酶解燕麦蛋白质制备抗氧化肽工艺研究

通过对Alcalase、Trypsin和Pepsin酶解燕麦麸蛋白所得产物的抗氧化活性和产物得率的研究,确定Alcalase作为酶解燕麦麸蛋白制备抗氧化肽的初步用酶。在Alcalase单酶作用的基础上,研究Alcalase+Trypsin和Alcalase+Pepsin耦合酶解燕麦蛋白对产物活性的影响。通过研究Alcalase对燕麦麸蛋白的酶解速度可知,Alcalase酶解燕麦麸蛋白速度的降低主要是因底物消耗和酶活损失所致。     

秋刀鱼抗氧化肽制备及其抗氧化活性的研究

本文选择胰酶对秋刀鱼蛋白进行酶解,以蛋白质利用率和氧化自由基吸收能力(ORAC值)为指标,运用响应面分析法优化秋刀鱼蛋白制备抗氧化肽的酶解工艺,并且对酶解产物的特性进行了研究。结果表明:最优酶解条件为加酶量1085 U/g蛋白,水料比3:1,酶解时间8 h时,此时蛋白质利用率和ORAC值分别为76.86%和883.40μmol Trolox equivalent/g。秋刀鱼酶解产物的总氨基酸含量为4576.69 mg/100 mL,其中游离氨基酸和肽态氨基酸分别占34.28%和65.31%;总氨基酸中必需氨基酸占34.76%,抗氧化活性氨基酸和支链氨基酸占26.25%,说明秋刀鱼酶解产物具有较高的营养价值。秋刀鱼酶解产物中相对分子质量在1000~3000 Da之间的组分最多,占44.18%。秋刀鱼酶解产物清除DPPH·的IC50值为3.32 mg/mL,清除O2-·的IC50值为5.08 mg/mL,当秋刀鱼酶解产物的蛋白浓度为10 mg/mL时,其吸光值为0.67,说明秋刀鱼酶解产物具有较高的抗氧化活性。     

鲈鱼(Lateolabrax japonicus)蛋白抗氧化肽的酶解制备及结构鉴定

为了制备具有较强抗氧化活性的鲈鱼蛋白肽段,采用风味蛋白酶、复合蛋白酶、Alcalase 2.4 L、中性蛋白酶及木瓜蛋白酶等5种商业蛋白酶在其最适宜作用条件下水解鲈鱼鱼肉蛋白,比较分析了鲈鱼酶解产物的水解度(DH)、蛋白回收率和抗氧化活性(氧自由基吸收能力和ABTS自由基清除能力),用超高压液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)分离鉴定具有较好抗氧化活性酶解产物的肽段结构,并进一步合成肽段验证其活性。结果发现:鲈鱼蛋白的木瓜蛋白酶酶解产物不仅具有最高的DH和蛋白回收率,分别为25.61%和78.71%,同时具有最强的抗氧化活性,其ORAC值为783.56μmol TE/g,TEAC值为734.55μmol TE/g。采用UPLC-MS/MS分析鉴定木瓜蛋白酶酶解产物,共得到9条肽段,其中3条肽段具有显著抗氧化活性,分别是EYGTVVVFQ,HRDRLCVVQ和GGGAGMLLK,且EYGTVVVFQ抗氧化活性最强,其ORAC值和TEAC值分别为为1.43μmol TE/μmol和2.34μmol TE/μmol。本研究结果为深入研究开发鲈鱼抗氧化肽和海洋蛋白资源提供了更多理论基础。     

响应面法优化麦胚清蛋白制备抗氧化肽的酶解工艺

选择合适的蛋白质水解酶是制备高活性抗氧化肽的关键。以小麦胚芽清蛋白为原料,酶解产物的DPPH自由基清除率以及ORAC值为指标,从4种蛋白酶(胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶)中,筛选得出中性蛋白酶为最佳用酶。然后通过响应面法对中性蛋白酶酶解工艺条件进行了优化。结果表明,中性蛋白酶酶解麦胚清蛋白的最佳酶解参数为:底物浓度2.4%、加酶量5 900 U/g、酶解p H 7.04、酶解温度55℃、酶解时间4 h。此酶解条件下,其1 mg/m L酶解产物的DPPH自由基清除率为65.93%,100μg/m L酶解产物的ORAC值为1 291.32μmol Trolox当量/g多肽。     

