鳗鱼钙螯合肽制备工艺研究

本文以鳗鱼尾为原料,采用现代酶解技术高效制备鳗鱼钙螯合肽。系统研究了单酶的种类、多酶复配、酶解时间和酶添加量对蛋白回收率、肽得率以及产物钙螯合能力的影响规律,并获得最佳酶解工艺:添加鳗鱼尾蛋白3.5‰的胰酶,调整pH至8.0在55℃下酶解3 h,然后调整体系pH至4.0,加入鳗鱼尾蛋白3.5‰的酸性蛋白酶在55℃下继续酶解2 h得到鳗鱼肽,蛋白回收率和肽得率分别为66.61%和52.46%。并在此基础上,研究了螯合温度、pH值以及质量比对鳗鱼肽螯合能力的影响,优化获得螯合条件为:鳗鱼肽在30℃,pH值为9.0条件下按肽钙质量比1:2,与钙离子螯合30 min得到鳗鱼钙螯合肽,螯合物的钙离子含量为56.78 mg/g。通过氨基酸成分分析,发现鳗鱼肽与钙的螯合反应中,谷氨酸和天冬氨酸等酸性氨基酸的贡献最大。     

大黄鱼蛋白肽-钙螯合物的制备及性质研究

目的 制备大黄鱼蛋白肽-钙螯合物,研究其结构性质,深度研究大黄鱼多肽的促钙吸收活性。方法 以大黄鱼鱼糜为原料,通过胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶进行酶解制备多肽,将肽与钙进行螯合,探究大黄鱼蛋白肽及其肽-钙螯合物的性质功能。结果 三种酶解肽中,胰酶肽钙螯合含量最高,胰酶肽的粒径最小,肽-钙螯合物相比于肽的粒径都有所减小,说明肽-钙螯合物是一种致密的纳米颗粒并呈现出折叠多孔的网络结构。这些变化可归因于肽和钙离子之间的相互作用。紫外吸收光谱、荧光光谱、红外图谱和圆二色光谱的结果表明大黄鱼蛋白肽与钙离子螯合,生成了新的肽-钙螯合物。结论 三种酶解肽中,胰蛋白酶水解物的钙离子结合能力在三种蛋白酶获得的水解物中最高。因此,在本研究中胰蛋白酶被认为是制备大黄鱼蛋白水解物钙离子结合活性肽的最优酶制剂,为大黄鱼的高值化利用和新型钙制剂的开发提供了理论依据和实验参考。     

大豆分离蛋白肽钙螯合物的制备及表征

研究了酶解时间和酸法脱酰胺改性对脱植酸大豆分离蛋白肽钙离子螯合能力的影响,并对螯合物的结构特性及营养特性进行表征。结果表明:酶解240 min的肽有较好的钙结合量(57.85mg/g),螯合物得率为28.43%,脱酰胺后钙结合量和螯合物得率分别增加到75.37 mg/g、34.55%;氨基酸分析结果表明酸性氨基酸是参与螯合物形成的重要氨基酸;相对分子质量分布实验结果说明钙离子更倾向于结合相对分子质量大于等于1 000的肽段,螯合物得率高,但相对分子质量小于等于500的肽段是获得更高钙结合量螯合物的重要肽源;红外光谱分析表明钙结合后引起肽段结构的变化,肽链羧基中的O及氨基中的N是主要配位原子;体外消化吸收模拟实验制备的肽钙螯合物有较好的胃胰酶耐受性,经消化后肽段相对分子质量几乎没有变化,钙保留率稳定在87%左右,生物利用率达81.81%。     

钙结合卵黄高磷蛋白磷酸肽的制备及其肽钙螯合物的结构表征

以鸡蛋蛋黄为原料制备卵黄高磷蛋白磷酸肽（phosvitin phosphopeptide,PPP）,并与钙离子螯合制备肽钙补充剂。通过高温高压处理卵黄高磷蛋白,先用胰蛋白酶酶解,以水解度和肽钙结合率为指标,进一步优化碱性蛋白酶的酶解条件以制备PPP。PPP与钙螯合获得螯合物PPP-Ca,通过紫外光谱、红外光谱分析、圆二色谱分析、扫描电镜和Zeta电位分析表征PPP-Ca的结构特性。结果表明最佳酶解条件为加酶量5%、酶解90 min、pH 9.0、温度40℃,在此最优条件下水解度为（25.45±0.17）%,肽钙结合率为（93.41±1.10）%。结构表征发现PPP-Ca主要通过羧基、氨基和磷酸基团相互作用结合,PPP和钙离子结合后其结构变得紧密有序,且有聚集现象。     

