新疆阿魏菇抗氧化肽分离纯化及抗氧化性质

采用超滤法、离子交换层析和凝胶过滤层析分离阿魏菇抗氧化多肽,研究其抗氧化性能。以胃蛋白酶-胰蛋白酶联合酶解阿魏菇多肽水解物为原料,采用超滤法分离阿魏菇水解液,使用10 000的超滤膜,将阿魏菇水解液分离成10 000以下的多肽组分和大于10 000的多肽组分,小于10 000的多肽组分的·OH自由基清除能力和DPPH·自由基清除能力较高。小于10 000的多肽组分经DEAE-32纤维素分离,得到3个洗脱峰,其中P3组分的羟基清除能力较高,达到50.22%。P3组分采用葡聚糖凝胶Sephadex G-25分离,在220 nm处得到5个洗脱峰,组分P3-2的羟自由基清除最高,达到77.23%,具有较高的抗氧化活性,其相对分子质量大约为1 862。     

抗氧化性玉米肽的分离纯化及其性质

对玉米蛋白水解物中抗氧化组分进行分离提取以及结构鉴定,探讨水解物中抗氧化组分与其性质的相关性。采用超滤和反相高效液相色谱方法,对酶解4h的玉米蛋白水解物进行分离,并采用DPPH自由基清除法测定分离过程各个组分的抗氧化活性。结果表明：玉米蛋白水解物的抗氧化活性与其分子量以及疏水性具有相关性。分离纯化获得3个纯组分经Waters Platform ZMD 4000质谱仪分析和Biolynx软件处理,结合蛋白质SWISS-PROT数据库中玉米蛋白序列获得两个确定抗氧化性玉米肽结构,分别为Tyr-Ala和His—Cys-Met—Leu．     

澳洲坚果抗氧化肽的分离纯化及肽段鉴定

为研究澳洲坚果抗氧化肽的抗氧化活性和氨基酸组成,以复配蛋白酶水解澳洲坚果粕制备粗多肽,利用超滤、大孔树脂纯化技术制备了抗氧化活性最佳的分子量小于1000 Da的多肽,采用Sephadex G-15凝胶对其分离并评价各组分对DPPH、羟基、ABTS+自由基的清除能力与还原能力,筛选出抗氧化活性最强组分,利用液相色谱-串联质谱技术(liquid chromatography and tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)进行鉴定并分析。结果表明,葡聚糖凝胶柱层析分离出G1、G2、G3组分,其中G3具有最佳的抗氧化活性,其羟基自由基清除能力半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC₅₀)6.18 mg/mL与还原能力IC₅₀ 2.19 mg/mL优于谷胱甘肽,DPPH自由基清除能力IC₅₀ 0.50 mg/mL,ABTS+自由基清除能力IC₅₀ 0.02 mg/mL;通过液相色谱-串联质谱鉴定G3含有46个肽段,肽段长度均小于...     

玉米胚芽粕清蛋白酶解产物的制备及其抗氧化活性和护肝作用

为开发利用玉米胚芽粕资源,研究玉米胚芽粕清蛋白酶解产物的酶解工艺及其抗氧化活性和护肝活性。研究结果表明:采用酸性蛋白酶酶解玉米胚芽粕清蛋白,在酶解温度44.9℃,p H 3.6,加酶量3 093.8 U/g,酶解时间1.5 h条件下,玉米胚芽粕清蛋白水解物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼的清除率达到最优值为95.15%,水解度为43.13%。采用体外2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)法、Fe2+螯合法抗氧化模型考察玉米胚芽粕清蛋白水解物抗氧化活性,结果表明其抗氧化活性与质量浓度呈正相关。体内抗氧化实验结果表明:对于酒精诱导的急性酒精性肝损伤模型小鼠,玉米胚芽粕清蛋白水解物能显著提高体内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽(GSH)的含量,降低氧化产物丙二醛(MDA)的含量。同时,小鼠肝组织病理学切片结果表明,其对急性酒精性肝损伤模型小鼠的肝脏具有一定的保护作用,能够抑制酒精在体内代谢过程中产生的氧化应激。玉米胚芽粕清蛋白酶解物具有潜在的护肝作用。     

