生熟料混合)生产小曲.     

嗜杀酵母Sa2发酵籼米小曲酒的工艺研究

该文对以籼米为原料,纯种根霉曲作糖化剂,嗜杀酵母(Sa2)曲作发酵剂的小曲酒的生产工艺进行了探讨,并对影响小曲酒的出酒率和品质的因素(糖化温度、糖化时间、纯种根霉曲添加量、嗜杀酵母曲添加量、加水量和发酵时间)作了研究.确定了籼米小曲酒发酵的最佳工艺条件:纯种根霉曲加曲量0.4％,糖化温度30℃,糖化时间1d,加水量120％,发酵时间4d,嗜杀酵母曲种加曲量0.8％.     

野生嗜杀酿酒酵母的分离筛选

研究从水果中分离酵母菌约70株,经过筛选获得了5株嗜杀酵母,建立了切实有效的嗜杀酵母的筛选技术路线和方法.通过形态学特征观察、糖发酵、嗜杀酵母显微鉴定等实验,鉴定这5株嗜杀酵母均为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae).通过发酵实验,筛选到1株适宜啤酒发酵、性能良好的嗜杀酵母菌株.     

嗜杀苹果酒酵母的构建

采用核融合缺陷原生质体融合技术 ,将嗜杀质粒供体菌 5 0 45 (α ,his4,kar1— 1[KIL—K1 ]rho+ )中的嗜杀质粒转移到受体菌苹果酒酵母AW中去。用 3 5 %PEG ,3 0℃诱导融合 2 0min ,经嗜杀活性检出、小型酿造实验、遗传稳定性实验、细胞大小及体积的测定、dsRNA质粒的提取及琼脂糖凝胶电泳等实验 ,筛选出 4株遗传性状稳定、具有嗜杀活性且发酵性能良好的融合子F12、F3 0、F5 7、F65。     

响应面法优化拟威尔嗜杀酵母Cyberlindnera mrakii WM1代谢产嗜杀因子的发酵条件

以保藏于本实验室的海洋酵母菌种资源库的酵母菌株Cyberlindnera mrakii WM1为研究对象,以人类条件致病菌白色假丝酵母Canidia albicans YTS-03为嗜杀毒素抑菌活性测试指示菌,以抑菌圈直径为考察指标,对拟威尔嗜杀酵母WM1代谢产嗜杀因子的发酵条件进行优化。首先以接种量、发酵液p H、发酵温度和时间为自变量,确定其四个因素对嗜杀活性的抑菌效果影响显著,再对这四个因素进行响应面实验优化。获得WM1生长代谢产嗜杀因子的最佳发酵条件为:接种量8%,发酵液p H4.0,发酵温度21℃,发酵时间2.5 d。优化后的WM1酵母发酵液的抑菌圈的直径达到21.00 mm,比优化前(16.5 mm)提高27.3%;菌液浓度也达2.58×10~8CFU/m L,比优化前(1.9×10~8CFU/m L)提高了35.8%。同时,最优发酵条件下获得的实验结果与模型预测值相吻合,说明建立的回归模型是切实可行的。     

香蕉酒嗜杀野生酿酒酵母的筛选

该研究采用从香蕉酒醪中初筛获得的嗜杀野生酿酒酵母进行热冲击处理和紫外诱变(灯管功率20W,波长254nm,照射距离为50cm);经2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)的显色筛选,获得了5株呈深红色菌落的突变株;通过麦芽汁发酵对比,选定一株优良菌株.该菌株在麦芽汁糖度为10°BX,温度为20℃的条件下发酵7d,发酵液最终的糖度为1.71g/L,最终pH值为3.8,可溶性固形物为2.86％,酒精体积分数为4.2％vol.     

北冰洋来源广谱抗菌海洋细菌的筛选及发酵条件优化

从北冰洋海域沉积物中分离筛选广谱抗菌海洋细菌,通过形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定,并以白色念珠菌（Candida albicans）为指示菌,抑菌圈直径为响应值,通过单因素及响应面试验对其培养条件进行优化。结果表明,分离筛选出一株具有广谱抗菌性的52号菌株,其对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、大肠杆菌（Escherichia coli）、鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）、肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）均有一定的抑制作用,该菌株被鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。52号菌株的最佳培养条件为培养温度36 ℃、培养时间75 h、初始pH值6.5、转速178 r/min。在此最优培养条件下,52号菌株对白色念珠菌的抑菌圈直径为30.23 mm。     

Killer strains of Saccharomyces: application for apple wine production

The aim of this study was to evaluate possible application of killer strains Saccharomyces paradoxus CBS 3702 (K1), S. cerevisiae CBS 6505 (K2) and S. capensis CBS 7903 (K3) for apple wine production. Apple musts were obtained from Jonagold apples. The optimal pH value of killer toxins activity, the temperature of their formation and the spectrum of activity against selected wine spoilage fungal strains were analysed. The influence of yeast strains on the chemical composition, volatile profile and sensory properties of apple wines was determined using high‐performance liquid chromatography and gas chromatography methods. The pH values of 4.2 (K1, K3) and 4.6 (K2), and a temperature of 28 °C, were optimal for the action of toxins. The analysed killer strains inhibited growth of seven of the 11 tested wine spoilage fungal strains. The samples obtained using the S. cerevisiae killer strain were characterized by the highest fermentation rate, highest ethanol concentration and a balanced level of volatiles, but their taste was described as bitter. S. capensis gained the highest scores in the sensory evaluation. It could be used for semi‐sweet or semi‐dry cider production, because of the lower amounts of ethanol formation but higher synthesis of glycerol, volatile esters and higher alcohols. Copyright © 2016 The Institute of Brewing & Distilling     

