大豆肽螯合钙能力影响因素的研究

研究脱酰胺改性方法及改性方式、肽钙比及肽段的金属离子亲和特性对大豆肽螯合钙能力的影响。结果表明:酸法脱酰胺对大豆肽螯合钙能力的改善要优于Glutaminase酶法脱酰胺的效果;并且先酶解再脱酰胺方式的效果要优于先脱酰胺再酶解的方式;将肽钙比扩大至1∶2(质量摩尔比)后,大豆肽B的钙结合量增幅最大,由93.67 mg/g增加至129.32 mg/g;肽段的金属离子亲和能力越强,钙螯合效果越好;羧基中O原子及氨基中N原子是主要配位原子;肽键也参与了螯合;相对分子质量大于1 k Da的肽段较相对分子质量小于1 k Da的肽段更易参与钙螯合物的形成。     

花生肽钙复合物钙结合特性及氨基酸组成研究

利用花生分离蛋白通过酶解法制备花生肽,将花生肽脱酰胺处理,制备花生肽钙复合物。研究脱酰胺处理对花生肽钙结合量的影响,并分析花生肽钙复合物钙结合特性及氨基酸组成。结果表明:脱酰胺处理240 min后花生肽的钙结合量由82. 05 mg/g显著增加到135. 26 mg/g,表明脱酰胺处理可以显著提高花生肽的钙结合量;扫描电镜分析结果表明加钙反应后花生肽微观结构发生明显变化,由疏松片状结构聚合为颗粒状结构;傅里叶红外光谱分析结果表明花生肽肽链上的氨基及羧基是钙离子的主要结合位点,经脱酰胺处理羧基伸缩振动带进一步发生移动,表明脱酰胺后羧基上的氧原子与钙的配位作用得到增强,促进了花生肽钙结合量的提高;花生肽钙复合物中天冬氨酸含量为10. 76%,谷氨酸含量为23. 49%,表明酸性氨基酸含量是花生肽具有高钙结合量的重要因素。     

脱盐咸鸭蛋清促钙吸收肽的制备及脱酰胺修饰

为使咸鸭蛋清得到高值化利用,本实验以电渗析脱盐的咸鸭蛋清为原料,以可溶性钙结合量、水解度为指标,用Alcalase 2.4 L碱性蛋白酶、Neutrase 0.8 L中性蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶对脱盐咸鸭蛋清进行酶解,筛选出最佳实验用酶为Protamex复合蛋白酶;进而对制备的蛋清肽进行了脱酰胺处理,分析蛋清肽的氨基酸含量。结果表明：适合Protamex复合蛋白酶的酶解条件为加酶量2×104 U/g、底物质量浓度30 g/L、温度50 ℃、pH 6.5,酶解3.5 h。在此条件下,水解度为21.97%,所得蛋清肽的可溶性钙结合量为29.22 μg/mL。再经脱酰胺修饰后,其可溶性钙结合量显著增加（P＜0.05）。氨基酸分析显示蛋清肽中含有较多与钙结合相关的氨基酸。以脱盐咸鸭蛋清为原料制备的肽具有较高的钙结合活性,脱酰胺修饰可使其钙结合能力显著提升。     

酸法脱酰胺结合酶解制备米蛋白肽及其与亚铁螯合工艺研究

采用米蛋白为原料,经酸法脱酰胺、蛋白酶酶解后,以FeCl_2作为铁源制备米蛋白肽亚铁螯合物。结果表明,碱性蛋白酶对米蛋白的水解效果最好,经4 h酶解后蛋白的水解度和蛋白肽得率分别达到23.4%和73.4%。酸法脱酰胺处理能有效提高米蛋白肽的得率。采用0.4 mol/L HCl在95℃处理3 h制备的脱酰胺米蛋白,其水解度和蛋白肽得率分别达到27.1%和92.6%;单因素试验表明反应温度、pH和质量比均对米蛋白肽亚铁螯合物的产品得率和螯合能力有显著影响;米蛋白肽与亚铁盐的最佳螯合工艺条件为:反应温度50℃、蛋白肽与亚铁盐的质量比2:1、pH 6.5;在此条件下其产品得率为65.2%,亚铁螯合能力最大为21.6 mg/g。     

