乳清蛋白肽-钙螯合物的制备及性质研究

目的:研究乳清蛋白肽与金属离子螯合的工艺及螯合物的性质,发掘乳清蛋白与金属离子螯合物的保健功效,为人们提供一种新型的保健食品。方法:以水解度和抗氧化活性为指标,筛选最适酶解乳清蛋白的酶,优化酶解乳清蛋白的条件。将所得乳清蛋白肽与钙离子进行螯合反应,优化螯合工艺制备螯合产物,探讨乳清蛋白肽-钙离子螯合物的理化性质和生物活性。结果:碱性蛋白酶为酶解乳清蛋白的最适用酶。最佳酶解工艺条件是:酶解温度50℃、最适pH 8.0、酶/底物800 U/g、底物质量浓度0.05 g/m L、水解时间1 h。优化的乳清蛋白肽-钙螯合物制备条件是:以固体钙的形式添加,乳清多肽与氯化钙质量比20∶1,反应时间20 min,反应温度50℃。采用红外光谱法对螯合物进行表征,所得物质为乳清蛋白酶解物与钙的螯合复合物。结论:经酶水解得到的乳清多肽可与钙离子螯合,所得螯合物具有显著的抗氧化活性,为乳清蛋白复合产品的开发提供试验依据。     

大黄鱼蛋白肽-钙螯合物的制备及性质研究

目的 制备大黄鱼蛋白肽-钙螯合物,研究其结构性质,深度研究大黄鱼多肽的促钙吸收活性。方法 以大黄鱼鱼糜为原料,通过胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶进行酶解制备多肽,将肽与钙进行螯合,探究大黄鱼蛋白肽及其肽-钙螯合物的性质功能。结果 三种酶解肽中,胰酶肽钙螯合含量最高,胰酶肽的粒径最小,肽-钙螯合物相比于肽的粒径都有所减小,说明肽-钙螯合物是一种致密的纳米颗粒并呈现出折叠多孔的网络结构。这些变化可归因于肽和钙离子之间的相互作用。紫外吸收光谱、荧光光谱、红外图谱和圆二色光谱的结果表明大黄鱼蛋白肽与钙离子螯合,生成了新的肽-钙螯合物。结论 三种酶解肽中,胰蛋白酶水解物的钙离子结合能力在三种蛋白酶获得的水解物中最高。因此,在本研究中胰蛋白酶被认为是制备大黄鱼蛋白水解物钙离子结合活性肽的最优酶制剂,为大黄鱼的高值化利用和新型钙制剂的开发提供了理论依据和实验参考。     

大豆分离蛋白肽-硒螯合物的制备及结构、抗氧化活性研究

对大豆分离蛋白酶解工艺及大豆分离蛋白肽-硒螯合物的制备工艺进行优化;采用吸收光谱和荧光光谱对大豆分离蛋白肽-硒螯合物的结构进行表征,并对其抗氧化性进行研究。结果表明,大豆分离蛋白经复合风味蛋白酶于温度50℃、底物浓度3%、酶/底物5g/100g条件酶解后,于pH 10、时间2h、温度78℃条件进行螯合时,所得螯合物螯合力为46.143mg/g,结构表征证明硒与大豆分离蛋白肽螯合并可引起荧光猝灭现象,且其具有高于大豆分离蛋白肽的抗氧化活性。     

谷朊粉钙离子螯合肽制备工艺优化及其结构表征

目的 优化谷朊粉钙离子螯合肽制备工艺并对其结构进行表征。方法 以水解度为指标,探究温度、时间、pH及加酶量等因素对谷朊粉酶解的影响;以钙离子螯合肽生成量为指标,探究了不同因素对钙离子螯合肽生产量的影响;并根据结果进行Box-Behnken响应面实验优化螯合工艺。通过扫描电镜分析和红外分析对谷朊粉钙离子螯合肽进行表征。结果 最佳酶解工艺为：料液比1:17.5、碱性蛋白酶和风味蛋白酶添加比例为3:1、加酶量5000 U/g、pH为9、温度50℃、酶解时间4.0 h;优化后的最佳螯合工艺为：温度38℃、肽液浓度13.5%、肽钙比5:1、螯合时间12.0 min、pH 7、静置时间35 min、无水乙醇添加量为7倍体积,在此条件下钙离子螯合肽得率为50.85%。扫描电镜结果显示,螯合肽外观发生明显改变,更有利于吸收;红外光谱分析表明,钙离子可能与谷朊粉多肽上的-NH、-COOH结合。结论 本研究建立的谷朊粉酶解工艺、钙离子螯合工艺可行,可为谷朊粉深加工和产品研发提供思路与理论参考。     