玉米谷蛋白抗氧化肽的分离纯化与活性研究

采用Alcalase蛋白酶酶解从玉米脱脂蛋白粉中分离得到的玉米谷蛋白,对酶解产物采用超滤、凝胶过滤层析和高效液相色谱法分离纯化玉米谷蛋白抗氧化肽,并研究其抗氧化活性。结果表明,Alcalase蛋白酶酶解玉米谷蛋白获得的抗氧化肽分子量主要集中在低于1 kDa,其DPPH自由基和羟自由基清除率分别为80.46%、81.36%。凝胶过滤层析得到抗氧化活性较高的组分P6、P7和P8,其DPPH自由基清除率分别为32.05%、24.43%、14.19%,多肽含量分别为0.638、0.253、0.158 mg/mL。高效液相色谱对这3个组分进一步分离纯化分别得到主要组分。     

河蚬肉抗氧化肽的分离及活性研究

目的:为制备具有抗氧化活性的河蚬肉抗氧化肽。方法:河蚬肉酶解液经膜分离后,采用Sephacryl S-100 HR凝胶层析柱进行分离,得到抗氧化性最强的组分经CM Sepharose FF离子交换层析柱进一步分离,并对各组分的体外抗氧化活性进行测定。结果:经Sephacryl S-100 HR凝胶层析柱分离得到5个活性组分A、B、C、D和E,其中组分C的抗氧化活性较强,其总抗氧化能力A_(700 nm)、羟自由基清除率和DPPH自由基清除率分别为1.79、83.33%和26.35%。组分C经CM Sepharose FF离子交换层析柱进一步分离得到2个活性组分C1和C2,其中C2的抗氧化活性最强,总抗氧化能力A_(700 nm)、羟自由基清除率和DPPH自由基清除率分别为2.03、92.34%和35.94%。结论:河蚬酶解液抗氧化肽的羟自由基清除能力突出,该研究为河蚬肉抗氧化肽的开发提供理论技术依据。     

紫苏粕蛋白抗氧化活性肽的制备、分离纯化及序列鉴定

以紫苏粕粉为原料，使用碱性蛋白酶进行水解反应，制备抗氧化活性肽。采用超滤离心、凝胶过滤色谱和反相色谱等分离纯化手段对其富集。结果表明，相较其它3种蛋白酶，碱性蛋白酶Alcalase对紫苏粕蛋白的水解程度最高，约为(25.94±0.21)%；碱性蛋白酶作用紫苏蛋白后的酶解产物的抗氧化活性最好，对DPPH自由基清除率约为(91.01±0.73)%。酶解上清液经超滤离心分离后最小分子质量组分F1(小于3 ku)抗氧化活性最强，F1组分经Sephadex G-25凝胶过滤色谱分离后按照分子质量大小依次得到P1、P2、P3 3个组分，其中分子质量最小的P3组分抗氧化活性最高。P3组分经反相色谱分离所得4个组分中，最后被洗脱出来的P3-4组分疏水性最强且DPPH·自由基清除率最高，质量浓度为3 μg/mL的 P3-4溶液的DPPH·清除率为(58.8±0.78)%。通过LC-MS-MS 鉴定，抗氧化活性肽P3-4组分为十二肽，其氨基酸序列为Lys-Leu-Lys-Asp-Ser-Phe-Glu-Arg-Gln-Gly-Met-Val，分子质量为 1 437.8 u。本研究结果为深入开发紫苏蛋白资源，研发紫苏抗氧化活性肽提供理论参考。     

明胶抗氧化肽的分离、纯化及其清除羟自由基活性的研究

为制备具有抗氧化活性的明胶肽,本实验采用不同的酶水解明胶,并对酶解产物采用超滤技术分离,利用分光光度法检测超滤后所得多肽组分对羟基自由基(·OH)的清除能力;进一步对抗氧化活性较强的组分利用葡聚糖Sephadex C-25阳离子交换色谱、Sephadex G-50凝胶过滤色谱和C18反向高效液相色谱进行分离、纯化,并对其各组分清除·OH活性进行了研究,最后对所得洗脱组分中具有最强清除自由基活性的多肽组分的分析氨基酸组成,结果显示:组分中甘氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸含量较高的肽具有较好的抗氧化活性,·OH清除率达到55.37%。     