响应面法优化罗非鱼鳞钙结合肽酶解工艺及其特性表征

为研究罗非鱼鳞钙结合肽酶解制备最佳工艺条件及其螯合特性,从而为促钙吸收活性物质的研究提供基础,本研究以脱钙罗非鱼鳞为原料,钙螯合活性为指标,选用木瓜蛋白酶对罗非鱼鳞酶解工艺进行优化,获得罗非鱼鳞钙结合肽,并通过氨基酸分析、紫外光谱和红外光谱表征肽钙螯合特性。结果表明,罗非鱼鳞钙结合肽的最优酶解条件为底物浓度8%、时间2 h、酶底比0.3%、pH7、温度60 ℃,在此条件下酶解物钙螯合活性为(38.31±0.4) μg/mL。表征结果表明,螯合钙离子后,肽钙螯合物中天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、赖氨酸、丝氨酸、半胱氨酸及组氨酸的含量分别增加了0.88%、1.48%、0.34%、0.53%、0.04%、0.38%、0.46%。钙结合肽中的羧基氧和氨基氮等基团参与了与钙离子的结合,形成了罗非鱼鳞肽钙螯合物。罗非鱼鳞钙结合肽具有较高的钙螯合活性,这为补钙剂的生产应用奠定了基础。     

鳗鱼钙螯合肽制备工艺研究

本文以鳗鱼尾为原料,采用现代酶解技术高效制备鳗鱼钙螯合肽。系统研究了单酶的种类、多酶复配、酶解时间和酶添加量对蛋白回收率、肽得率以及产物钙螯合能力的影响规律,并获得最佳酶解工艺:添加鳗鱼尾蛋白3.5‰的胰酶,调整pH至8.0在55℃下酶解3 h,然后调整体系pH至4.0,加入鳗鱼尾蛋白3.5‰的酸性蛋白酶在55℃下继续酶解2 h得到鳗鱼肽,蛋白回收率和肽得率分别为66.61%和52.46%。并在此基础上,研究了螯合温度、pH值以及质量比对鳗鱼肽螯合能力的影响,优化获得螯合条件为:鳗鱼肽在30℃,pH值为9.0条件下按肽钙质量比1:2,与钙离子螯合30 min得到鳗鱼钙螯合肽,螯合物的钙离子含量为56.78 mg/g。通过氨基酸成分分析,发现鳗鱼肽与钙的螯合反应中,谷氨酸和天冬氨酸等酸性氨基酸的贡献最大。     

脱酰胺对葵花籽蛋白酶解肽的钙结合量及体外消化性的影响

通过谷氨酰胺酶对葵花籽蛋白酶解肽进行脱酰胺,得到脱酰胺的葵花籽蛋白酶解肽,以此为试样,研究脱酰胺对葵花籽蛋白酶解肽的钙结合能力的影响。结果发现,脱酰胺的葵花籽蛋白酶解肽的钙结合量由72.97mg/g显著增加到98.20 mg/g,说明脱酰胺可以显著提高葵花籽蛋白酶解肽的钙结合量;通过傅立叶红外光谱对脱酰胺前后葵花籽蛋白酶解肽的钙结合位点进行分析,发现葵花籽蛋白酶解肽与钙结合后,氨基的特征吸收峰均发生移动,N-H的伸缩振动带由3323cm-1移动至3340cm-1,酰胺Ⅱ带由1160cm-1移动至1656cm-1,酰胺Ⅲ带由1241cm-1移动至1246cm-1,同时脱酰胺使其酰胺Ⅰ带由1660cm-1移动至1656cm-1,说明葵花籽蛋白酶解物肽链上的氨基及羧基是钙的主要结合位点,且脱酰胺后C=0伸缩振动引起的酰胺Ⅰ带进一步向低频移动,表明脱酰胺后羧基上的氧原子与钙的配位作用得到增强,促进了葵花籽蛋白酶解肽钙结合量的提高;另一方面研究还发现脱酰胺后葵花籽蛋白酶解肽钙复合物的钙结合量能保持86%以上,与未脱酰胺的花籽肽钙复合物相比消化后的钙结合量提高24%以上。表明脱酰胺能够显著提高葵花籽蛋白酶解肽钙复合物的消化稳定性,即提高葵花籽蛋白酶解肽的钙结合稳定性。     

