海参体壁粗蛋白酶的提取及酶学性质研究

研究了海参体壁粗蛋白酶的提取方法和酶学性质，最佳提取条件为紫外线下照射30min，硫酸铵饱和度梯度为40％～60％。粗蛋白酶的最适pH值为5．0，最适反应温度为50℃，酶在50℃以下稳定性良好。在pH1．0-7．0范围内，Ca^2＋对酶有激活作用，Mn^2＋、Cu^2＋对酶有抑制作用。提取的海参体壁蛋白酶是一种含有巯基的，类似胰蛋白酶的酶类。     

纺织用酸性蛋白酶的性质及其在羊毛处理中的应用

以蛋白酶水解羊毛的能力来衡量自制酸性蛋白酶的活力，对自制酸性蛋白酶的性质及其在羊毛细化处理中的应用进行研究。发现所用酸性蛋白酶最适作用温度为40℃，最适作用pH值为3．0；一些金属离子在一定条件下可提高蛋白酶的活力，促进蛋白酶对羊毛纤维的减量细化．除温度、pH值外，酶用量、浴比、表面活性剂JFC的用量对蛋白酶水解羊毛的效果也有一定的影响。用所制得的酸性蛋白酶处理64支内蒙古羊毛的最佳条件为温度40℃，pH值3．0，酶用量4％，浴比1：25．JFC0．9％。     

中温α-淀粉酶的酶学性质研究

通过盐析、DEAE．FF和Superdex．75,对BacillusamyloliquefaciensM23产生的α-淀粉酶进行了纯化,得到电泳纯的α-淀粉酶,纯化倍数为29．61,活力回收率为20．06％。用SDS．PAGE测得该酶的分子量为58kD。该酶的最适反应温度为55℃,最适反应pH值为6．0。纯酶液在pH7．O～10．0缓冲液中室温放置24h,可保持80％以上活力。55℃保温15rain,基本丧失活力,添加10mmol／L的Ca2＋能显著提高酶的热稳定性。Ca2＋、Mg2＋和CO2＋具有激活该酶活性的作用,EDTA抑制酶的活性。60℃,以可溶性淀粉为底物的Km,Vmax,分别为4．33g／L、1．19g／L·min。薄层层析结果表明该酶水解淀粉生成糊精和寡聚糖。     

米曲霉40188产中性蛋白酶、α-淀粉酶特性的研究

通过对米曲霉40188产酶特征及中性蛋白酶及α-淀粉酶酶学特征的研究,得出米曲霉40188制曲最佳时间为50～72 h,中性蛋白酶和α-淀粉酶酶活在40℃稳定,随着温度升高酶活降低,但α-淀粉酶的热稳定性较中性蛋白酶强,中性蛋白酶的最适pH为7～8,α-淀粉酶的最适pH为6～8,α-淀粉酶的耐盐性较中性蛋白酶强,中性蛋白酶酶活随着盐浓度的增加呈下降趋势。     

天然有机物对中性蛋白酶活力的影响

本文探讨了两种不同天然有机物对1398中性蛋白酶活力的影响，测试了该蛋白酶的最适作用条件，即最适温度为50℃，最适pH值为7．6。较系统地分别考察了不同浓度的天然有机物H、天然有机物K及H与K同时对1398中性蛋白酶活力的影响，结果表明对酶活均有不同程度的激活，其中天然有机物H和K同时作用于蛋白酶，提高酶活最为显著。     

一种米曲霉耐盐蛋白酶的纯化及酶学性质分析

采用硫酸铵沉淀、Q-HP阴离子交换柱和Superdux 75凝胶柱等技术,从酱油大曲中纯化得到一种耐盐蛋白酶,经飞行时间质谱鉴定为钙蛋白酶RIM13,属于一种半胱氨酸蛋白酶。该蛋白酶的最适温度为50?℃;最适pH值为6.5;稳定温度为40?℃;稳定pH值为7.0;Mn2＋促进蛋白酶活力,Fe3＋、Fe2＋、Cu2＋、Ca2＋、K＋、Na＋抑制蛋白酶活力,以上金属离子对蛋白酶二级结构也产生不同程度的影响;米氏常数Km为2.43?g/L,最大反应速率Vm为103.09?mg/（L·min）。在5、10?g/100?mL和15?g/100?mL的NaCl质量浓度条件下,蛋白酶保留的酶活力分别为77.22%、54.39%以及41.15%。该蛋白酶在高盐度环境下保持较高的酶活力,因此具有潜在的工业应用价值。     