响应面法优化乳清蛋白肽螯合钙离子的研究

目的:为优化乳清蛋白肽-钙的螯合工艺,在单因素试验的基础上应用响应面法对乳清蛋白肽与氯化钙的螯合工艺进行优化,确定最优水平,得到乳清蛋白肽-钙螯合物,以期为人们提供1种新型的保健食品。方法:利用复合蛋白酶和复合风味蛋白酶酶解乳清蛋白,将所得乳清蛋白肽与钙离子进行螯合反应,优化工艺制备螯合产物,并利用红外光谱法和荧光光谱法对乳清蛋白肽-钙螯合物进行表征。结果:根据响应面分析,得到优化的乳清蛋白螯合钙的制备条件为:以液体钙的形式添加,乳清蛋白肽与氯化钙质量比24∶1,乳清蛋白肽质量浓度35 mg/mL,反应时间20 min,反应温度30℃,pH 7.0。采用红外光谱法和荧光光谱法对螯合物进行表征,表明所得物质为乳清蛋白肽与钙的螯合物。结论:经酶水解得到的乳清多肽能够与钙离子螯合。优化得到最佳螯合工艺,为乳清蛋白金属螯合产品的生产和开发提供了新的思路。     

罗非鱼骨胶原钙螯合肽的酶解制备

本研究以罗非鱼骨胶原蛋白为原料酶解制备具有良好钙螯能力性的活性肽。以钙螯合活性为指标,将罗非鱼骨架经过脱肉、脱钙等前处理获得的罗非鱼骨胶原蛋白通过木瓜蛋白酶酶解制备得到罗非鱼骨胶原蛋白肽,通过单因素及正交试验对制备罗非鱼骨胶原螯合肽的酶解工艺进行优化。同时对最优条件下酶解获得的罗非鱼骨胶原钙螯合肽的分子量及氨基酸组成进行分析。结果表明,最优酶解工艺条件为:酶解时间4.5 h,pH 6.5,酶解温度62℃,酶底比0.6%。罗非鱼骨胶原钙螯合肽是一类小分子功能活性肽。同时通过对比罗非鱼骨胶原钙螯合肽及其钙-肽螯合物氨基酸组成,发现胱氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸和赖氨酸等氨基酸对活性肽的钙螯合能力起到重要作用。     

海洋骨胶原低聚肽钙的分离纯化及结构鉴定

以三文鱼骨作为原料,以碳酸钙作为钙源制备出海洋骨胶原低聚肽钙,对其总蛋白含量、螯合率、得率进行测定,结果表明总蛋白含量为62.56%±0.26%,螯合率为51.38%±0.09%,螯合物得率为42.06%±0.10%。然后利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对其进行分离纯化,收集得到8个组分峰,利用Q-TOF质谱仪测定肽序列,共分析出22个肽段,分子量大多在1000 u以下。     

响应面法优化罗非鱼鳞钙结合肽酶解工艺及其特性表征

为研究罗非鱼鳞钙结合肽酶解制备最佳工艺条件及其螯合特性,从而为促钙吸收活性物质的研究提供基础,本研究以脱钙罗非鱼鳞为原料,钙螯合活性为指标,选用木瓜蛋白酶对罗非鱼鳞酶解工艺进行优化,获得罗非鱼鳞钙结合肽,并通过氨基酸分析、紫外光谱和红外光谱表征肽钙螯合特性。结果表明,罗非鱼鳞钙结合肽的最优酶解条件为底物浓度8%、时间2 h、酶底比0.3%、pH7、温度60 ℃,在此条件下酶解物钙螯合活性为(38.31±0.4) μg/mL。表征结果表明,螯合钙离子后,肽钙螯合物中天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、赖氨酸、丝氨酸、半胱氨酸及组氨酸的含量分别增加了0.88%、1.48%、0.34%、0.53%、0.04%、0.38%、0.46%。钙结合肽中的羧基氧和氨基氮等基团参与了与钙离子的结合,形成了罗非鱼鳞肽钙螯合物。罗非鱼鳞钙结合肽具有较高的钙螯合活性,这为补钙剂的生产应用奠定了基础。     