乳清蛋白钙螯合肽的分离及结构性质表征

目的:酶解乳清蛋白,通过连续色谱手段分离出强钙螯合活性的肽,再通过结构表征研究其钙螯合性质。方法:酶法水解制备乳清蛋白多肽,采用DEAE-650M阴离子交换色谱、Sephadex G-25凝胶过滤色谱、C18反向高效液相色谱(RP-HPLC)分离乳清蛋白酶解产物,得到特异性的钙螯合肽。采用核磁共振、X射线衍射、TGDSC、Zeta电位结构表征分析钙螯合性质。结果:乳清蛋白多肽经分离纯化得到具有强钙螯合力的肽,命名为WPH-13。其钙螯合活性为63.49μg/mg,结构鉴定发现钙离子可能被一个或多个WPH-13包裹在中央,主要结合位点是羰基氧和氨基氮。与钙结合后p H稳定性和热稳定性提高,抗氧化活性加强。结论:从乳清蛋白中分离得到的钙螯合肽具有较高的钙螯合活性。通过结构性质鉴定研究螯合物的作用机理,为第3代补钙剂的生产应用奠定基础。     

花生蛋白钙螯合肽的制备、富集及表征

本文对花生蛋白钙螯合肽的制备工艺进行了研究,并对所得水解产物及其钙螯合物进行了表征。结果表明,在6种市售的蛋白酶中,Alcalase 2.4L对花生蛋白的水解能力最强,其与ProteAXH进行分步复合水解可进一步提高水解效果,在最适条件下所得花生肽的钙结合能力达到了84.09 mg/g、蛋白质回收率高达87.89%;采用酸法脱酰胺可显著提高花生肽的钙结合能力,在最适条件下可达到132.04 mg/g;利用大孔树脂DM301对脱酰胺花生肽进行富集可进一步提高其钙结合能力,在最优条件下可高达164.34 mg/g。荧光光谱及圆二色谱分析证实花生肽与钙离子发生了螯合作用,红外光谱分析则表明花生肽主要通过其羧基与钙离子进行结合。因此,花生肽是一种潜在的钙螯合剂,这对于花生蛋白的高值化综合利用具有重要的参考价值。     

鳗鱼钙螯合肽制备工艺研究

本文以鳗鱼尾为原料,采用现代酶解技术高效制备鳗鱼钙螯合肽。系统研究了单酶的种类、多酶复配、酶解时间和酶添加量对蛋白回收率、肽得率以及产物钙螯合能力的影响规律,并获得最佳酶解工艺:添加鳗鱼尾蛋白3.5‰的胰酶,调整pH至8.0在55℃下酶解3 h,然后调整体系pH至4.0,加入鳗鱼尾蛋白3.5‰的酸性蛋白酶在55℃下继续酶解2 h得到鳗鱼肽,蛋白回收率和肽得率分别为66.61%和52.46%。并在此基础上,研究了螯合温度、pH值以及质量比对鳗鱼肽螯合能力的影响,优化获得螯合条件为:鳗鱼肽在30℃,pH值为9.0条件下按肽钙质量比1:2,与钙离子螯合30 min得到鳗鱼钙螯合肽,螯合物的钙离子含量为56.78 mg/g。通过氨基酸成分分析,发现鳗鱼肽与钙的螯合反应中,谷氨酸和天冬氨酸等酸性氨基酸的贡献最大。     

乌鳢酶水解物螯合钙的制备及其结构分析

为研究乌鳢酶水解物螯合钙的制备及其结构变化,实验通过优化酶解条件和螯合条件制备得到螯合率较高的乌鳢酶水解物螯合钙。结果表明,单因素和响应面优化实验确定的最佳螯合条件:加酶量35000 U/g、p H6.0、酶水解物与氯化钙质量比5∶1、螯合温度40℃、螯合时间30 min,此条件下酶水解物螯合钙的螯合率达到57.36%。紫外吸收光谱和红外吸收光谱测试表明乌鳢酶水解物和钙离子形成了稳定的螯合物,螯合物氨基酸结构分析表明螯合后酶水解物中天冬氨酸和谷氨酸的含量显著增加。通过扫描电子显微镜表征乌鳢酶水解物螯合前后的微观结构,表明酶水解物与钙离子有吸附作用。该研究为乌鳢的精深加工提供了新途径和理论基础。     