两种脱毛蛋白酶活力的研究

本文对两种常用的脱毛蛋白酶（2709碱性蛋白酶与A．S1398蛋白酶）在不同pH值、温度等条件下的活力变化情况进行了研究。结果表明：2709蛋白酶的活力最适pH值为9．5～10，A．S1398蛋白酶为7．5～8．0且2709酶的pH值适应范围更广，对pH值的敏感度更低；两种酶活力的温度变化曲线具有相似性，温度越高，它们的活力衰减得也越快；两种蛋白酶受Mn抖强激活，Cu^2＋、Cr^3＋、Fe^2＋、Zn^2＋等离子则对其有抑制作用；表面活性剂如洗衣粉、平平加和JFC等对两种酶具有一定的激活作用。     

宇佐美曲霉木聚糖酶粗酶性质研究

本文对宇佐关曲霉(Asp．usamii)产木聚糖酶的产酶进程进行了分析，28℃固态静置培养72h，酶活力可达到7442IU／g干曲。粗酶酶学性质研究表明：该木聚糖酶的最适反应温度50℃，低于50℃时较稳定；酶的最适pH4．6，pH稳定范围为pH5．0-10．0。Ca^2 对酶有激活作用，而Mn^2 、Mg^2 、Ba^2 则具有强烈的抑制作用。     

黑曲霉产β-呋喃果糖苷酶酶学性质研究

对来源于黑曲霉的β-D-呋喃果糖苷酶的酶学特性进行了研究。结果表明,β-D-呋喃果糖苷酶的最适pH值为5．0,最适温度为50％。在40℃～60℃、pH值5．0～7．0其具有较好的稳定性。金属离子对β-呋喃果糖苷酶活性有影响。Mn^2＋和Ca^2＋能明显增强酶活,而Cu^2＋和Ag^2＋能抑制酶活。     

红曲霉产蛋白酶特性研究

通过对红曲蛋白酶活力的测定初步研究了红曲蛋白酶的特性。实验表明，红曲霉分泌蛋白酶的旺盛期在培养的第4d～6d。红曲蛋白酶的最适反应pH4．0～8．0，在pH5．0～6．0有较好的稳定性。红曲蛋白酶的最适反应温度在35℃-45℃，40℃时酶活力最大。红曲蛋白酶在35℃-40℃有较好的热稳定性。0．5％硫酸铜和0．5％醋酸铅对红曲蛋白酶有抑制作用，0．5％氯化钠对红曲蛋白酶则有激活作用。     

响应面法优化解淀粉芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件

在单因素试验的基础上,应用响应面法对解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）GZUB-7产中性蛋白酶的发酵条件进行优化,以达到提高菌株产中性蛋白酶酶活力的目的。结果表明,发酵培养基的最佳组分为葡萄糖用量50 g/L、豆粕粉40 g/L、CaCl2添加量0.44 g/L;最适发酵条件为发酵温度40 ℃、初始pH 7.0、接种量6.0%、发酵时间40 h,在此条件下,该菌株产中性蛋白酶酶活力达到192.7 U/mL。     

海藻糖合成酶产生菌筛选、鉴定及其产酶特性

以麦芽糖为唯一碳源高盐培养基,经高温培养,从温泉水样及其附近土壤中筛选得到一株菌株T2,经过生物合成途径初步验证,该菌株产海藻糖合酶,能够通过海藻糖合成酶（TreS）途径将麦芽糖转化为海藻糖。菌株T2为革兰氏阳性菌,杆状,有芽孢,经过生物学鉴定,将其初步鉴定为芽孢杆菌属（Bacillus sp.）。对其产海藻糖合酶的酶学性质进行了研究：酶反应最适作用温度为60 ℃,在60 ℃条件下保温100 min仍能保持酶活性80.7%;最适作用pH值为7.0,在pH 6.0～7.5范围内稳定。采用正交试验对其发酵培养基配方进行了优化研究,确定了最佳的培养基组成为牛肉膏3.0 g/L,麦芽糖20.0 g/L,蛋白胨7.5 g/L,无机盐（K2HPO4＋NaH2PO4＋MgSO4·7H2O）3.0 g/L。在此条件下,菌株T2产海藻糖合酶酶活力达到310.6 U/L。     