玉米低聚肽螯合铁（II）的制备和结构表征

以玉米低聚肽和氯化亚铁为原料制备玉米低聚肽螯合铁（II）,以得率和螯合率评价螯合效果,通过单因素实验、响应面中心组合设计和验证实验确定最佳工艺。通过高效液相色谱仪（HPLC）测定玉米低聚肽螯合铁（II）的氨基酸组成,并通过傅里叶变换红外光谱（FTIR）和扫描电镜（SEM）对玉米低聚肽螯合铁（II）的结构进行表征。结果表明,玉米低聚肽螯合铁（II）的最佳制备工艺为肽盐比5:1,pH7.0,螯合时间35 min,螯合温度65 ℃。此条件下,玉米低聚肽螯合铁（II）的得率为46.59%±1.69%,铁（II）的螯合率为51.75%±2.10%。玉米低聚肽螯合铁（II）中必需氨基酸含量占比25.58%,相对分子质量小于1000 u的组分占比高达89.77%。FTIR结果表明,铁（II）与玉米低聚肽末端羧基或氨基中的氮原子、氧原子形成配位键,从而形成螯合物;SEM结果显示,螯合后分子发生聚集,圆球状结构消失,说明成功生成了一种新型玉米低聚肽铁螯合物。     

汉麻肽钙螯合物的制备及其结构表征和稳定性

汉麻籽仁经脱脂、提取汉麻蛋白、酶法水解制备汉麻肽（HPIH）,再与钙螯合制备汉麻肽钙螯合物（HPIH-Ca）。以钙螯合率为指标,采用单因素实验和正交实验优化HPIH-Ca制备工艺条件;运用红外光谱和圆二色谱分析HPIH-Ca的结构,利用扫描电镜表征HPIH-Ca微观结构,通过热处理、pH和体外模拟消化评价HPIH-Ca的稳定性。结果表明：胰酶是最佳水解酶;HPIH-Ca的最佳制备工艺条件为肽钙比2∶ 1（10 mg/mL HPIH溶液与0.05 mol/L无水氯化钙溶液体积比）、pH 8.0、反应温度60 ℃、反应时间45 min,在最佳条件下钙螯合率为47.61 mg/g;Ca2+与汉麻肽主要通过羧基氧原子和氨基氮原子相互作用; Ca2+与HPIH结合后形成了更为有序和紧凑的二级结构;HPIH与Ca2+交联形成结构有序、紧密的呈片状或大颗粒的肽钙螯合物;HPIH-Ca具有一定的耐热性,但在酸性条件下不稳定;体外模拟消化实验结果显示,HPIH-Ca能保持70%以上的持钙率,具有较高的生物利用度。     

酶法制备乳源钙螯合肽及其特性表征

以牛乳酪蛋白为原料,选用胰蛋白酶为水解酶,以钙螯合活性为指标,对底物浓度、加酶量、pH值、温度和酶解时间5个因素进行单因素试验和正交试验。采用高效凝胶过滤色谱法测定钙螯合肽的分子量分布,同时通过氨基酸自动分析法、紫外-可见光谱和红外光谱法来表征最优酶解条件下的钙螯合肽和钙肽螯合物的结构特性。试验结果表明:底物浓度7%,加酶量0.8%,pH8.7,温度53℃,时间3 h,为最优酶解条件,其钙螯合活性为46.78μg/mL。在此条件下获得的钙螯合肽中,分子量在3 kDa以下的肽组分占92.11%;氨基酸分析表明,谷氨酸、丝氨酸和天冬氨酸这几种具有较强螯合活性的氨基酸的含量明显增加;由紫外光谱和红外光谱的结果可得,钙螯合肽的结构在螯合前后发生了明显的变化,其主要结合位点是-NH2、-COOH。     