草鱼源抗氧化肽的响应面法优化制备及活性评价

用5种蛋白酶(木瓜蛋白酶、Neutrase 1.5MG、菠萝蛋白酶、PTN6.0及Alcalase 2.4L)分别酶解草鱼肉糜制备抗氧化肽,发现酶解产物对DPPH自由基、羟自由基及超氧阴离子自由基清除力最强的分别是木瓜蛋白酶(IC50=2.66±0.41mg/mL)、Alcalase 2.4L(IC50=1.81±0.44mg/mL)及PTN6.0(IC50=8.57±0.32mg/mL)的酶解产物.将此三种酶进行复配,进一步用响应面分析法优化得到抗氧化肽的最佳制备条件为:酶浓度[E/S]=0.68 × 103U/g蛋白,酶解时间为3.83h,酶解温度为51.41℃,模型预测该条件下羟自由基清除力的IC50值为146.22μg/mL,而实际测定值为155.89±11.21μg/mL,与预测值吻合,且在最优条件下所得的酶解物具有较强的小鼠离体肝脂质过氧化抑制力及还原力.     

花生抗氧化活性肽制取工艺的研究

采用Alcalase及Neutrase蛋白酶酶解花生粕中的蛋白,制取花生抗氧化活性肽。在相同条件下,通过测定水解度得出Alcalase的水解效果比Neutrase好。通过正交试验得出Alcalase最佳水解条件为：底物质量分数8％,酶加量4％,pH8．0,温度55℃,时间2h。在最佳条件下水解度为17．95％。通过油脂的抗氧化试验,证明花生抗氧化活性肽具有明显的抗氧化活性,5％的花生抗氧化活性肽抗氧化效果与3％的VE抗氧化效果相当。     

大豆蛋白酶解产物抗氧化活性与水解度相关性研究

利用碱性蛋白酶Alcalase 2.4L水解大豆分离蛋白,研究了底物浓度、加酶量、p H、温度因素对酶解液水解度和还原力的影响,并在此基础上用响应面分析法优化酶水解条件。以还原力为主要指标考察酶解产物的抗氧化活性,通过水解度与还原力的比较,得到Alcalase 2.4L碱性蛋白酶酶解大豆分离蛋白产物的抗氧化活性与水解度之间没有直接线性关系。在实验得到的最佳条件下制备的大豆肽抗氧化活性良好,具有良好的应用前景。     

ORAC法对薰衣草非精油组分的抗氧化活性研究

目的:评价薰衣草非精油组分3个样品及30个流分的抗氧化能力。方法:采用ORAC法(Oxygen Radical Absorbance Capacity,氧自由基吸收能力法或称荧光衰减法)进行研究。结果:计算得HP-20洗脱物(1.0200 mg/mL)ORAC值最高,为209.54μmol Trolox当量/g(n=6),抗氧化能力:HP-20洗脱物聚酰胺洗脱物70%乙醇提取物。用制备液相分离得到的30个流分中,同一浓度条件下,8#样品(1.0333 mg/mL)ORAC值最高,为395.04μmol Trolox当量/g(n=6),按照流分实际浓度计算,5#样品(0.7740 mg/mL)ORAC值最高,为224.09μmol Trolox当量/g(n=6)。结论:薰衣草非精油组分3个样品及30个流分均具有一定的抗氧化活性,聚酰胺及HP-20纯化后的样品比提取物的ORAC值有所提高,抗氧化活性略有增强,30个流分中5#样品抗氧化活性最强。     

双酶法制备花生抗氧化肽

研究碱性蛋白酶(Alcalase)和风味蛋白酶(Flavourzyme)分步水解花生粕制备花生抗氧化活性肽的工艺条件。结果表明:Alcalase的添加量为0.048AU/g pro,其最佳的底物质量分数为4%,pH值为8.0、酶解时间180min、酶解温度60℃。然后向Alcalase水解液中添加Flavourzyme,添加量为15LAPU/g pro,pH值为7.0、酶解温度50℃、酶解时间180min。在此条件下,花生抗氧化肽得率为90.28%,体系水解度达33.73%,所得花生肽分子质量在5000D以下的为96.92%,具有显著的抗氧化活性。     