芽孢杆菌B15胞外蛋白酶和淀粉酶的酶学性质研究

为探索芽孢杆菌B15胞外蛋白酶和淀粉酶在饲用酶制剂方面的应用,试验对其产酶情况及胞外酶的酶学性质进行了研究。结果显示,该菌株产蛋白酶和淀粉酶的最高酶活性分别为(181.9±3.5)U/mL和(50.2±1.6)U/mL。蛋白酶和淀粉酶的最适作用温度范围分别为40℃～50℃和40℃～70℃,最适作用pH值为7和5～7。蛋白酶和淀粉酶经40℃～50℃热处理,以及在pH值为5～9的缓冲液中较稳定。蛋白酶被EDTA所抑制,属金属蛋白酶,金属离子(10mmol/L)Mg2+和K+对其有激活作用,Fe2+有抑制作用,而Fe2+对淀粉酶有一定的激活作用。     

Actinomucor elegans、Aspegillus oryzae和Rhizopus oligosporus产蛋白酶条件及蛋白酶性质的比较

比较了腐乳生产菌株Actinomucor elegans、豆酱和酱油生产菌株Aspegillus oryzae以及天培生产菌株Rhizopus oligosporus产生蛋白酶的条件和所产蛋白酶的性质。结果表明,不同的菌株产酶条件及蛋白酶的性质有较大的差异:少孢根霉主要产生酸性蛋白酶,在pH2.5-4.0的酸性介质中、32℃条件下培养时产酶能力较强,所分泌的蛋白酶系在pH5.0时酶活力最高,在pH5.0附近最稳定;米曲霉可以产生酸性、中性及碱性蛋白酶,所产生的蛋白酶活力显著高于少孢根霉和毛霉,米曲霉在酸性条件下产酸性蛋白酶能力强,在中性条件下产中性蛋白酶能力强,在碱性条件下产碱性蛋白酶能力强,在28-32℃时产酶能力强,所分泌的蛋白酶系在pH5.0-9.0的广泛范围内有很强的活力,在pH6.0-8.0的范围内稳定性强;毛霉可以产生酸性、中性及碱性蛋白酶,但酶活力明显低于米曲霉,毛霉在中性偏酸性(pH5.5)的介质中产酸性蛋白酶的能力较强,但介质的酸碱度对毛霉产中性及碱性蛋白酶没有影响,在28℃时产酸性、中性和碱性蛋白酶的能力都比较强,毛霉所分泌的蛋白酶系在pH5.0-9.0的广泛pH范围内有活力,在pH5.0-6.0时酶活力最高,在pH5.0-7.0时稳定强。     

酶解南美白对虾下脚料制备抗氧化酶解液的研究

以南美白对虾加工下脚料(虾头虾壳)为原料,采用内源酶、中性蛋白酶,通过控制pH、水料比、酶解温度、酶解时间和酶用量等条件进行酶解,从而制取抗氧化酶解液,以还原能力、清除羟基自由基能力为指标选择最优的酶解条件。结果表明,内源酶最佳酶解条件为:pH为6,水料比为2∶1,酶解温度为40℃、酶解时间为6h,此时还原力为0.668,·OH清除率为67.24%;中性蛋白酶的最佳酶解条件为:酶用量为60U/g原料,pH为6,水料比为2∶1,酶解温度为60℃、酶解时间为5h,此时还原力为0.672,·OH清除率为68.43%。在最佳酶解条件下,两种酶解液的还原力与·OH清除率大小排列为:中性蛋白酶>内源酶,但两者相差不大,从经济能源的综合因素考虑,选用内源酶较合适。     

