FTA滤膜与环介导等温扩增技术结合快速检测消毒乳中的蜡样芽孢杆菌

目的:建立环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测蜡样芽孢杆菌的方法.方法:根据公布的蜡样芽孢杆菌溶血素基因的hblA基因的保守序列设计引物,将FTA滤膜提取DNA与LAMP法相结合,检测蜡样芽孢杆菌和人工污染蜡样芽孢杆菌的消毒乳.结果:LAMP方法检测灵敏度高,蜡样芽孢杆菌的检出限为4.4 cfu/mL,比PCR检测灵敏度高10倍;人工污染消毒乳中蜡样芽孢杆菌的检出限为57 cfu/mL.LAMP扩增可在20 min内完成,对消毒乳中蜡样芽孢杆菌的检测(包括DNA提取、LAMP和电泳)可在2 h内完成.结论:初步建立LAMP检测蜡样芽孢杆菌的快速检测方法.该方法灵敏度高、特异性好、耗时短.为食品中蜡样芽孢杆菌快速检测构建了一个技术平台.     

原料乳中蜡样芽孢杆菌部分致病基因的鉴定及毒力评价

研究原料乳中蜡样芽孢杆菌的潜在威胁,对我国10 个省市原料乳中蜡样芽孢杆菌的污染状况进行调查,并利用PCR 扩增技术及血平板检测的方法分析乳源性蜡样芽孢杆菌中的毒性分布。结果表明,原料乳中蜡样芽孢杆菌检出率为33%,检出水平为1 × 103～1 × 106 CFU/ml,检出的蜡样芽孢杆菌中25 株(75.8%)能产生溶血素BL,24 株(72.7%)含有bceT 基因,至少产生一种毒素的菌株有31 株占检出菌总数的93.9%。研究结果证实我国原料乳中的蜡样芽孢杆菌污染状况不容乐观,严格监控原料乳中的蜡样芽孢杆菌污染,对生产出优质乳制品具有重要意义。     

原料乳中多种致病菌的快速过滤富集及多重PCR检测

针对目前原料乳中致病菌的检测方法繁琐费时耗力的缺点,建立一种能同时检测原料乳中多种致病菌的快速检测方法,采用多重PCR快速灵敏检测技术与一种不需要预增菌就可以直接从原料乳中快速过滤富集菌体的技术相结合来同时检测原料乳中主要致病菌——沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7、金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌和蜡样芽孢杆菌。整个过程只需7～8h即可完成,且检测灵敏度可达102cfu/mL。这种方法是对传统检测方法的有效改进,并且达到了原料乳检测快速、准确、灵敏的要求。     

免疫磁珠——环介导等温扩增快速检测巴氏杀菌乳中蜡样芽孢杆菌的四环素耐药基因tetL

建立了免疫磁珠分离（IMS）结合环介导等温扩增（LAMP）检测巴氏杀菌乳中蜡样芽孢杆菌的四环素耐药基因tet L的方法。结果表明：经优化后,每微克链霉亲和素纳米磁珠与375 ng生物素标记的芽孢杆菌抗体偶联,在含有1×103 CFU/mL耐四环素蜡样芽孢杆菌的巴氏杀菌乳中,25μL免疫磁珠孵育1 h后,对蜡样芽孢杆菌BA117的捕获率为68.1%。该IMS-LAMP方法特异性高,2 h内对巴氏杀菌乳中耐四环素蜡样芽孢杆菌的检测灵敏度为24 CFU/mL。IMS-LAMP方法具有用时短,灵敏度高,操作简单等优点,可以有效检测巴氏杀菌乳中蜡样芽孢杆菌的四环素耐药基因。     

基于qPCR快速检测米饭中产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的研究

为了建立基于QPCR的快速方法检测米饭中产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌,首先采用煮沸法提取蜡样芽孢杆菌基因组DNA,并利用普通PCR方法验证引物特异性,然后通过在米饭样品中添加目标菌,模拟受污染的实际样本,用QPCR技术定量检测米饭中产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌。结果表明该方法具有快速、特异性强、灵敏度高和稳定性好的优点,能对产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌定量。不经过增菌培养,实际样品的检测限为9.8×101CFU/g;经过2 h的增菌培养,检测限能达到100CFU/g;并且米饭中添加其他杂菌后,不影响对蜡样芽孢杆菌的检测。建立的QPCR方法适用于米饭等相关淀粉类食品中产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的检测,从而为监测该菌所致食品污染以及早期相关食物中毒提供快速定量检测方法。     