正交试验优化花生肽螯合锌的制备工艺

研究了花生蛋白水解物和锌离子制备肽锌螯合物的工艺条件,以螯合率为评价指标,考察肽与锌的质量比、反应pH、反应温度和反应时间对螯合反应的影响。在单因素试验基础上,采用4因素3水平正交法确定花生肽-锌螯合物的制备工艺。最佳工艺条件:花生肽-锌质量比4∶1、反应体系pH 6.0、反应温度50℃、反应时间40 min。在此条件下,锌的螯合率为57.04%。     

响应面法优化纳豆芽孢杆菌发酵制备多肽螯合钙工艺

以牛骨粉和大豆粉为主要原料,采用纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto）SWS-001发酵制备多肽螯合钙,并以螯合钙产量为响应值,采用单因素试验及响应面试验对其发酵培养基组成进行优化。结果表明,B. natto SWS-001发酵制备多肽螯合钙的最优发酵培养基组成为牛骨粉3.5%、大豆粉4.8%、葡萄糖0.5%、KH2PO4 0.2%、K2HPO4·3H2O 0.52%、MgSO4·7H2O 0.1%。在此优化条件下,多肽螯合钙含量最高达到（707.47±32.16） mg/L,较优化前提高29.42%。     

Calcium Bioavailability of Nanonized Pearl Powder for Adults

ABSTRACT: The present study was aimed to evaluate the calcium bioavailability of pearl powder for humans. Both the nanonized pearl powder (NPP) and the micronized pearl powder (MPP) prepared by a dry grinder were tested. A group of healthy adults free from hyperthyroidism, hypercalcemia, and hypocalcemia were recruited as the subjects for oral administration with the pearl powder. The bioavailability was evaluated by the serum total calcium increment, the serum intact parathyroid hormone (iPTH) reduction, and the urine calcium/creatinine ratio increment in 6 h after administration. The results show better absorption and retention of calcium from NPP, as reflected with the shorter time elapsed before the maximum concentration of calcium appeared in the serum, higher iPTH reduction, more calcium absorption, and higher maximum calcium concentration (C_max) in serum after ingestion, than that from MPP. We conclude that pearl powder is a beneficial source of calcium for adults and that nanonization improves its calcium bioavailability.     

花生肽钙复合物钙结合特性及氨基酸组成研究

利用花生分离蛋白通过酶解法制备花生肽,将花生肽脱酰胺处理,制备花生肽钙复合物。研究脱酰胺处理对花生肽钙结合量的影响,并分析花生肽钙复合物钙结合特性及氨基酸组成。结果表明:脱酰胺处理240 min后花生肽的钙结合量由82. 05 mg/g显著增加到135. 26 mg/g,表明脱酰胺处理可以显著提高花生肽的钙结合量;扫描电镜分析结果表明加钙反应后花生肽微观结构发生明显变化,由疏松片状结构聚合为颗粒状结构;傅里叶红外光谱分析结果表明花生肽肽链上的氨基及羧基是钙离子的主要结合位点,经脱酰胺处理羧基伸缩振动带进一步发生移动,表明脱酰胺后羧基上的氧原子与钙的配位作用得到增强,促进了花生肽钙结合量的提高;花生肽钙复合物中天冬氨酸含量为10. 76%,谷氨酸含量为23. 49%,表明酸性氨基酸含量是花生肽具有高钙结合量的重要因素。     

白鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的工艺优化

为减少淡水鱼加工过程中副产物对环境的污染和资源的浪费、提高淡水鱼的附加值,对白鲢鱼骨制备胶原多肽螯合钙的工艺进行研究。以白鲢鱼骨和氯化钙为原料,在一定条件下制备胶原多肽螯合钙,考察温度、鱼骨胶原多肽与氯化钙的质量比、时间、pH值对螯合率和螯合物中钙含量的影响。根据单因素试验结果,对胶原多肽螯合钙工艺进行四因子二次正交旋转设计优化,得到鱼骨胶原多肽螯合钙的最佳工艺参数为温度42 ℃、时间38 min、鱼骨胶原多肽与氯化钙的质量比2.1∶1、pH 6.8,此条件下的螯合率和螯合物中的钙含量分别为80.4%和12.1%。对螯合钙进行氨基酸组成成分分析,其总氨基酸含量为61.03%,且具备典型的胶原蛋白氨基酸组成特征。红外光谱扫描和电镜扫描观察表明：钙离子与胶原多肽发生了螯合反应,结合方式有离子结合、配位结合和吸附作用。     