双酶水解菜籽粕及水解物的抗氧化活性研究

中性蛋白酶分别与alcalase,protamex,flavourzyme,木瓜蛋白酶及胰蛋白酶相结合,用双酶相继水解菜籽粕,得到5组菜籽粕的双酶水解物。双酶水解物抗氧化活性试验结果表明,所有水解物都具有一定清除DPPH自由基活性的能力、还原能力和抑制亚油酸氧化活性的能力,但以中性蛋白酶和胰蛋白酶组合的水解物最强。该水解物的凝胶层析分离结果表明,4组分离物中分子量为6500-1050Da的组分清除DPPH自由基的活性最高,显示菜籽粕双酶水解物的抗氧化活性取决于水解物的分子结构,即不仅与酶的种类有关,还与水解条件和水解度有关。     

玉米胚芽蛋白水解物的抗氧化活性研究

以玉米胚芽蛋白水解物为底物,通过对其羟基自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力、二苯基苦味酸基苯肼(DPPH)自由基清除能力、Cu2+螯合能力、在亚油酸体系中的抗氧化性、油脂过氧化值(POV)等指标的测定,研究玉米胚芽蛋白水解物的抗氧化活性.结果表明,玉米胚芽蛋白水解物对羟基自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基具有一定的清除能力,且浓度为6mg/mL时,清除效果最好;对Cu2+具有螯合能力,并且螯合能力随着玉米胚芽蛋白水解物浓度的增加而呈上升趋势;对亚油酸氧化具有抑制作用,作用效果与剂量成正相关,同时对油脂的POV值具有抑制作用,浓度为0.1％时抑制作用最强.     

双酶水解小麦胚芽及水解物的抗氧化活性研究

本文研究双酶相继水解脱脂小麦胚芽及对水解物抗氧化活性的影响。实验结果表明,与碱性蛋白酶和Protamex组合及碱性蛋白酶和风味蛋白酶组合相继水解得到的水解物相比,用碱性蛋白酶(Alcalase 2.4L)和胰蛋白酶相继水解得到的水解物的清除DPPH自由基能力和还原能力最大。上述三组不同酶组合的水解物的抗氧化活性均高于碱性蛋白酶单酶水解脱脂小麦胚芽的水解物。小麦胚芽双酶水解物的抗氧化活性与水解物浓度有关,增加水解物浓度可有效提高其清除DPPH自由基能力和还原能力。     

蛋清抗氧化肽分离纯化及结构鉴定

为了获得高活性、高纯度的蛋清抗氧化肽,以蛋清酶解物为原料,依次釆用超滤、离子交换色谱、凝胶色谱分离纯化抗氧化活性较强的肽段,运用基质辅助激光解吸离子化质谱解析肽链的氨基酸序列。结果表明:超滤法分离纯化EWPH所得的三个组分中,EWPH-Ⅲ(M_W<3 kDa)组分的DPPH自由基清除率最高,达到79.62%。离子交换层析分离纯化EWPH-III所得到的碱性组分B的DPPH自由基清除率最高,达到82.05%。凝胶过滤色谱分离EWPH-III-B所得到4组分中E组分的DPPH自由基清除率最高,为88.49%。高活性高纯度EWPH-III-B-E组分的相对分子质量为237.575,该二肽的氨基酸序列为丙氨酸-甲硫氨酸。     

马铃薯蛋白水解物的抗氧化性与其组成的相关性

以Fenton体系催化氧化,以脂肪氧化产物丙二醛为指标,考察了不同水解时间(0·5、1、6h)马铃薯蛋白水解物对大豆油O/W氧化稳定性的影响。1h马铃薯水解物表现了较好的抗氧化作用。将1h马铃薯蛋白水解物用G15凝胶色谱进行分离得到三个不同分子量的组分。分子量较小的组分表现出了更高的ABTS自由基清除能力和亚铁螯合能力。对这些组分进行的氨基酸分析表明,抗氧化活性较高的组分含有较高含量的易氧化氨基酸。     