大豆肽钙螯合物的制备、稳定性及表征

豆粕通过醇洗、酸沉、水解工艺制备大豆肽,并将大豆肽与钙离子进行螯合反应,制备大豆肽钙螯合物。测定了大豆肽钙螯合物的氨基酸组成及在磷酸盐溶液中、不同pH下的稳定性,并对大豆肽钙螯合物进行DSC、TGA、Zeta电位、XRD分析。结果表明:大豆肽钙螯合物的钙结合量为53. 03 mg/g,与CaCl_2相比,大豆肽钙螯合物具有更高的钙保留率;具有较高钙螯合能力的大豆肽的相对分子质量主要集中在小于1 kDa的范围内;大豆肽与钙离子螯合后,谷氨酸和天冬氨酸含量由34. 33%提高至49. 83%;大豆肽钙螯合物在不同pH条件下均未发生较大程度的解离;大豆肽与钙离子反应后,电负值由-37. 73 mV降到-12. 32 mV;大豆肽钙螯合物在XRD图谱中的衍射峰收窄,峰值由20°偏移至22. 5°,同时在42. 5°出现1个微弱的衍射峰,且氯化钙的特征峰消失,表明大豆肽与钙离子形成了新的化合物;大豆肽钙螯合物具有更好的热稳定性。     

花生蛋白钙螯合肽的制备、富集及表征

本文对花生蛋白钙螯合肽的制备工艺进行了研究,并对所得水解产物及其钙螯合物进行了表征。结果表明,在6种市售的蛋白酶中,Alcalase 2.4L对花生蛋白的水解能力最强,其与ProteAXH进行分步复合水解可进一步提高水解效果,在最适条件下所得花生肽的钙结合能力达到了84.09 mg/g、蛋白质回收率高达87.89%;采用酸法脱酰胺可显著提高花生肽的钙结合能力,在最适条件下可达到132.04 mg/g;利用大孔树脂DM301对脱酰胺花生肽进行富集可进一步提高其钙结合能力,在最优条件下可高达164.34 mg/g。荧光光谱及圆二色谱分析证实花生肽与钙离子发生了螯合作用,红外光谱分析则表明花生肽主要通过其羧基与钙离子进行结合。因此,花生肽是一种潜在的钙螯合剂,这对于花生蛋白的高值化综合利用具有重要的参考价值。     

盐酸法脱酰胺结合酶解制备高携钙能力鸭蛋蛋清肽

为了利用食品工业下脚料咸鸭蛋蛋清,以鸭蛋蛋清蛋白为原料,通过盐酸脱酰胺、蛋白酶酶解后,得到具有高携钙能力的蛋清肽。结果显示,温度和盐酸浓度对脱酰胺度影响显著(P 0. 05),优化后的脱酰胺条件为:温度95℃,反应时间4 h,盐酸浓度0. 5 mol/L,在此条件下蛋清蛋白的脱酰胺度达72. 67%。从5种常用的商业用酶中筛选出木瓜蛋白酶为实验用酶,就可溶性钙结合量而言,酶解时间和料液比对酶解效果影响显著(P 0. 05),而酶的质量分数对酶解效果有极显著影响(P 0. 01)。经优化后,得到最佳酶解工艺为:温度50℃、pH 6. 5、料液比5%、酶的质量分数0. 3%、酶解时间3 h。在此条件下,得到的脱酰胺鸭蛋蛋清肽的可溶性钙结合量为14. 42 mg Ca/g肽。经过超滤分级后,发现分子质量较小的级分具有更强的钙结合能力。     

琥珀酸脱酰胺对小麦面筋蛋白酶解特性的影响

研究琥珀酸不同脱酰胺程度对小麦面筋蛋白Pancreatin酶解过程中蛋白回收率、水解度、总酸、总糖的影响,并对酶解48h酶解液的肽分子量分布、氨基酸及风味进行分析评价.结果表明:蛋白回收率、水解度、总酸在酶解过程中逐渐上升,总糖含量在酶解12h后下降,脱酰胺后酶解产物的蛋白回收率和水解度增大,而高脱酰胺程度下又略有降低;琥珀酸脱酰胺后酶解产物分子量大于10000Da的肽段减少,3000～5000Da的肽段增加;琥珀酸脱酰胺使酶解产物风味明显提高,其中琥珀酸高脱酰胺程度预处理的酶解液苦味最低,且具有较强的鲜味和成味;氨基酸分析表明,琥珀酸高脱酰胺预处理使酶解液游离氨基酸中鲜甜味氨基酸比例增大,苦味氨基酸比例降低,同时必需氨基酸含量升高.     

