酶法拆分DL-蛋氨酸工艺条件的优化控制

通过从猪肾中提取氨基酰化酶Ⅰ,对DL-蛋氨酸进行拆分实验研究。讨论了影响DL-蛋氨酸拆分制备L-蛋氨酸的酶促反应速度的几个主要因素,如温度、pH、缓冲体系离子强度、金属离子等。结果表明反应最适条件为:N-乙酰-DL-蛋氨酸的浓度为0.2mol/L,酶用量700U/mmol底物,温度37℃,pH7.0,反应时间0.5h。缓冲体系中的离子对酶活有抑制作用,而低浓度的Co2+对酶活有激活作用。     

α-转移葡萄糖苷酶粗酶液的酶学性质

用实验室制备的α-转移葡萄糖苷酶粗酶液进行酶反应，反应至一定时间后，生成较高含量的低聚异麦芽糖。该粗酶液的最适pH值为5．0，最适反应温度为55℃，不同金属离子对粗酶液酶活的影响不同。正交试验确定粗酶液的最佳反应pH值为5．15，温度为55℃，反应时间为3h。     

绿僵菌Ma83固态发酵几丁质酶和部分酶学性质的初步研究

研究了金龟子绿僵菌MetarhiziumanisopliaeMa83菌株产几丁质酶的固态发酵条件和粗酶液的酶学性质。研究结果显示 ,当以麸皮∶蚕蛹粉为 3∶1作为培养基 ,最适氮源为1%NaNO3,起始pH为 6 5 ,发酵温度为 31℃ ,接种量为 2mL液态种子时酶活力最高。此外 ,添加稻壳对Ma83产几丁质酶有促进作用。该菌株在生长 2d时 ,酶活力达 33 9U /g干培养基。酶的最适反应温度为 5 0℃ ,最适反应 pH为 6 0 ;不同温度保温 1h后 ,酶的半失活温度为 42℃。不同 pH值的缓冲溶液中 (2 5℃ )放置 1h后 ,酶在pH 5 0～ 6 0条件下稳定性最高     

米曲霉氨基酰化酶的纯化及粗酶性质研究

利用硫酸铵分级盐析法从米曲霉L-09中提取氨基酰化酶,比活力为56.01 U/mg,纯化倍数为2.06,酶活力回收率为80%。详细研究该粗酶的酶学性质。结果表明,经盐析法提纯的粗酶最适pH为7,最适反应温度为55℃,在55℃下热稳定性良好。溶液中的金属离子对酶活力有很大影响。其中,高浓度的Fe~(2+)、Mn~(2+)和Ca~(2+)对酶活力有抑制作用,低浓度的Co~(2+)离子对酶活力有激活作用。     

康氏木霉木聚糖酶酶学性质的研究

对1株康氏木霉（Trichoderma Koningii）发酵产木聚糖酶的酶学性质进行了研究。结果表明：该木聚糖酶的最适反应温度为65℃，酶反应最适反应pH为6．0；该酶在20-60℃范围内能保持80％以上的酶活，在pH3．0-10．0的范围内能保持85％以上的酶活；金属离子Ba^2＋、Fd^2＋、Al^3＋，12mmol／L的Cu^2＋和Fe^3＋对木聚糖酶的活性有抑制作用，而Ca^2＋，Zn^2＋和4mmol／L Cu^2＋等金属离子对该酶反应则有促进作用。     

米曲氨基酰化酶分离纯化及其保存稳定性

通过对米曲氨基酰化酶硫酸铵分级沉淀、疏水层析分离、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验获得较高纯化倍数和较高活力的酶,并对酶保存稳定性进行研究.经分离纯化实验后,米曲氨基酰化酶的比活力由3.818 U/mg提高到106.738 U/mg,纯化倍数达28倍,活力回收率为22%.保存该酶的最适pH值为6.5～7.0,Co2 对酶有轻微的激活作用,Fe2 和CH3COO-对酶有明显地抑制作用,蛋白水解酶抑制剂1,4-二硫苏糖醇对酶的保存稳定性有较高提升.自制丙酮冻干粉保存稳定性良好,保存半年其酶活力仍能维持原酶活力的80%以上.     