一株发酵木薯酒糟的热带假丝酵母菌株的分离及营养分析

采用富集培养方法分离到一株对木薯酒糟具有良好发酵性能的耐高温酵母菌株WHCZ.经形态、生理生化及分子分类鉴定为热带假丝酵母.氨基酸分析结果表明,该菌株的总氨基酸和必需氨基酸含量均高于产朊假丝酵母1807.对木薯酒糟的发酵试验结果表明,该菌株对木薯酒糟液的COD去除率比产朊假丝酵母更高;接种酵母菌株WHCZ后,经33℃摇床培养24h,木薯酒糟固形物的粗蛋白含量由原糟的12.48％升至19.6％,粗蛋白含量提高了57.77％.     

Immunization of the industrial fermentation starter culture strain of Saccharomyces cerevisiae to a contaminating killer toxin-producing Candida tropicalis

K3 killer trait was introduced into the fermentation starter strain of Saccharomyces cerevisiae BSP 1 in order to construct immune industrial strain that produces K3 type killer toxin and was resistant to Candida tropicalis (K⁺) contamination. Protoplasts of respiration-deficient Rho^o strain of S. cerevisiae NCYC 761 (K3) and S. cerevisiae BSP 1 were fused. The resulting respiration-competent hybrid with K3 type killer activity was selected on media containing a non-fermentable carbon source and by a killer zone assay in a plate test, respectively. The fusant was similar to the parent strain in its fermentation and sugar utilization patterns, growth rate, dough-raising properties and osmotolerance. The newly constructed S. cerevisiae BSP 1 (K3) inhibited the growth of C. tropicalis in a pH range from 3.5 to 5.0 and over a temperature range of 20–30°C.     

野生蓝莓保健果酒的工艺优化

以实验室保藏的产酯酵母T1及耐酸酵母菌株YM1-1为试验菌株,野生蓝莓为原料,通过单因素及正交试验研究了初始pH值、菌种复配比例、接种量、发酵温度、SO2添加量等对蓝莓保健酒品质的影响,确定了最佳的主发酵工艺。结果显示,蓝莓果酒的最佳主发酵工艺为SO2添加量60 mg/L,产酯酵母∶耐酸酵母接种比例1∶2（V∶V）,接种量6.0%,果胶酶添加量30 mg/L,发酵初始pH值3.8,发酵温度26 ℃。在此条件下发酵得到果香浓郁、口感醇厚的低酒精度蓝莓酒,其酒精度为4.2%vol,残糖量为5.0 °Bx,感官评分为87分,花青素含量为368.5 mg/L,糖醇转化率为33.6%。     

Purification of Candida guilliermondii and Pichia ohmeri killer toxin as an active agent against Penicillium expansum

An antifungal assay with cell-free culture supernatant of Pichia ohmeri 158 and Candida guilliermondii P3 was tested against Penicillium expansum strain #2 at 25°C by measuring hyphal length and percentage conidia germination. C. guilliermondii was more effective against P. expansum conidia germination (58.15% inhibition), while P. ohmeri showed higher inhibition of mycelial growth (66.17%), indicating a probable mechanism associated with killer activity. This killer toxin (molecular mass <3 kDa) was partially purified by normal phase HPLC, using TSKgel Amide-80 analytical and preparative columns. Compared with crude extract, the killer toxin eluted from the post analytical column significantly inhibited P. expansum:% inhibition rose from 42.16 to 90.93% (C. guilliermondii) and 39.32 to 91.12% (P. ohmeri) (p < 0.05). The one-step purification process was adequate in isolating killer toxin from culture supernatant and also increased anti-Penicillium activity.     

胞外弹性蛋白酶的理化特性及其影响因素

分离得到的假单胞菌(Pseudomonas sp) 菌株具有较强的分泌胞外弹性蛋白酶的能力。经微生物发酵方法生产的弹性蛋白酶,经过盐析、透析、DEAE SephadexA2 5离子交换层析、SephadexG75凝胶过滤层析等纯化步骤,从其发酵液中得到了均一的酶制品。研究结果表明,酶的最适作用温度为5 0℃;在硼砂-硼酸缓冲液中最适作用pH为8 0左右;酶在碱性环境下( pH7 0～12 0 )稳定性较好;在37℃以下,酶的稳定性较高。超过6 0℃,酶在短时间内即失活     

木薯渣中酵母菌的分离鉴定及发酵性能测定

为筛选出适合木薯渣发酵的专用酵母菌,试验以自然发酵的堆贮木薯渣为样品,采用传统分离培养法分离得到8株酵母菌,分别命名为Y1、Y4、Y7、Y8、Y11、Y12、Y18、Y21。通过形态学、生理生化特征鉴定及26S rDNAD1/D2区序列分析,最终鉴定出菌株Y7、Y8、Y11、Y18、Y21为皱褶假丝酵母（Candida rugosa）,菌株Y1、Y4、Y12为乙醇假丝酵母（Candida ethanolica）,并对其两种代表菌株Y1和Y7进行发酵性能测试,结果表明,菌株Y1和Y7的最适培养温度分别为34 ℃和36 ℃,最适pH分别为6.5和6.0,培养16 h左右,其OD600 nm值均达到最大值,分别为2.872和2.984。