酶法制备乳源钙螯合肽及其特性表征

以牛乳酪蛋白为原料,选用胰蛋白酶为水解酶,以钙螯合活性为指标,对底物浓度、加酶量、pH值、温度和酶解时间5个因素进行单因素试验和正交试验。采用高效凝胶过滤色谱法测定钙螯合肽的分子量分布,同时通过氨基酸自动分析法、紫外-可见光谱和红外光谱法来表征最优酶解条件下的钙螯合肽和钙肽螯合物的结构特性。试验结果表明:底物浓度7%,加酶量0.8%,pH8.7,温度53℃,时间3 h,为最优酶解条件,其钙螯合活性为46.78μg/mL。在此条件下获得的钙螯合肽中,分子量在3 kDa以下的肽组分占92.11%;氨基酸分析表明,谷氨酸、丝氨酸和天冬氨酸这几种具有较强螯合活性的氨基酸的含量明显增加;由紫外光谱和红外光谱的结果可得,钙螯合肽的结构在螯合前后发生了明显的变化,其主要结合位点是-NH2、-COOH。     

大黄鱼蛋白肽-钙螯合物的制备及性质研究

目的 制备大黄鱼蛋白肽-钙螯合物,研究其结构性质,深度研究大黄鱼多肽的促钙吸收活性。方法 以大黄鱼鱼糜为原料,通过胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶进行酶解制备多肽,将肽与钙进行螯合,探究大黄鱼蛋白肽及其肽-钙螯合物的性质功能。结果 三种酶解肽中,胰酶肽钙螯合含量最高,胰酶肽的粒径最小,肽-钙螯合物相比于肽的粒径都有所减小,说明肽-钙螯合物是一种致密的纳米颗粒并呈现出折叠多孔的网络结构。这些变化可归因于肽和钙离子之间的相互作用。紫外吸收光谱、荧光光谱、红外图谱和圆二色光谱的结果表明大黄鱼蛋白肽与钙离子螯合,生成了新的肽-钙螯合物。结论 三种酶解肽中,胰蛋白酶水解物的钙离子结合能力在三种蛋白酶获得的水解物中最高。因此,在本研究中胰蛋白酶被认为是制备大黄鱼蛋白水解物钙离子结合活性肽的最优酶制剂,为大黄鱼的高值化利用和新型钙制剂的开发提供了理论依据和实验参考。     

牡蛎肽锌螯合物的制备工艺研究

分析牡蛎肽氨基酸组成及相对分子质量分布,并以牡蛎肽为原料、硫酸锌为锌源对牡蛎肽锌螯合物的制备工艺进行研究,通过测定锌离子螯合率和螯合物得率衡量螯合效果。结果表明,牡蛎肽相对分子质量小于1000 u的组分高达92.34%,富含谷氨酸和天冬氨酸这两种酸性氨基酸及其酰胺;保证螯合率及得率的最佳螯合条件为:肽与硫酸锌质量比为20∶1,肽浓度为0.06 g/m L,反应温度为50℃,沉淀剂乙醇为5倍反应液体积,p H5.33,反应时间60 min。在此条件下锌离子的螯合率为89.55%±0.23%,螯合物得率为56.64%±0.55%。     

采用木瓜蛋白酶制备乌鸡蛋白肽的研究

探讨了各单因子对木瓜蛋白酶酶解乌鸡蛋白质的影响及水解度与肽得率、总氮得率之间的关系。结果表明,pH变化对肽得率影响很小;随着时间延长,水解度和总氮得率不断升高,肽得率3h后达到平衡阶段;温度<70℃,随着温度的提高、酶用量的增加,水解度、肽得率和总氮得率均增加,但总氮得率增加明显;随着底物浓度的减少,水解度几乎不变,而肽得率和总氮得率均增加。综合考虑,最佳水解条件为温度70℃,酶用量E/S4000U/g,底物浓度7%。酶解3h后,酶解液中必需氨基酸37.41%,氨基酸总量61.01mg/mL,其中游离氨基酸9.89%,肽含量90.11%。     

琥珀酸脱酰胺对小麦面筋蛋白酶解产物抗氧化性的影响

研究琥珀酸不同脱酰胺程度对小麦面筋蛋白胰酶的酶解产物抗氧化性的影响。在相同水解度下,以DPPH.清除率、.OH清除率、ORAC值为抗氧化指标,结果表明低脱酰胺程度(22.4%)的小麦面筋蛋白酶解产物的抗氧化性有较大幅度的提高,高脱酰胺程度(60.4%)的小麦面筋蛋白酶解产物的抗氧化性降低。水解度15%的酶解产物的肽分子量分布表明,低脱酰胺的小麦面筋蛋白酶解产物中分子量小于3000u的肽段增加,高脱酰胺的小麦面筋蛋白酶解产物中分子量小于3000u的肽段减少;在相同水解度下的氨基酸分析结果表明,脱酰胺后的小麦面筋蛋白酶解生成的肽的疏水性和抗氧化性的氨基酸含量提高。因此,低脱酰胺的小麦面筋蛋白酶解产物抗氧化性提高的主要原因是产物中含疏水性和抗氧化性氨基酸的小分子肽含量提高。     

