猪股骨头胶原蛋白降血压肽的分离纯化

依次采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶对猪股骨头胶原蛋白进行酶解,制备降血压肽。为了得到高活性、高纯度的降血压肽,依次采用超滤、离子交换层析、凝胶层析对酶解液进行分离纯化,采用体外检测方法测定各分离产物对血管紧张素转化酶活性的半抑制浓度（IC50值）。结果显示：猪骨酶解液经超滤分离获得分子质量小于5 ku的组分对血管紧张素转化酶的抑制活性最高,IC50值为1.400 2 mg/mL;该组分进行离子交换层析分离得4个组分,其中组分2的活性最高,IC50值为0.488 4 mg/mL;再将组分2进行凝胶层析分离得4 个组分,其中组分2-2的活性最高,IC50值为0.195 3 mg/mL。     

猪皮胶原蛋白抗氧化肽的分离纯化及体外抗氧化活性研究

采用碱性蛋白酶对猪皮胶原蛋白进行酶解,制备抗氧化肽。为了得到抗氧化活性高且纯度高的抗氧化肽,本实验采用多种体外抗氧化评价体系研究超滤获得的各分子质量段猪皮胶原蛋白抗氧化肽的体外抗氧化活性;依次采用离子交换色谱、凝胶色谱对猪皮胶原蛋白酶解液进行分离纯化。结果显示:超滤分离获得5~10ku的抗氧化肽较其他分子量范围的抗氧化肽具有较好的抗氧化活性;采用离子交换色谱、凝胶色谱两种分离方法分步分离能达到较好的分离纯化效果,离子交换色谱分离得到7个组分,其中组分P1对O-2·清除率最高,多肽浓度为0.85mg/mL时,清除率为46.30%,IC50值为1.24mg/mL;该组分经过凝胶色谱分离后得到2个组分,其中组分P1-B对O-2·清除率最高,多肽浓度为0.9mg/mL时,清除率为49.43%,IC50值为0.98mg/mL。     

大豆抗癌肽的分离纯化及分子量分布

为确定具有抗癌活性大豆多肽的分子量,对大豆抗癌肽粗提物进行超滤,采用MTT法(四噻唑蓝比色法)对得到的不同组分超滤液进行抗癌活性检测,初步确定分子量在5000～10000u范围的组分具有最高的抑癌活性,大豆抗癌肽的IC50为0.47mg/mL。用葡聚糖SephadexG-75凝胶柱对该组分进行进一步分离,收集各洗脱组分并进行抗癌活性研究。结果显示:组分A4具有最佳的抗癌活性,其IC50为0.37mg/mL。根据分子量标准曲线,得到其平均相对分子质量为6723u。     

制备型反相高效液相色谱分离猪股骨降血压肽的研究

猪股骨酶解液经超滤、凝胶层析、离子交换层析分离后,为了得到高活性且纯度较高的降血压肽单体,采用制备型反相高效液相色谱(RP-HPLC)对离子交换层析分离后的高活性组分进一步分离。通过对洗脱条件的优化,确定了最佳分离条件:0~5min 0%~80%A;5~8min 80%~100%A;8~15min 80%~60%A;15~20min 60%~20%A。结果显示:第一步RP-HPLC分离得到三个组分,其中峰Z2的活性最高,其IC50值为0.0437mg/m L;组分Z2进行第二步RP-HPLC分离,其峰Z21的IC50值达到0.0352mg/m L,其纯度达到96.7%。通过分析Z21的氨基酸组成以及LC-MS的分离鉴定,确定其含有6种氨基酸(Glu、Ala、Val、Leu、Phe、Pro),其分子量为764.8。     

响应面法优化大孔树脂吸附发酵羊乳ACE抑制肽

血管紧张素转换酶(ACE)的活性过高是导致高血压的重要因素之一。ACE抑制肽可有效地抑制ACE的活性。为了制备高纯度的ACE抑制肽,考查不同截留分子量超滤膜对发酵羊乳中的ACE抑制肽的分离效果,比较4种树脂(AB-8、HPD-100、DA201-C、DM130)对ACE抑制肽的纯化效果,选择最佳树脂并对其纯化工艺参数进行优化。结果表明,经超滤分离后,ACE抑制肽主要集中在M1 ku组分中,其IC50值降到了0.348 mg/mL,ACE抑制率为86.91%,比超滤前ACE抑制率提高了5.61%;大孔树脂DA201-C最佳,静态吸附最佳工艺条件为上样pH2.15、上样浓度20 mg/mL、吸附率为(72.38±1.26)%,通过大孔树脂后IC_(50)值达到0.301 mg/mL,与超滤液相比IC50降低了0.047 mg/mL。     