磷酸化大豆多肽螯合钙的制备工艺优化及其对成骨细胞的活性影响

为了探究磷酸化大豆多肽螯合钙（PSPCC）的生理活性,提高磷酸化大豆多肽螯合钙的钙螯合量,本研究通过单因素实验和响应面试验相结合的方式优化磷酸化大豆多肽螯合钙的制备工艺,并通过体外实验评价了磷酸化大豆多肽螯合钙对成骨细胞的活性影响。结果表明,制备磷酸化大豆多肽螯合钙的最佳工艺条件为:三聚磷酸钠与大豆多肽的质量比1:2,磷酸化反应温度52 ℃,磷酸化反应pH7.0,磷酸化反应时间9.7 h,磷酸化大豆多肽与氯化钙的质量比2:1,螯合反应pH8.0,螯合反应温度50 ℃,螯合反应时间1.5 h,钙螯合量最大为107.25±0.10 mg/g;MTT法结果显示,磷酸化大豆多肽螯合钙组（D组）成骨细胞相对增殖率是大豆多肽组（A组）的1.6倍（第3 d）;ALP染色实验表明,D组染色阳性率是空白组的33.6倍。采用ALP试剂盒对各样品第7 d的ALP活性进行检测,结果显示D组ALP活力是空白组的6.2倍。通过茜素红染色实验发现,D组钙结节数量是空白组的94倍。本研究使用响应面法对磷酸化大豆多肽螯合钙的制备工艺优化合理,并初步证明了磷酸化大豆多肽螯合钙对成骨细胞具有显著的促增殖、分化作用（P<0.05）,且作用效果高于其它样品,为后续磷酸化大豆多肽螯合钙的进一步开发利用提供了一定的理论基础。     

罗非鱼骨粉制备氨基酸螯合钙及抗氧化性研究

利用罗非鱼鱼排、鱼头酶解获得鱼骨粉和复合氨基酸液,然后以罗非鱼骨粉的酸解液为钙源,与复合氨基酸液进行螯合反应制备氨基酸螯合钙,并对其抗氧化性进行研究。在单因素试验的基础上采用多元线性回归正交组合试验,以螯合率为指标,研究复合氨基酸液与罗非鱼骨粉的螯合条件。结果显示：pH7.0、反应时间90min、反应温度60℃、氨基态氮质量浓度1.6g/L,产品螯合率为57.22%。抗氧化研究结果表明,在一定的体积范围内,氨基酸螯合钙浓缩液的还原力随着其体积的增大而增大。氨基酸螯合钙浓缩液对羟自由基的清除率和对超氧阴离子自由基的抑制率分别为6.60% 和51.67%。     

麦胚多肽-钙螯合物制备工艺优化及其结构表征

为减少小麦胚芽的资源浪费,提高其附加值,同时解决居民缺钙的问题,对麦胚多肽与钙离子螯合的工艺进行研究。以小麦胚芽为原料,以螯合率为考察指标,设计单因素试验和正交试验,考察温度、麦胚多肽与钙离子物质的量比、时间、pH值对螯合率影响。结果表明,在温度65℃、麦胚多肽与钙离子物质的量比3∶1、时间60 min、pH 9.5的条件下,螯合率达到最大,为86.21%。对最佳条件下制备的麦胚多肽-钙螯合物进行结构分析,红外光谱表明麦胚多肽的氨基和羧基都参与了螯合反应;圆二色谱表明螯合物的二级结构由原来的无序结构向有序、紧密的结构转变;扫描电子显微镜表明螯合物的分子有明显的聚集现象。