紫苏籽粕蛋白源抗氧化肽的纯化、结构鉴定及体外抗氧化活性

通过单因素和响应面实验对紫苏籽粕蛋白的闪提工艺进行了优化,将所获蛋白通过碱性蛋白酶酶解,酶解物依次通过超滤和柱层析进行分离纯化,并对抗氧化活性最高的多肽进行液质分析。结果表明,紫苏籽粕蛋白提取的最优工艺参数为：料液比1︰20(g/mL)、闪提pH 10、闪提时间30 s和闪提转速3000 rpm。蛋白酶解物经超滤分离后,其分子量小于3kDa的组分具有较高的抗氧化活性、该组分经DEAE-32离子交换色谱分离后, 得到D1、D2、D3共3个组分,其中D1的抗氧化活性最好,D1经Sephadex G-25凝胶层析分离纯化后,富集得到G1和G2两个组分,组分G1抗氧化活性最高。抗氧化肽G1对DPPH、ABTS、O_2^-、.OH 自由基清除率及还原力依次为98.97%、85.11%、91.83%、93.40%、0.477;通过LC-MS-MS鉴定,抗氧化活性肽G1组分主要由15个氨基酸组成,荷质比m/z为672.39,分子质量为1718.82 Da,其氨基酸序列为Glu－Met－Pro－Tur－lle－Ala－Ser－Met－Gly－lle－Tyr－Val－Val－Ser－Lys。     

牦牛血抗氧化肽制备方法对比及分离纯化研究

为研究牦牛血抗氧化肽最佳制备方法,以牦牛血为原料,分别采用枯草芽孢杆菌发酵法、碱性蛋白酶解法、菌酶联合法制备3种牦牛血抗氧化肽,依次简写为BF、AP、BA。应用羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(·O_2-)清除能力,脂质过氧化抑制能力、还原力4种体外抗氧化实验,对比3种牦牛血抗氧化肽的抗氧化活性。以超滤、凝胶层析法对制备的较高活性产物进行分离。结果表明:3种抗氧化肽活性大小为BABFAP,BA有最大的·O_2-清除能力、脂质过氧化抑制能力及还原力,表明制备牦牛血抗氧化肽的最佳制备方法为菌酶联合法;超滤分离菌酶联合制备产物获得分子量5 kD的抗氧化肽活性高于分子量10 kDa、介于5~10 kDa的抗氧化肽,对·OH的IC50值为1.62 mg/mL;该组分经凝胶层析分离后得到4个组分,其最高活性组分Ⅰ对·OH的IC50值达到0.72 mg/mL。     

罗非鱼肌浆蛋白源抗氧化肽的制备、分离纯化及其体外抗氧化活性

采用木瓜蛋白酶对罗非鱼肌肉蛋白组分（肌浆蛋白、肌原纤维蛋白、基质蛋白）进行酶解,研究罗非鱼不同蛋白组分酶解产物的抗氧化活性,并通过超滤、凝胶过滤色谱、反相高效液相色谱对高活性肌浆蛋白组分抗氧化肽进行分离纯化,同时对纯化后的抗氧化肽氨基酸组成予以分析。结果表明：罗非鱼肌浆蛋白酶解物（tilapia sarcoplasmic protein hydrolysates,TSPH）抗氧化活性高于肌质与肌原纤维蛋白酶解物,当肌浆蛋白酶解4 h时,TSPH（6 mg/mL）对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基清除率及其还原力均达到最高,分别为84.61%、50.01%和0.629;经超滤分离后,其分子质量小于5 kDa的组分具有较高的抗氧化活性;该组分经凝胶色谱分离后,富集得到E1～E4共4 个组分,其中E3组分（0.8～0.3 kDa）的抗氧化活性最高, 3 mg/mL E3组分对DPPH自由基清除率达83.61%,还原力为0.953;E3组分再经反相高效液相色谱分离纯化后,富集得到F1～F9共9 个组分,其中F4组分的抗氧化活性最高,其DPPH自由基的半清除质量浓度为0.78 mg/mL,且经氨基酸组成分析发现色氨酸（Trp）、甘氨酸（Gly）、组氨酸（His）为其含量较高的氨基酸,相对含量分别高达31.20%、27.25%和8.97%。     