木瓜蛋白酶水解珠蚌制备肽钙及其红外光谱分析

以木瓜蛋白酶酶解珠蚌肉制备的活性肽为原料,研究珠蚌活性肽与钙离子的螯合新工艺,并对螯合产物进行红外光谱分析。研究表明:珠蚌活性肽与钙离子的最佳螯合工艺为螯合时间45min、温度35℃、肽钙比4.5:1、pH9.5、固液比1:30,此条件下,肽钙螯合率为31.47%。红外光谱扫描显示,肽的螯合产物在1418.7cm-1出现了羧酸盐的特征峰,在3386.8cm-1处出现了铵盐的特征峰,表明珠蚌活性肽与钙离子螯合物的生成。     

响应面法优化罗非鱼鳞钙结合肽酶解工艺及其特性表征

为研究罗非鱼鳞钙结合肽酶解制备最佳工艺条件及其螯合特性,从而为促钙吸收活性物质的研究提供基础,本研究以脱钙罗非鱼鳞为原料,钙螯合活性为指标,选用木瓜蛋白酶对罗非鱼鳞酶解工艺进行优化,获得罗非鱼鳞钙结合肽,并通过氨基酸分析、紫外光谱和红外光谱表征肽钙螯合特性。结果表明,罗非鱼鳞钙结合肽的最优酶解条件为底物浓度8%、时间2 h、酶底比0.3%、pH7、温度60 ℃,在此条件下酶解物钙螯合活性为(38.31±0.4) μg/mL。表征结果表明,螯合钙离子后,肽钙螯合物中天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、赖氨酸、丝氨酸、半胱氨酸及组氨酸的含量分别增加了0.88%、1.48%、0.34%、0.53%、0.04%、0.38%、0.46%。钙结合肽中的羧基氧和氨基氮等基团参与了与钙离子的结合,形成了罗非鱼鳞肽钙螯合物。罗非鱼鳞钙结合肽具有较高的钙螯合活性,这为补钙剂的生产应用奠定了基础。     

河蚬抗氧化肽—锌螯合物的制备及结构表征

以河蚬肉为蛋白源,添加中性蛋白酶进行酶解,采用葡聚糖凝胶G-50分离纯化得抗氧化肽,根据螯合最佳工艺制备抗氧化肽—锌螯合物,采用茚三酮法和硫化钠法对螯合产物进行定性分析,并通过紫外、红外、荧光光谱、X射线衍射和扫描电镜对产物结构进行分析。结果表明:所得螯合产物是一种抗氧化肽—锌螯合物;抗氧化肽中的羧基、氨基及酰胺键均参与了螯合反应,反应前后肽结构发生了显著变化;根据已得图谱分析可初步预测河蚬抗氧化肽—锌螯合物的结构。     

蚕蛹源肽锌纳米粒子的制备及其结构表征

为开发安全易吸收的补锌制剂,提升蚕蛹的利用价值,通过酶解蚕蛹蛋白制备蚕蛹肽,并将其与锌螯合生成肽锌螯合物。以锌螯合能力为指标,确定蚕蛹肽的酶解制备工艺及蚕蛹肽锌螯合物的制备工艺,采用紫外光谱、荧光光谱、扫描电镜、元素分析仪、粒径分析及红外光谱等技术对螯合前后的样品进行结构表征。结果表明,酶解制备蚕蛹肽的条件为碱性蛋白酶加酶量为1%、pH8.0、温度50℃、酶解时间6 h,该条件下的螯合率达58.05%;肽锌纳米粒的最佳制备条件为肽锌质量比1:0.5、pH6.5,温度55℃,时间20 min,此时螯合率达72.63%;添加硫酸锌后,紫外光谱与荧光光谱强度的减弱显示Zn²⁺与蚕蛹肽成功的发生了结合,所得蚕蛹肽-锌螯合物为粒径71.99 nm的纳米粒子,表面呈均匀的颗粒状结构,锌相对含量达37.46%,肽链中的-COOH、-NH₂和-C=O是锌离子与蚕蛹肽的主要结合位点。综上,蚕蛹是制备肽锌螯合物的良好原材料,这为丰富有机锌补充剂资源库和蚕蛹综合利用奠定了一定的理论基础。     