挤压预处理结合可控酶解制备抗氧化大豆肽的研究

采用挤压预处理结合可控酶解制备大豆分离蛋白肽,优化挤压条件,确定挤压工艺条件为物料含水率20%、挤压温度150℃。选用木瓜蛋白酶、Alcalase、复合蛋白酶三种酶分别进行酶解,发现挤压对Alcalase的酶解效果影响最为显著,可使酶解液中蛋白质回收率提高12.29%,肽得率提高11.72%。经凝胶渗透色谱(GPC)分析可知,经过挤压预处理的蛋白酶解液中高分子量的组分含量减小。体外抗氧化实验证实,挤压预处理可使酶解产物清除DPPH·、ABTS+·的活性显著提高,表明挤压后的蛋白酶解产物抗氧化活性提高。     

花生抗氧化肽的制备及其在卷烟滤嘴中的应用

以超高压微射流均质(0 MPa、60 MPa、100 MPa、160 MPa)对低温花生粕蛋白预处理后再用Alcalase 2.4L酶解,发现60 MPa均质处理可提高蛋白回收率及水解度,且酶解产物的抗氧化能力指数(ORAC值)及DPPH.清除率也增加;酶解4h后ORAC值达到最高(1943.6 μmol Trolox...     

不同蛋白酶对小麦蛋白酶解物抗氧化活性的影响

小麦蛋白是小麦淀粉加工的副产物,酶解是提高小麦蛋白溶解性和功能性的有效方式,而酶解用酶种类可能对酶解产物的功能性如抗氧化活性有一定影响。采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶6种常用的蛋白酶分别对小麦蛋白进行酶解,并对酶解4 h后酶解物的多肽得率、分子质量分布、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率、超氧阴离子自由基(O_2~-·)清除率、羟自由基(·OH)清除率等反映水解程度和抗氧化能力的主要指标进行评价。结果表明,风味蛋白酶酶解物中多肽得率最高,达91.44%,且分子质量小于3 000 D的多肽含量达76.9%;酶解物质量浓度为3 mg/m L时,木瓜蛋白酶酶解物对DPPH自由基清除作用最好,清除率为65.12%(P0.01),其次是风味蛋白酶(58.43%)和碱性蛋白酶(55.29%);碱性蛋白酶酶解物对O_2~-·清除率效果最好,清除率为58.68%(P0.01),其次是风味蛋白酶(49.25%);碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解物对·OH清除效果最佳,清除率分别为59.23%和58.16%。结果说明,蛋白酶种类对小麦蛋白酶解物抗氧化活性影响显著,风味蛋白酶对提高蛋白水解程度和生成小分子质量多肽的作用明显,而碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶对提高酶解产物抗氧化活性效果较好。     

菜籽蛋白水解物体外和细胞内抗氧化性评价及氨基酸分析研究

以“双低”油菜籽秦优7号为原料,碱溶酸沉法获得菜籽分离蛋白后进一步用Alcalase2.4L酶解得到菜籽蛋白水解物（rapeseed protein hydrolysates,RPHs）;采用聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶柱（Sephacryl S-100HR）对RPHs进行分离纯化,得到3 个组分;采用抗氧化能力指数（oxygen radical absortion capacity,ORAC）方法以及细胞抗氧化活性（cellular antioxidant capacity,CAA）的方法分析筛选得到抗氧化性最好的组分3。结果表明组分3的ORAC值为（1610.38±112.51）μmol TE/g;CAA值为（124.66±2.18）μmol QE/g,EC50值为（57.84±3.38）μg/mL;在此基础之上,对组分3进行氨基酸分析以及电泳分析,表明其抗氧化性与分子质量分布及氨基酸组成可能存在一定关系。     