牛乳酪蛋白抗氧化乳基料的制备及其分离纯化

为制备具有低过敏性和抗氧化作用的牛乳酪蛋白活性肽乳基料,以水解度和·OH清除率为指标,先后采用大孔吸附树脂和凝胶过滤色谱分离、纯化酪蛋白酶解物。结果表明：胰蛋白酶和中性蛋白酶组合酶解牛乳蛋白6h,其产物具有较高的水解度(36.80%)和较好的抗氧化活性,·OH清除率的半抑制浓度(IC50)值为3.12mg/mL;酶解物通过LS106大孔吸附树脂分离、纯化后,体积分数为75%的乙醇洗脱液具有较高的抗氧化活性,其·OH清除率的IC50值为0.14mg/mL;体积分数75%的乙醇洗脱组分经凝胶过滤色谱分离、纯化后,得到4个不同相对分子质量肽段,其中抗氧化活性较强肽段的相对分子质量为355.38～854.89,其·OH清除率的IC50值为0.09219mg/mL,与酶解物相比其抗氧化活性扩大33.84倍;相对分子质量小于3238.05的多肽占纯化后多肽总量的60.32%,30.09%多肽是由2～8个氨基酸组成的寡肽。牛乳酪蛋白经复合酶酶解后其抗氧化活性明显提高,过敏性明显降低,喷雾干燥后可以直接制备乳基料。     

大孔吸附树脂对麦胚肽的吸附特性研究

从大孔吸附树脂对麦胚肽的静态吸附率与解吸率考察了9种树脂的吸附性能，DA201—C大孔吸附树脂吸附特性优于其它8种树脂；吸附流速、麦胚肽的浓度及不同离子强度的样品溶液等对大孔吸附树脂动态吸附性能有影响；DA201-C大孔吸附树脂对麦胚肽的脱盐率为92．13％，麦胚肽的回收率为78．55％：利用不同浓度乙醇可将麦胚肽段按疏水性大小进行初步分离纯化，具有最大疏水性值的75％乙醇洗脱组分清除超氧阴离子自由基（听）的能力最强，其IC50为490．49μg/mL。     

离子交换层析法分离猪股骨降血压肽的研究

猪股骨酶解液经超滤、凝胶层析初步分离后,为了得到高活性且纯度较高的降血压肽,采用离子交换层析对凝胶层析分离后的高活性组分进一步分离。通过对洗脱液p H、离子强度、流速三个因素进行研究,确定了最佳分离条件:以p H=6.0、0.05mol/L磷酸盐缓冲液为A液、B液为含1mol/LNa Cl的p H=6.0、0.05mol/L磷酸盐缓冲液,洗脱流速为0.8m L/min。结果显示:离子交换层析分离得3个组分,其中组分1的活性最高,其IC50值为0.1012mg/m L;再利用凝胶层析将组分1进行脱盐,其峰2的IC50值达到0.0836mg/m L,脱盐率达到86.60%±0.5%。     

ACE抑制活性物质分离纯化初步研究

采用超滤、凝胶过滤色谱对醋蛋酶解液进行初步分离纯化,研究结果表明,醋蛋酶解液经超滤浓缩后水解物的IC50降低了18.8%,对凝胶色谱的洗脱条件进行优化,洗脱液为去离子水、样品浓度为30%时分离效果较好,并分别对醋蛋白和醋蛋黄酶解物分离纯化,得到高活性组分C(IC50=0.102 mg/mL)和Ⅱ(IC50=0.096 mg/mL)。     

超滤技术分离双低油菜ACE抑制肽及其性能研究

采用超滤技术对双低油菜酶解物中的ACE抑制肽进行了分离提纯研究,考核了分离参数对分离效果的影响,分析了不同分子质量段多肽HPLC肽谱的变化,研究了双低油菜高ACE抑制活性多肽的耐消化性、酸碱稳定性和耐热性。结果表明,超滤分离能明显提高双低油菜ACE抑制肽的活性,截留分子质量为3 ku的超滤膜透过液IC50值下降了15%,活性多肽回收率超过58%,酶解物中有4个高活性的组分峰,小于3 ku分子质量段的ACE抑制肽有良好的耐热性、酸碱稳定性和耐消化性。     

燕麦ACE 抑制肽的分离纯化及其活性研究

通过对3 种大孔吸附树脂的比较,选择DA201-C 树脂对燕麦ACE 抑制肽进行纯化。纯化后的燕麦肽产物的ACE 抑制率达到92.86%,利用HPLC 测得纯化后燕麦ACE 抑制肽的分子质量分布在240.10～1292.11D 之间,这部分物质在整个纯化产物中占99.82%。采用SephadexG-15 凝胶分离燕麦ACE 抑制肽得到D峰,其IC50 为0.103mg/mL,分子质量545D。采用大孔吸附树脂及凝胶层析法能够较好地分离纯化燕麦ACE 抑制肽。     