响应面法优化菌草灵芝多肽-硒螯合物的制备工艺

采用响应面分析法优化菌草灵芝多肽-硒螯合物的制备工艺,以螯合物中硒含量为指标,考察亚硒酸钠溶液与多肽溶液体积比、反应温度、反应时间和pH值对螯合反应的影响,同时建立螯合物制备工艺的二次项数学模型并验证其可靠性,并利用红外光谱法对菌草灵芝多肽-硒螯合物进行表征。结果表明:影响菌草灵芝多肽与硒离子螯合的因素主次顺序为pH值反应温度体积比反应时间,最佳的螯合工艺条件为反应时间60 min、反应温度75℃、pH 9、亚硒酸钠溶液与多肽溶液体积比1∶2,最佳制备工艺条件下,螯合物中硒含量为(2 985.89±10.59)μg/g。采用红外光谱法对螯合物进行表征,表明所得物质为菌草灵芝多肽与硒的螯合物。本研究为合成有机硒化合物提供了一种新的原料,也为菌草灵芝的开发利用提供了一个新的思路。     

酪蛋白GYLEQ抗氧化肽——钙螯合物的制备、表征及功能特性

目的:开发具有抗氧化活性和补钙功能的产品。方法:在固相法合成GYLEQ抗氧化肽的基础上,采用单因素和正交试验优化酪蛋白GYLEQ抗氧化肽与钙离子螯合反应条件,利用红外光谱和扫描电镜表征GYLEQ-Ca螯合物的结构,并分析GYLEQ-Ca螯合物体外抗氧化活性、模拟胃肠液中的持钙率以及对细胞活力的影响。结果:GYLEQ-Ca螯合反应最佳条件为螯合温度50℃,螯合时间40 min, pH 7.5,肽钙质量比4∶1,其中温度对螯合率的影响达到了极显著水平,pH和肽—钙质量比对螯合率的影响达到了显著水平。螯合后产物的红外波谱吸收峰与GYLEQ肽相比发生了改变,扫描电镜观察发现GYLEQ肽为颗粒状,而GYLEQ-Ca螯合物为黏连在一起的网状结构,表明GYLEQ肽与钙离子反应生成了新的化合物。GYLEQ-Ca螯合物的DPPH自由基、羟自由基清除率和还原力高于GYLEQ肽,GYLEQ-Ca螯合物在模拟肠液中持钙率维持在70%以上,且无细胞毒性。结论:GYLEQ-Ca螯合物具有较好的抗氧化活性和钙维持率。     

酶法制备乳源钙螯合肽及其特性表征

以牛乳酪蛋白为原料,选用胰蛋白酶为水解酶,以钙螯合活性为指标,对底物浓度、加酶量、pH值、温度和酶解时间5个因素进行单因素试验和正交试验。采用高效凝胶过滤色谱法测定钙螯合肽的分子量分布,同时通过氨基酸自动分析法、紫外-可见光谱和红外光谱法来表征最优酶解条件下的钙螯合肽和钙肽螯合物的结构特性。试验结果表明:底物浓度7%,加酶量0.8%,pH8.7,温度53℃,时间3 h,为最优酶解条件,其钙螯合活性为46.78μg/mL。在此条件下获得的钙螯合肽中,分子量在3 kDa以下的肽组分占92.11%;氨基酸分析表明,谷氨酸、丝氨酸和天冬氨酸这几种具有较强螯合活性的氨基酸的含量明显增加;由紫外光谱和红外光谱的结果可得,钙螯合肽的结构在螯合前后发生了明显的变化,其主要结合位点是-NH2、-COOH。     

珍珠肽螯合钙的制备与性质表征

为提高珍珠的利用率,生产易被人体高效吸收利用的补钙剂。以珍珠粉为原料制备珍珠肽,并对其进行钙螯合处理。以螯合物得率和螯合物中钙含量为考察指标,确定珍珠肽螯合钙的最佳制备方法。采用紫外-可见吸收光谱分析（UV-vis）、傅里叶红外光谱分析（FTIR）、圆二色谱分析（CD）、X射线衍射分析（XRD）、差示扫描量热分析（DSC）和扫描电镜分析（SEM）等比较螯合前后的变化。结果表明:珍珠粉经过丙酸酸解、重复离心除杂后得到珍珠蛋白。使用地衣芽孢杆菌蛋白酶（Bacillus licheniformis proteinase, BLP）对珍珠蛋白进行酶解得到珍珠肽,最终珍珠肽螯合钙得率为27.24%±1.29%,珍珠肽螯合钙中钙含量为48.75%±1.20%。对此条件下制备的珍珠肽和珍珠肽钙螯合物进行结构分析,发现珍珠肽的氨基和羧基都参加了螯合反应,并且螯合物的二级结构由原来的无序结构向有序、紧密的结构转变,螯合物的结晶度大幅度提高并生成结构更加稳定的新物质,而且有明显的分子聚集现象。     