桑叶蛋白抗氧化肽的酶法制备

为了提高桑叶蛋白MLP的抗氧化活性,用碱性蛋白酶Alcalase、复合蛋白酶Protamex、木瓜蛋白酶Papain、风味蛋白酶Flavourzyme、中性蛋白酶Neutrase及胰蛋白酶Trypsin等6种蛋白酶对MLP进行单酶酶解及双酶、三酶复合酶解,并对酶解前后的化学组成、分子量分布、多肽得率、氨基酸组成、自由基清除能力、还原能力等进行对比分析。结果表明,MLP主要由分子量大于6.5 ku的大分子肽及蛋白质组成,酶解物则主要由分子量为0.3~0.6 ku的小肽及0.6~6.5 ku的多肽组成;相较于过度酶解,适度酶解能更好的改善MLP的抗氧化活性;多肽得率与自由基清除能力显著正相关(r=0.916~0.985);6种蛋白酶中,碱性蛋白酶、中性蛋白酶及复合蛋白酶的酶解物抗氧化活性显著优于MLP及其他三种蛋白酶解物;中性蛋白酶单独酶解物的抗氧化活性显著优于双酶、三酶复合酶解物。对中性蛋白酶的单酶酶解条件进行优化,结果表明底物浓度为20 mg/mL,E/S为1%(W/W),用中性蛋白酶酶解2 h所得的酶解物(NH)的抗氧化活性最高,后期研究中可选用中性蛋白酶制备桑叶蛋白抗氧化肽。NH或许可以作为食品中较有潜力的抗氧化剂。     

不同食用菌菌糠多糖的组分分析与抗氧化活性评价

目的：比较茶树菇、香菇、白玉菇、平菇和蛹虫草菌糠多糖的组成与抗氧化性。方法：通过酶解水提、乙醇沉淀和Sevag法脱蛋白步骤获得5 种菌糠多糖,进一步对其组成和抗氧化性进行分析评价。结果：5 种菌糠多糖均具有不同程度的抗氧化性,其中茶树菇菌糠多糖的氧自由基清除能力（oxygen radical absorbance capacity,ORAC）值和铁离子还原能力（ferric reducing antioxidant power,FRAP）值最佳,分别达到了1 215 μmol Trolox/g和281 μmol Fe2+/g;而白玉菇与平菇的菌糠多糖对2,2’-联氮基双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azinobis（3-ehtylbenzothiazolin-6-sulfnicacid）diammonium salt,ABTS）自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力较强。     

Bioactive properties of Kilka (<Emphasis Type="Italic">Clupeonella cultriventris caspi</Emphasis>) fish protein hydrolysates

Whole common Kilka fish was hydrolyzed separately using four commercial enzymes, Alcalase, Neutrase, Protamex at 50 °C and Pepsin at 37 °C for 30, 60 and 90 min. Degree of hydrolysis, angiotensin-I-converting enzyme (ACE) inhibitory activity and antimicrobial activity of each hydrolysate against Gram-negative (Escherichia coli, Salmonella enteritidis) and Gram-positive (Staphylococcus aureus, Listeria innocua) bacteria were studied. Results showed that the degree of hydrolysis for all enzymes was in the range of 2.63–3.36%. Electrophoresis profiles of the Kilka protein hydrolysates showed that most of produced peptides were in the range of 30 D but Alcalase and Neutrase had a better performance in the production of low molecular weight peptides in the range of 10 D. This led to increase the antimicrobial activity against the examined bacteria at the concentration of 200 µg/mL peptide solution. The Neutrase enzyme produced hydrolysate with the highest ACE inhibitory activity (53%?±?1.8 at 500 µg/mL). Antimicrobial activity of Kilka protein hydrolysates using Protamex and Pepsin was lower than the others due to lack of considerable amount of small peptides. The current research has demonstrated that the peptides derived from the enzymatic hydrolysis of Kilka fish protein in optimum conditions are capable of being converted to antimicrobial and antihypertensive agents to be used in functional foods.     

糙米体外消化过程中酚类物质含量及抗氧化活性

以糙米为对象,围绕其体外消化过程酚类物质及抗氧化活性变化开展研究。结果表明：粳型糙米中总酚含量显著高于籼型糙米（约1.5?倍）。胃和小肠消化显著促进粳型和籼型糙米中酚类物质释放（P＜0.05）,其释放量（以没食子酸当量计）最高值为460.9?mg/100?g和401.1?mg/100?g,粳型糙米中酚类物质释放量显著高于籼型糙米;两者酚类物质释放量随消化时间变化趋势均符合幂函数模型。铁离子还原/抗氧化能力（ferric-reducing antioxidant power,FRAP）和氧自由基清除能力（oxygen radical absorbance capacity,ORAC）实验表明糙米体外消化过程中释放的酚类物质具有良好抗氧化能力,粳型和籼型糙米消化液FRAP值（以Trolox当量计）最大为10.76、8.44?μmol/g,ORAC值（以Trolox当量计）最大为6.82?μmol/g和6.23?μmol/g。     