高血管紧张素转化酶抑制活性燕麦蛋白酶解物的精制

先后采用离子交换和超滤工艺对高血管紧张素转化酶(Angiotensin I Converting Enzyme,ACE)抑制活性的燕麦蛋白酶解物进行了脱盐和富集2步精制处理。结果表明,在洗脱流速8倍柱体积/h和洗脱温度15℃条件下,离子交换处理能脱除酶解物中85.7%的盐分;超滤(截留相对分子质量为10000)富集可将酶解物的ACE抑制活性提高37%。精制后的酶解物中灰分含量为1.4%,蛋白质含量为90.3%,IC50值为0.135mg/mL。     

核桃蛋白ACE抑制肽分离纯化研究

核桃ACE抑制肽经超滤后,其ACE抑制率由76.58%增至78.43%,再经DA201-C大孔吸附树脂脱盐纯化后,脱盐率达到98.70%,ACE抑制率升高至80.73%;采用Sephadex G-15凝胶分离后,核桃ACE抑制肽被分为三个组分,其中活性最大的G2组分,其ACE抑制率达83.10%,且IC50为1.308 mg/mL,G2组分主要分布在500 Da¹80 Da,系为2180 Da,系为2⁴个氨基酸残基组成小肽。     

三斑海马蛋白ACE抑制肽的制备及其二级结构的研究

以三斑海马为原料,经碱性蛋白酶酶解,获得富含血管紧张素转化酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)抑制肽的酶解液。酶解液经透析、Sephadex G-25凝胶过滤色谱和反相高效液相色谱得到进一步分离纯化。结果表明,透析产物的IC50值为(0.44±0.26)mg/mL,相比酶解液(0.81±0.12)mg/mL,其ACE抑制活性更强。透析产物经Sephadex G-25凝胶柱分离纯化后,得到3种组分,其中组分F2的ACE抑制活性最强,IC50值为(0.11±0.08)mg/mL。F2经反相高效液相色谱进一步分离后,得到6个具有ACE抑制活性的组分峰,其中组分F2-4的ACE抑制活性最强,IC50值为(0.005 7±0.000 9)mg/mL。经过3步分离纯化后,成功从三斑海马蛋白中分离得到一种活性较强ACE抑制肽:ProAla-Gly-Pro-Arg-Gly-Pro-Ala(PAGPRGPA),多肽分子量为721.39 Da。圆二色谱分析多肽二级结构表明其主要含无规则卷曲。因此,从三斑海马蛋白中分离得到的多肽可能成为营养保健品和抗高血压药品及相关疾病的一种有益成分,且对海马蛋白资源的开发利用具有重要意义。     

自然乳酸发酵猪肉蛋白质降解与血管紧张素转化酶抑制肽的分离纯化

对猪肉发酵过程中蛋白质及其降解产物进行分析。结果表明：猪肉在发酵过程中蛋白氮含量随发酵时间延长呈下降趋势,非蛋白氮和氨态氮含量随发酵时间的延长而增加,多肽氮含量呈先升高后降低趋势,在发酵20 d时达最大值（0.227%）;发酵20 d酸肉多肽具有最强的体外血管紧张素转化酶（angiotensin I-converting enzyme,ACE）抑制活性,ACE抑制率达74.35%,IC50为2.75 mg/mL;采用超滤、D101型大孔树脂、葡聚糖凝胶对发酵20 d的酸肉多肽进行分离纯化,分离得到的F3组分有较强的ACE抑制活性,IC50为0.90 mg/mL,肽含量为86.54%,氨基酸组成分析显示水解后增加最多的氨基酸是脯氨酸（7.08 倍）和酪氨酸（3.26 倍）,谷氨酸、组氨酸、天冬氨酸、苯丙氨酸和丙氨酸占全部肽中氨基酸总量的49.09%,构成肽的疏水性氨基酸、芳香族氨基酸和支链氨基酸分别占39.35%、10.69%和13.65%;反相高效液相色谱显示F3组分主要由9 个峰组成,有待进一步的纯化。     