钙结合卵黄高磷蛋白磷酸肽的制备及其肽钙螯合物的结构表征

以鸡蛋蛋黄为原料制备卵黄高磷蛋白磷酸肽（phosvitin phosphopeptide,PPP）,并与钙离子螯合制备肽钙补充剂。通过高温高压处理卵黄高磷蛋白,先用胰蛋白酶酶解,以水解度和肽钙结合率为指标,进一步优化碱性蛋白酶的酶解条件以制备PPP。PPP与钙螯合获得螯合物PPP-Ca,通过紫外光谱、红外光谱分析、圆二色谱分析、扫描电镜和Zeta电位分析表征PPP-Ca的结构特性。结果表明最佳酶解条件为加酶量5%、酶解90 min、pH 9.0、温度40℃,在此最优条件下水解度为（25.45±0.17）%,肽钙结合率为（93.41±1.10）%。结构表征发现PPP-Ca主要通过羧基、氨基和磷酸基团相互作用结合,PPP和钙离子结合后其结构变得紧密有序,且有聚集现象。     

大豆分离蛋白肽钙螯合物的制备及表征

研究了酶解时间和酸法脱酰胺改性对脱植酸大豆分离蛋白肽钙离子螯合能力的影响,并对螯合物的结构特性及营养特性进行表征。结果表明:酶解240 min的肽有较好的钙结合量(57.85mg/g),螯合物得率为28.43%,脱酰胺后钙结合量和螯合物得率分别增加到75.37 mg/g、34.55%;氨基酸分析结果表明酸性氨基酸是参与螯合物形成的重要氨基酸;相对分子质量分布实验结果说明钙离子更倾向于结合相对分子质量大于等于1 000的肽段,螯合物得率高,但相对分子质量小于等于500的肽段是获得更高钙结合量螯合物的重要肽源;红外光谱分析表明钙结合后引起肽段结构的变化,肽链羧基中的O及氨基中的N是主要配位原子;体外消化吸收模拟实验制备的肽钙螯合物有较好的胃胰酶耐受性,经消化后肽段相对分子质量几乎没有变化,钙保留率稳定在87%左右,生物利用率达81.81%。     

花椒籽肽-铁螯合物的制备及其理化性质

以花椒籽蛋白为肽源,FeCl_2为铁源制备肽铁螯合物。采用单因素试验和正交试验,以花椒籽蛋白水解肽与铁的螯合率为指标,确定了最佳螯合工艺条件:多肽溶液质量浓度为30 mg/mL,多肽和Fe Cl2的质量比为2.5∶1,pH值为6,螯合温度40℃,螯合时间45 min,此条件下测得的螯合率为96.84%,肽-铁螯合物得率为8.54%。对螯合铁进行紫外光谱、荧光光谱、傅里叶红外光谱及电镜扫描,观察表明:花椒籽蛋白多肽与FeCl_2发生了螯合反应,且所得肽铁螯合物是不同于多肽的一种新物质。对肽铁螯合物进行氨基酸组分分析,其总氨基酸含量为62.71%,必需氨基酸为16.41%,且赖氨酸为第一限制氨基酸。     

低值鱼蛋白多肽-钙螯合物的制备和抗氧化、抗菌活性研究

探讨了以南海低值鱼蛋白为原料,采用木瓜蛋白酶和风味酶的复合酶水解制备多肽复合物,并制备多肽-钙螯合物,对螯合工艺及螯合产物的结果及抗氧化和抗菌功能特性进行了初步研究.结果表明:DH为5%的多肽与钙离子螯合效果最佳,螯合率为81.75%;化学分析及红外光谱说明活性肽与钙离子螯合并形成稳定结构的螯合物;未经过乙醇沉淀的螯合钙具有明显的抗氧化活性,其抗氧化作用相当于生育酚的94.43%,经过80%乙醇沉淀的螯合物具有显著的抗枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌活性,其抑菌圈均直径分别为16mm和16mm.通过本研究,不仅为低值鱼的深精加工与综合利用开辟了新的途径,而且也为低值鱼酶解多肽螯合物的广泛应用奠定了基础.