不同谷物蛋白肽对自由基清除作用的研究

采用碱性蛋白酶对3种谷物蛋白(小麦、大米、玉米)进行水解得到谷物蛋白水解物,利用超滤对水解液进行分离,对比研究了所得不同谷物蛋白肽对自由基清除作用的效果,包括氧自由基、DPPH自由基和还原力等。结果表明,谷物蛋白种类及肽的相对分子质量大小对自由基清除作用均有较大影响,大米和玉米蛋白水解物的自由基清除能力较好;经超滤膜分离后,3种谷物蛋白肽中小于1 ku组分的自由基清除作用均高于其他组分。     

不同分子质量鲍鱼外套膜酶解物抗氧化活性研究

研究鲍鱼外套膜酶解物(AMH)及其不同分子质量组分的抗氧化活性。采用中性蛋白酶水解鲍鱼外套膜制得AMH,通过超滤得到分子质量分别为小于1kDa和1～3,3～5,5～10kDa的4种酶解物组分;考察AMH和不同分子质量组分的体外抗氧化活性。结果表明:AMH清除DPPH自由基、OH自由基和亚铁离子螯合能力的IC50值分别为11.76,12.07,4.04mg/mL;经过超滤分离后,其抗氧化活性明显增强,且1～3kDa分子质量范围组分的清除DPPH自由基和OH自由基能力最强,3～5kDa分子质量范围组分的亚铁离子螯合能力最强。     

豌豆蛋白水解物体外及对HepG2细胞的抗氧化活性

为了全面评价豌豆蛋白水解物(pea protein hydrolysates, PPH)及其超滤分离组分的体外及细胞抗氧化能力，以豌豆蛋白为原料，采用碱性蛋白酶和复合蛋白酶协同水解制备PPH,然后超滤分级得到PPH1(分子质量<3 kDa)、PPH2(分子质量3～5 kDa)、PPH3(分子质量>5 kDa)3个组分，使用不同的化学方法研究PPH和超滤分离组分的抗氧化活性，从中选择抗氧化能力最高的组分进一步考察其细胞内自由基清除能力并用H₂O₂应激的HepG2细胞评估其对氧化应激的保护作用。结果表明，各组分中PPH1具有最高的体外化学抗氧化活性，其氨基酸组成分析表明，抗氧化功能氨基酸占比高；在实验设定浓度下，PPH1能够显著抑制H₂O₂应激损伤HepG2细胞内活性氧的积累，对细胞应激损伤有明显的保护作用。研究认为，PPH及其超滤分离组分具有良好的体外化学及细胞抗氧化活性，对H₂O₂应激的HepG2细胞具有保护作用，能够为其作为一种天然源抗氧化剂...     

紫苏籽粕抗氧化肽的纯化、鉴定及降血脂功效研究

使用碱性蛋白酶对紫苏籽粕蛋白酶解,酶解物依次通过超滤和柱层析进行分离纯化,纯化肽经LC-MS-MS鉴定并通过动物实验对其进行降血脂及抗氧化功能性研究。结果表明,蛋白酶解物经超滤分离后,其分子量小于3 kDa的组分具有较高的抗氧化活性、该组分经DEAE-32离子交换色谱分离后, 得到D1、D2、D3共3个组分,其中D3的抗氧化活性最好,D3经Sephadex G-25凝胶层析分离纯化后,富集得到G1、G2、G3三个组分,组分G2抗氧化活性最高。抗氧化活性肽G2对DPPH、ABTS、O_2^-、.OH 自由基清除率及还原力依次为70.00%、47.09%、51.17%、70.04%、0.742；通过LC-MS-MS鉴定,抗氧化活性肽G2组分由7个氨基酸组成,分子质量为790.3755 Da,其氨基酸序列为Ala－Ala－Asp－Cys－Arg－Ala－Lys。经低、中、高剂量组G2灌胃处理后的小鼠相比高脂模型组,小鼠体内的MDA含量显著或极显著下降(P＜0.05或P＜0.01)；小鼠的 GSH-Px、SOD和CAT活力显著或极显著升高(P＜0.05或P＜0.01)；小鼠体内的TC、TG和LDL-C含量显著或极显著降低(P＜0.05或P＜0.01),HDL-C含量显著或极显著升高(P＜0.05或P＜0.01)。