软枣猕猴桃多糖的分离纯化及抗氧化活性测定

对微波辅助提取的软枣猕猴桃多糖进行分离纯化并对各纯化组分的抗氧化活性进行测定。利用DE-AE-纤维素阴离子交换层析对软枣猕猴桃多糖进行初步分离,得到1个水洗组分和3个盐洗组分;利用Sephade-xG-100、G-200凝聚柱层析对其进行进一步分离纯化。结果表明:4个组分都为均一多糖且都不含有蛋白质;软枣猕猴桃多糖对DPPH自由基和羟基自由基具有一定的清除能力,对超氧阴离子自由基的清除能力很弱,盐洗组分的抗氧化活性明显优于水洗组分;0.1盐洗组分(0.1 mol/L NaCl溶液洗脱的组分)、0.2盐洗组分(0.2 mol/L NaCl溶液洗脱的组分)、0.3盐洗组分(0.3 mol/L NaCl溶液洗脱的组分)、Vc清除DPPH自由基的IC50分别为0.57、1.61、1.18、0.03 mg/mL;清除羟基自由基的IC50分别为1.5、5.6、2.7、0.2 mg/mL;0.1盐洗组分为软枣猕猴桃多糖中主要的抗氧化活性组分。     

牡蛎蛋白酶解多肽降糖及抗氧化活性评价

目的:利用化学方法评价9种酶对牡蛎蛋白酶解所得多肽降血糖和抗氧化活性的影响,筛选最佳酶的种类。方法:以牡蛎蛋白酶解多肽对α-淀粉酶抑制率为指标评价其体外辅助降血糖活性,以DPPH·清除率、超氧阴离子抑制率为指标评价牡蛎蛋白酶解多肽的体外抗氧化活性,筛选出最佳用酶。结果:风味蛋白酶得到的多肽对α-淀粉酶的抑制效果最好,5 mg/mL时抑制率达到67.13%,IC₅₀值为3.806 mg/mL;糜蛋白酶酶解得到的多肽对DPPH·的清除率最高,2 mg/mL时清除率为58.09%,IC₅₀值为1.16 mg/mL;同时,糜蛋白酶酶解得到的多肽对超氧阴离子的抑制率也最高,2 mg/mL时抑制率为53.64%,IC₅₀值为1.75 mg/mL。结论:风味蛋白酶和糜蛋白酶酶解所得牡蛎多肽在降糖和抗氧化方面具有较大的潜力,为进一步开展牡蛎蛋白酶解多肽的研究提供参考。     

罗非鱼肌浆蛋白源抗氧化肽的制备、分离纯化及其体外抗氧化活性

采用木瓜蛋白酶对罗非鱼肌肉蛋白组分（肌浆蛋白、肌原纤维蛋白、基质蛋白）进行酶解,研究罗非鱼不同蛋白组分酶解产物的抗氧化活性,并通过超滤、凝胶过滤色谱、反相高效液相色谱对高活性肌浆蛋白组分抗氧化肽进行分离纯化,同时对纯化后的抗氧化肽氨基酸组成予以分析。结果表明：罗非鱼肌浆蛋白酶解物（tilapia sarcoplasmic protein hydrolysates,TSPH）抗氧化活性高于肌质与肌原纤维蛋白酶解物,当肌浆蛋白酶解4 h时,TSPH（6 mg/mL）对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基清除率及其还原力均达到最高,分别为84.61%、50.01%和0.629;经超滤分离后,其分子质量小于5 kDa的组分具有较高的抗氧化活性;该组分经凝胶色谱分离后,富集得到E1～E4共4 个组分,其中E3组分（0.8～0.3 kDa）的抗氧化活性最高, 3 mg/mL E3组分对DPPH自由基清除率达83.61%,还原力为0.953;E3组分再经反相高效液相色谱分离纯化后,富集得到F1～F9共9 个组分,其中F4组分的抗氧化活性最高,其DPPH自由基的半清除质量浓度为0.78 mg/mL,且经氨基酸组成分析发现色氨酸（Trp）、甘氨酸（Gly）、组氨酸（His）为其含量较高的氨基酸,相对含量分别高达31.20%、27.25%和8.97%。     

D301阴离子交换树脂对大豆异黄酮分离特性的影响

为更好地将离子交换树脂应用于大豆异黄酮的分离纯化,研究了乙醇含量、pH、温度、初始浓度等条件对D301阴离子交换树脂吸附分离大豆异黄酮的影响。静态吸附实验结果表明,该树脂在以水为溶剂、pH 8左右、40℃时对大豆异黄酮有最好的吸附效果。穿透曲线实验表明,动态饱和吸附量受温度影响较大,当柱温为50℃、初始浓度C07.03 mg/mL时,饱和吸附量为105.0 mg/g干树脂。洗脱曲线实验表明,采用体积分数75%乙醇洗脱,异黄酮回收率为89.3%,产品中大豆异黄酮含量高达56.0%,含量比原料提高了十几倍。表明D301阴离子交换树脂对大豆异黄酮的分离纯化具有较好的选择性和应用前景。