乳清蛋白肽-钙螯合物的制备及性质研究

目的:研究乳清蛋白肽与金属离子螯合的工艺及螯合物的性质,发掘乳清蛋白与金属离子螯合物的保健功效,为人们提供一种新型的保健食品。方法:以水解度和抗氧化活性为指标,筛选最适酶解乳清蛋白的酶,优化酶解乳清蛋白的条件。将所得乳清蛋白肽与钙离子进行螯合反应,优化螯合工艺制备螯合产物,探讨乳清蛋白肽-钙离子螯合物的理化性质和生物活性。结果:碱性蛋白酶为酶解乳清蛋白的最适用酶。最佳酶解工艺条件是:酶解温度50℃、最适pH 8.0、酶/底物800 U/g、底物质量浓度0.05 g/m L、水解时间1 h。优化的乳清蛋白肽-钙螯合物制备条件是:以固体钙的形式添加,乳清多肽与氯化钙质量比20∶1,反应时间20 min,反应温度50℃。采用红外光谱法对螯合物进行表征,所得物质为乳清蛋白酶解物与钙的螯合复合物。结论:经酶水解得到的乳清多肽可与钙离子螯合,所得螯合物具有显著的抗氧化活性,为乳清蛋白复合产品的开发提供试验依据。     

钙结合卵黄高磷蛋白磷酸肽的制备及其肽钙螯合物的结构表征

以鸡蛋蛋黄为原料制备卵黄高磷蛋白磷酸肽（phosvitin phosphopeptide,PPP）,并与钙离子螯合制备肽钙补充剂。通过高温高压处理卵黄高磷蛋白,先用胰蛋白酶酶解,以水解度和肽钙结合率为指标,进一步优化碱性蛋白酶的酶解条件以制备PPP。PPP与钙螯合获得螯合物PPP-Ca,通过紫外光谱、红外光谱分析、圆二色谱分析、扫描电镜和Zeta电位分析表征PPP-Ca的结构特性。结果表明最佳酶解条件为加酶量5%、酶解90 min、pH 9.0、温度40℃,在此最优条件下水解度为（25.45±0.17）%,肽钙结合率为（93.41±1.10）%。结构表征发现PPP-Ca主要通过羧基、氨基和磷酸基团相互作用结合,PPP和钙离子结合后其结构变得紧密有序,且有聚集现象。     

乌鳢酶水解物螯合钙的制备及其结构分析

为研究乌鳢酶水解物螯合钙的制备及其结构变化,实验通过优化酶解条件和螯合条件制备得到螯合率较高的乌鳢酶水解物螯合钙。结果表明,单因素和响应面优化实验确定的最佳螯合条件:加酶量35000 U/g、p H6.0、酶水解物与氯化钙质量比5∶1、螯合温度40℃、螯合时间30 min,此条件下酶水解物螯合钙的螯合率达到57.36%。紫外吸收光谱和红外吸收光谱测试表明乌鳢酶水解物和钙离子形成了稳定的螯合物,螯合物氨基酸结构分析表明螯合后酶水解物中天冬氨酸和谷氨酸的含量显著增加。通过扫描电子显微镜表征乌鳢酶水解物螯合前后的微观结构,表明酶水解物与钙离子有吸附作用。该研究为乌鳢的精深加工提供了新途径和理论基础。     

小麦胚芽蛋白钙络合物的制备及结构表征

以小麦胚芽蛋白为原料,经蛋白酶酶解后与Ca2+键合形成肽钙络合物,可作为第4代钙补充剂。碱性蛋白酶具有更高的麦胚蛋白水解活性,是制备高键合钙能力水解液的最适合酶类,且水解度在21.5%时钙的结合量达最大值18 mg/g蛋白;SDS-PAGE表明碱性蛋白酶迅速降解麦胚蛋白中高分子量亚基,且50 kDa和32³4 kDa亚基的水解与钙离子键合能力密切相关;键合钙能力强的水解产物中主要含Glu、Arg、Asp、Gly,且含44%疏水性氨基酸;分子量分布显示键合钙的小肽分子量在2 000 Da以下;全波长扫描和红外图谱表明肽段上的氨基和羧基均参与了键合反应,并生成了新的物质——麦胚肽钙络合物。