生物解离大豆蛋白酶解物体外模拟消化抗氧化活性变化

挤压膨化大豆在生物解离过程中,通过酶解（碱性蛋白酶、风味蛋白酶）产生的大豆蛋白酶解物（soybean protein hydrolysate,SPH）有良好的抗氧化活性,因此,需要探索模拟胃肠道（gastrointestinal,GI）消化对蛋白酶解物抗氧化活性的影响。分别以蛋白酶（碱性蛋白酶、风味蛋白酶）酶解得到的SPH和经过模拟GI消化后的产物作为研究对象,采用水解度、氨基酸组成、分子质量分布、氧化自由基吸收能力（oxidative radical absorption capacity,ORAC）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力及2,2’-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt,ABTS）阳离子自由基清除能力对样品抗氧化活性进行分析。结果显示：相对于风味蛋白酶酶解,采用碱性蛋白酶进行酶解时抗氧化活性更高;但是经过模拟GI消化后,风味蛋白酶酶解得到的SPH抗氧化活性更高,ORAC为69.15 μmol/mg、DPPH自由基清除能力为27.29%、ABTS阳离子自由基清除能力为56.21%,肽的相对含量更高,为75.86%,并且肽中具有抗氧化活性的氨基酸含量更高,分子质量小于1 kDa的肽相对含量最高,为17.35%。     

番茄果胶和半纤维素抗氧化活性分析

为了探究番茄细胞壁中不同类型果胶和半纤维素的抗氧化活性,利用水、EDTA、Na₂CO₃、4% KOH和24% KOH溶液分步提取,得到水溶性果胶(WSP)、离子结合型果胶(CSP)、共价结合型果胶(SSP)、松散结合型半纤维素(LH)和紧密结合型半纤维素(TH)五种组分,对各组分进行了氧自由基吸收能力(ORAC)、DPPH自由基(DPPH·)清除能力、ABTS自由基(ABTS+·)清除能力和铁离子还原能力(FRAP)的分析。结果表明,番茄WSP含量显著高于CSP和SSP,为1.05 mg GalUA/g FW,TH含量显著高于LH(p<0.05),为0.09 mg Glu/g FW。番茄不同类型果胶和半纤维素均具有一定的抗氧化活性。其中,CSP的ORAC、DPPH·清除能力和ABTS+·清除能力较强,综合抗氧化活性较高。在5 mg/mL时,CSP的ORAC值相当于76.4 μmol/L Trolox,DPPH·和ABTS+·的清除率分别达到61.0%和99.8%。而SSP、LH和TH具有较强的FRAP。相关性分析表明各组分与抗氧化活性密切相关。研究结果为番茄的综合加工利用和作为功能性食品添加成分的开发提供了理论根据。     

Squid gelatin hydrolysates with antihypertensive, anticancer and antioxidant activity

Gelatin obtained from giant squid (Dosidicus gigas) inner and outer tunics was hydrolyzed by seven commercial proteases (Protamex, Trypsin, Neutrase, Savinase, NS37005, Esperase and Alcalase) to produce bioactive hydrolysates. The Alcalase hydrolysate was the most potent angiotensin-converting enzyme (ACE) inhibitor (IC₅₀ = 0.34 mg/mL) while the Esperase hydrolysate showed the highest cytotoxic effect on cancer cells, with IC₅₀ values of 0.13 and 0.10 mg/mL for MCF-7 (human breast carcinoma) and U87 (glioma) cell lines, respectively. The radical scavenging capacity of gelatin increased approximately 3-fold for Protamex, Neutrase and NS37005 hydrolysates and between 7 and 10-fold for Trypsin, Savinase, Esperase and Alcalase hydrolysates. Trypsin, Savinase, Esperase and Alcalase hydrolysates had a metal chelating capacity above 80% whereas Protamex, Neutrase and NS37005 hydrolysates registered less than 25%. The antioxidant activity measured by FRAP (ferric ion reducing power) was largely unaffected by the enzyme used, increasing approximately 2-fold for all hydrolysates. The most active hydrolysates (Alcalase and Esperase) were comprised mostly of peptides with molecular weights ranging from 500 to 1400 Da, however, a clear relationship between bioactive properties and molecular weight distribution of all the hydrolysates was not fully established.