一种食源性纤溶酶(纳豆激酶)酶学性质的研究

纳豆激酶是一种新型食源性纤溶酶 ,具有易于提取 ,无任何毒副作用 ,溶栓效果好 ,体内作用时间长等特点。实验以新鲜制备纳豆为原料 ,经生理盐水浸提 ,硫酸铵分级盐析 ,SephadexG -10 0层析获得纯纳豆激酶活性蛋白。实验表明 ,该酶分子量为2 80 0 0Da ,等电点为 9,在 6 0℃以下 ,pH 5～ 12均较稳定 ,其最适反应pH为 8,最适反应温度为 45℃ ,Mg2 和Co2 离子对酶活有激活作用 ,而Cu2 、Zn2 和Al3 等离子对该酶有明显的抑制作用。纳豆激酶酶学性质的研究对开发纳豆激酶成为新型溶栓制剂具有重要的实践意义     

大蒜果聚糖外切酶的一些酶学特征研究

目的：研究大蒜(Allium sativum L.)果聚糖水解酶(FEH)的酶学特征。方法：采用硫酸铵分级沉淀确定FEH 所在的沉淀组分,采用薄板层析和离子色谱法研究酶解产物,通过3,5- 二硝基水杨酸(DNS)法测定还原糖的变化量计算酶活力,进而研究FEH 的酶切位点,研究温度、pH 值、离子强度、底物质量浓度对FEH 活力的影响。结果：大蒜FEH 存在于0～20% 硫酸铵饱和度组分,根据酶解产物判断该酶属于外切酶,最适反应温度为45℃,最适反应pH 值为5.5,最适离子强度1.5mol/L 氯化钠,最适反应质量浓度为4mg/mL。结论：存在于大蒜中的果聚糖外切酶会影响大蒜加工产品的质量和保鲜大蒜贮藏的糖代谢。     

米曲霉产氨基酰化酶最佳活力条件的研究

通过在不同的反应时间,反应温度,缓冲液种类及pH条件下测定氨基酰化酶的活力,得出氨基酰化酶的最佳活力条件。试验结果表明,氨基酰化酶在反应温度为37℃、磷酸缓冲液pH为7．5、与底物反应30min时,活力最高。     

硝基还原假单胞菌谷氨酰胺酶的分离纯化及酶学性质

采用离子交换层析和凝胶过滤层析等方法,分离纯化硝基还原假单胞菌(Pseudomonas nitroreducens)SK16.004所产的谷氨酰胺酶,并进一步研究该酶的酶学性质及反应动力学参数。结果表明,该酶的最适反应温度为55℃,最适pH为9.0,温度稳定范围为37～60℃,pH稳定范围为5.0～11.0;Cu2+对促进酶活提高作用最大,而Fe3+会抑制该酶的转移活力。谷氨酰胺酶对底物谷氨酰胺的亲和力最强,其Km值为0.72 mmol/L,Vmax为0.55μmol/(min.mL)。     

米曲霉3042的液体培养特性及其产氨基酰化酶的特性研究

对液体培养的米曲霉所产生的氨基酰化酶胞内外分布及其酶的最适ＰＨ、温度和热稳定性进行了探讨。结果表明,米曲霉３０４２属于凝聚型菌株,当搅拌速度为９０－１２０ｒ／ｍｉｎ时可获得较好的菌球,氨基酰化酶属于人酶,存在于细胞内部或分布于细胞壁上;菌体酶最适Ｐ眯７．０,最适温度为５５℃。好的菌球;氨基铧酶属于胞内酶,存在于细胞内部或分布于细胞壁上,菌体酶活最适ＰＨ为７．０,最适温度为５５℃。     

米曲氨基酰化酶液态发酵条件的研究

通过单因素和正交试验 ,对米曲霉 3 0 42产氨基酰化酶摇瓶液态发酵条件进行优化。结果表明 ,较优培养基为 :麸皮 2 %,蛋白胨 1 5 %,玉米浆 0 5 %,酵母膏 0 1 %,KH2 PO4 0 2 %,无水MgSO4 0 1 %,吐温 80 0 0 5 %。酶活最高达到 1 2 5 8u/g(湿菌体 ) ,通过对培养条件的研究 ,最佳起始 pH 7.0、温度 2 6℃、装液量 1 0 0mL/L三角瓶。     

米曲霉氨基酰化酶纯化方法的研究

比较了盐析法和有机溶剂沉淀法对于米曲霉氨基酰化酶的纯化效果。分别使用硫酸铵、无水乙醇和丙酮对米曲霉氨基酰化酶进行纯化，结果发现：有机溶剂沉淀法的纯化效果优于盐析法。采用丙酮二次沉淀法纯化的氨基酰化酶比酶活为93.20U／mg，纯化倍数为3．26：通过乙醇二次沉淀，得到的酶液比酶活为93.22U／mg，纯化倍数为3．10，而采用盐析法纯化的酶液的比酶活为56.01U／mg，纯化倍数为2.06。从酶的纯化效果方面考虑，丙酮沉淀法最佳，但从工业生产的可行性方面考虑，乙醇沉淀法较好。     

Isolation of a bacterial enzyme releasing axillary malodor and its use as a screening target for novel deodorant formulations