牛蒡菊糖酶法提取

采用固定化酶法提取牛蒡菊糖。结果表明酶水解提取牛蒡菊糖的最佳工艺为：13.5g/100mL 中性蛋白酶、pH 7、固液比1:15、50℃、酶水解6h,菊糖提取率为14.57%;固定化酶制备最佳工艺为：以甲醛(40%):NaOH(2mol/L)=2:3 为凝结液、pH7.5、壳聚糖2.5g/100mL、60℃、加酶量7.5mg/mL,固定8h,酶活力回收率可达到39.13%;固定化酶提取牛蒡菊糖最适条件为：pH7、固液比1:15、60℃、固定化酶加入量13. 5 g/100mL、酶解5h,在此条件下菊糖提取率达到12.89%。固定化酶的稳定性与游离酶相比有显著的提高,连续反应10 次后,固定化酶仍然具有良好的使用性能,此时牛蒡菊糖的提取率为9.42%。     

天山冻土中产低温蛋白酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质

借助形态观察、生理生化指标测定及16S rDNA序列分析,对从新疆天山冻土中筛选得到的产低温蛋白酶菌株进行鉴定,确定其为Pseudomonas sp.(假单胞菌属)N-8。通过单因素试验和正交实验对其发酵条件进行优化,确定最佳发酵培养基配方为(g/L):葡萄糖10,酵母粉8,酪蛋白20,K+0.4,pH 7.0。酶学性质研究表明,该菌产生的低温蛋白酶最适作用pH为7.0,在pH 7.0～8.0呈现良好的稳定性;最适作用温度为25℃,在25、35、45℃下均呈现良好的稳定性;金属离子Cu2+、K+、Ca2+、Mn2+对酶活有一定的抑制作用,其中Cu2+抑制作用明显,Fe2+、Mg2+、Na+、Zn2+对酶活力有不同程度的激活作用。     

响应面法优化猪脾免疫活性多肽提取工艺研究

目的通过响应面法,优化猪脾中免疫活性多肽的提取工艺。方法选择适当的酶水解猪脾脏,并在单因素试验的基础上,采用Box—Behnken设计优化提取工艺,建立各因素与提取液中多肽含量的数学模型,最后采用淋巴细胞转化试验初步验证其活性。结果获得了猪脾中免疫活性多肽提取工艺：料液比1：2．6g／mL,温度40℃,pH7．0,胰蛋白酶浓度485U／g,中性蛋白酶浓度1711U／g,每100g含活性多肽2．930g,与理论计算值2．929g基本一致,活性约为对照组的1．5倍。结论确定了猪脾免疫活性多肽最佳提取工艺。     

淀粉液化芽孢杆菌BS5582中性蛋白酶基因的克隆表达及其酶学性质研究

以一株高产中性蛋白酶的Bacillus amyloliquefaciens BS5582基因组DNA为模板,PCR扩增获得结构基因npr,构建质粒pPIC9K-npr,并转化到表达菌株毕赤酵母GS115中得到重组菌。经甲醇诱导发酵,测定中性蛋白酶活性。结果表明,目的基因大小为1566bp,在宿主中得到了成功表达,重组菌酶活力为9.17×103U/g,酶学性质分析表明,重组中性蛋白酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为7,在40℃中保温1h后仍能保持85%左右活性,在pH4～9的范围内稳定性较好,Ca2+、Mg2+、Mn2+离子对该酶有激活作用。     

酒曲中高蛋白酶产生菌筛选及酶学性质研究

利用脱脂牛奶平板法从宋河酒曲中分离得到6株有明显水解圈的蛋白酶产生菌,其中水解圈直径与菌落直径之比最大为8.84,经鉴定为芽孢杆菌。以此菌种通过发酵培养提取出粗酶液,然后对该蛋白酶的酶学性质进行研究。试验表明,该蛋白酶的最适酶活力温度为40℃,在40℃～50℃热稳定性较好;该蛋白酶最适pH值为11.0,在pH值为9.0～11.0稳定性较好,在pH6.0条件下酶活力很快丧失;金属离子Fe2+对该蛋白酶有激活作用,Cu2+、Zn2+和Pb+有抑制作用,Mg2+、Ca2+和Li+对该蛋白酶酶活性影响不大。