食源性蜡样芽孢杆菌的危害及其检测方法研究进展

蜡样芽孢杆菌是一种常见的食源性致病菌,可通过污染乳制品、米饭、散装熟肉制品和豆制品等食品引起婴幼儿及成人食物中毒。采用准确、高效的蜡样芽孢杆菌检测方法,是预防食源性蜡样芽孢杆菌病及食品安全质量控制的关键。蜡样芽孢杆菌检测方法主要包括细菌培养分离鉴定法、免疫学检测方法和核酸检测方法等。本文总结了各类检测方法的核心技术特征和应用实例,为食源性蜡样芽孢杆菌的快速检测方法的研发和使用提供思路。     

我国部分地区原料奶中蜡样芽孢杆菌污染情况调查

对我国冀宁浙3个省典型乳品企业的原料奶中微生物污染情况进行调查与鉴定,主要检测原料奶中蜡样芽孢杆菌数,以及菌落总数和大肠菌群数,确定原料奶中微生物的污染状况与蜡样芽孢杆菌污染的关系.结果表明,3个地区的蜡样芽孢杆菌数平均值均≤105 mL-1.而细菌总数平均值.冀某乳品企业为7.61×105 mL-1,浙和宁为106 mL-4,属于超标奶.就大肠菌群平均值而言(最近似值),冀某乳品企业为21.17 mL-1,浙某乳品企业为25.15 mL-1,宁某乳品企业为15.98 mL-1.综合分析表明,蜡样芽孢杆菌数与原料奶的微生物污染状况没有相关性.本调查分析也对我国原料奶蜡样芽孢杆菌污染的溯源奠定基础.     

津晋豫鲁部分地区原料奶中微生物污染情况调查

蜡样芽孢杆菌是影响原料奶质量的致病微生物之一,它能产生致吐肠毒素和致腹泻毒素.由蜡样芽孢杆菌引起的食物中毒事件屡见不鲜,严重影响到消费者的身体健康.本研究对国内津、晋、豫及鲁四个地区的原料奶中微生物污染情况进行调查与鉴定,主要检测菌落总数和蜡样芽孢杆菌数.结果表明,原料奶市场的微生物污染状况不容乐观.本实验也对原料奶的溯源奠定了基础.     

实时荧光环介导等温扩增技术检测牛乳中的蜡样芽孢杆菌

建立牛乳中蜡样芽孢杆菌便捷可靠的检测方法,根据已公布的蜡样芽孢杆菌hblA基因序列设计内外引物,并向反应体系中加入荧光染料SYBRGreen Ⅰ,利用实时荧光监测仪,建立实时荧光环介导等温扩增技术（real-timefluorescence loop-mediated isothermal amplification,RealAmp）检测蜡样芽孢杆菌的方法,扩增产物经电泳和酶切鉴定。通过21 株致病菌验证RealAmp特异性,并比较了RealAmp与普通环介导等温扩增技术的敏感性,对人工污染的检出限进行了测定。结果表明对21 株致病菌进行特异性实验,4 株蜡样芽胞杆菌呈阳性结果,17 株非蜡样芽胞杆菌均呈阴性结果。RealAmp检测纯菌的灵敏度为8.2 CFU/mL,比普通环介导等温扩增技术的灵敏度高10 倍,人工污染牛乳RealAmp的检出限为8.2 CFU/mL。并且在20 min左右即可判定结果。该方法快速、准确、灵敏度高、操作便捷、可实时监控检测蜡样芽孢杆菌,有望成为快速检测蜡样芽孢杆菌的有效方法。     

餐饮食品中蜡样芽孢杆菌的实时荧光PCR检测方法研究

文章研究开发了一种可在18 h内完成餐饮食品中蜡样芽孢杆菌检验的方法。本研究采用胰酪胨大豆多黏菌素肉汤培养基培养蜡样芽孢杆菌,通过热裂解法提取菌液DNA,运用实时荧光PCR法检测样液中的蜡样芽孢杆菌基因成分,建立了完整系统的餐饮食品中蜡样芽孢杆菌的检测方法,方法的检出限达0.01 ng/μL的蜡样芽孢杆菌DNA,整个检测过程在18 h内完成。文章将方法应用于市场售卖餐饮食品中蜡样芽孢杆菌的筛查检测,结果表明,在抽样检验的315份餐饮食品中有25份样品(25/315,检出率为7.93%)中检测出蜡样芽孢杆菌特异性基因成分。该方法具有检测时间短、效率高,一次PCR反应可同时检测90份样本,方法适合于餐饮食品等食品中蜡样芽孢杆菌的高通量筛查检测。