Axillary odor is known since 50 years to be formed upon the action of Corynebacteria on odorless axilla secretions, but the nature of the bacterial enzymes involved in this process remained a mystery. We identified the known axilla odor determinant 3-methyl-2-hexenoic acid in hydrolyzed axilla secretions along with a new, chemically related compound, 3-hydroxy-3-methyl-hexanoic acid. The natural, odorless precursors of both these acids were purified from non-hydrolyzed fresh axilla secretions. The malodorous acids were shown to be covalently linked to a glutamine residue in fresh axilla secretions. Corynebacteria, but not Staphylococci, isolated from the axilla were found to release the acids from these precursors in vitro. A Zn(2+) -dependent aminoacylase mediating this cleavage was then purified from Corynebacterium striatum Ax20 and the corresponding gene agaA was cloned and heterologously expressed in Escherichia coli. Based on these biochemical findings, novel approaches in research on axilla malodor control are presented: (a) With a new test method using the isolated Corynebacteria and their enzymatic activity, the direct malodor-controlling activity of existing cosmetic ingredients was evaluated. (b) The structure of the natural malodor precursor was modified by replacing the malodor acid with fragrance molecules. These new fragrance precursors were shown to be cleaved by the same aminoacylase.     

小麦与小麦芽阿魏酸酯酶酶活力的测定及其酶学性质研究

以阿魏酸乙酯作为底物,确定了阿魏酸酯酶的酶解工艺条件:酶解时间100 min;酶液与底物的体积比为0.75;提取液pH值6.2。针对阿魏酸酯酶酶学性质的研究表明:最适温度60℃,30～35℃范围内热稳定性较强,保温60 min后其活力可保持在80%以上;最适反应pH值5.0,在pH值5.0～5.6范围内对阿魏酸酯酶的破坏力相对较小,保温60 min其活力仍可保持在80%以上;Cu2+和Zn2+对阿魏酸酯酶有强烈的抑制作用,而ED-TA则对其有明显的促进作用。对5种小麦及其麦芽的阿魏酸酯酶酶活力进行测定:麦芽中的阿魏酸酯酶酶活均高于小麦,其中以烟2415、鲁麦21、郑麦004变化较大。     

钙矾二元复合金属氧化物催化大豆油酯交换研究

实验制备CaO/V2O5固体碱催化剂,研究钙钒摩尔比和煅烧温度对催化剂活性影响;结果表明,最适制备催化剂条件为:钙矾摩尔比3∶1、煅烧温度823 K。考察该催化剂对油脂酯交换反应活性,CaO/V2O5催化大豆油酯交换最适反应条件为:醇油摩尔比15∶1、催化剂用量6.2 wt.%、反应时间4 h,大豆油转化率达80%;该催化剂重复使用5次后,活性并没明显降低,游离脂肪酸和水分含量对该催化剂活性影响很小。     

黑曲霉产纤维素酶混合发酵条件的研究

为选出高产纤维素酶菌株,对不同菌株进行筛选,通过4种纤维素酶活力大小比较单一菌株与混合菌株的产酶能力。利用3,5-二硝基水杨酸（DNS）法测定各单一菌株及混合菌株的内切葡聚糖酶活、滤纸酶活、外切葡聚糖酶活和β-葡萄糖苷酶活,筛选最优组合,在单因素试验的基础上通过响应面试验确定最佳产酶条件。结果表明,混合菌最佳产酶条件：混合菌株D2∶D2-1=2∶1,发酵时间6 d,接种量6%,发酵温度28 ℃。优化后滤纸酶活力达到156.26 U/mL,较优化前的滤纸酶活（113.96 U/mL）提高了37.1%。     

一株高产纳豆激酶菌株的筛选及其发酵条件的优化

通过紫外诱变、纤维蛋白原平板初筛、复筛得到了一株高产纳豆激酶的纳豆芽孢杆菌菌株。研究液体发酵产纳豆激酶的最佳条件,结果表明最佳培养基为营养肉汤,最佳培养时间为24h,最佳培养温度30℃。在优化条件下,发酵液酶活达640U/ml。该菌株的酶活比原始菌株酶活提高了258%。     

蛋清溶菌酶提取工艺研究

采用盐析法从鸡蛋清中提取溶菌酶,探讨不同条件对溶菌酶收率等的影响,确定了最优操作参数。最佳提取条件为:蛋清浓度100%,氯化钠浓度5%,盐析pH10.5,盐析时间120h,提取收率在0.37%。采用比浊法对提取的溶菌酶进行酶活力的测定,酶活为13500U/mg。     

产几丁质降解酶菌株的筛选及其产酶条件

采用平板透明圈法从土壤中分离筛选到一株产几丁质降解酶菌株L12酶活力为0．63U／mL。通过产酶条件优化，初步确定了该菌株较适产酶培养基和摇瓶发酵条件。条件优化后酶活力提高约1．6倍，达到1．06U／mL。