超高效液相色谱法测定不同黄酒中17种氨基酸的分析研究

建立一种快速准确的柱前衍生-超高效液相色谱法,同时测定黄酒中17种游离氨基酸含量。黄酒样以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯(AQC)衍生化处理,以流速为0.7 mL/min经Waters AccQ·TagTM Ultra C_(18)(1.7μm,2.1×100 mm)的色谱柱梯度洗脱,利用二极管阵列检测器,在260 nm波长处检测。结果显示,17种游离氨基酸浓度在25～400μmol/L范围内,峰面积与浓度之间具有良好的线性关系(R~2≥0.9993),回收率在94.21%～104.82%。该方法可在11 min内将17种游离氨基酸完全分离,具有准确、快速、重复性好的特点,可用于黄酒中游离氨基酸含量的测定。     

PITC柱前衍生-反相高效液相色谱法测定黄酒中游离氨基酸和生物胺

建立柱前衍生-反相高效液相色谱,同时测定黄酒中17 种氨基酸及7 种生物胺含量的方法。采用异硫氰酸苯酯柱前衍生试剂,采用Inertsil ODS-SP C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）分析,以乙酸钠溶液和乙腈溶液混合液进行梯度洗脱,在254 nm波长处进行氨基酸和生物胺的含量分析。氨基酸和生物胺在2.0～500 mg/L和0.5～125 mg/L范围内具有良好的线性关系,相关系数R2大于0.99,平均回收率在86.44%～99.75%之间,相对标准偏差在0.31%～3.53%之间;检出限为0.02～0.25 mg/L,定量限为0.25～4.50 mg/L。方法线性范围广、准确性高、稳定性好,适用于黄酒中氨基酸及生物胺的检测。     

柱前衍生高效液相色谱法测定贝类产品中氨基酸含量

采用柱前衍生高效液相色谱法,测定了3种贝类中天冬氨酸、赖氨酸、亮氨酸等17种氨基酸含量。衍生试剂为6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯(AQC),流动相为醋酸盐-磷酸盐缓冲溶液、乙睛、水,梯度洗脱。色谱柱为AccQ·Tag(Waters)氨基酸分析柱,紫外检测。结果显示,氨基酸浓度与峰面积呈良好的线性关系,线性范围10～80μmol/L,检出限为0.23μmol/L,相关系数均在0.998以上,相对标准偏差RSD在2.1%～4.8%之间,回收率在91.3%～113.2%之间。     

AccQ·Tag 法测定绿豆蛋白酶解液中的氨基酸含量

采用柱前衍生高效液相色谱法(AccQ·Tag法)同时测定17种氨基酸,氨基酸浓度在10～100μmol/L(胱氨酸浓度在5～50μmol/L)时,其峰面积和氨基酸浓度的线性相关系数均在0.99以上,17种氨基酸的加标回收率在92.1%～103.7%之间,用此法测定了绿豆蛋白酶解液氨基酸的含量,取得了满意的结果。     

柱前衍生RP-HPLC法测定仙鹤草中氨基酸含量

采用柱前衍生RP-HPLC法对仙鹤草中游离及水解氨基酸进行测定。以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂。以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂;色谱柱采用Ultimate Amino Acid氨基酸柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A为80%(体积分数)的乙腈-水溶液,流动相B为7%(体积分数)的乙腈-CH3COONa溶液(p H=6.5);检测波长为254 nm。21种氨基酸在0.001 9μmol/m L~2.700μmol/m L内呈良好的线性关系(R20.999 0)。21种游离氨基酸平均回收率在95.84%~111.34%之间,RSD在1.23%~2.54%之间(n=6);水解氨基酸平均回收率在90.79%~111.23%之间,RSD在1.29%~2.21%之间(n=6)。柱前衍生RP-HPLC法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,适合仙鹤草中氨基酸含量测定。     

高效液相色谱法测定玉米蛋白粉中游离氨基酸含量

建立高效液相色谱法同时测定玉米蛋白粉中17种游离氨基酸含量的方法。样品用盐酸溶液(0.1 mol/L)提取,采用6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基-氨基甲酸酯(AQC)为衍生剂衍生。应用Nova-PakTM C_(18)柱,以10 mmol/L醋酸铵缓冲液、乙腈和超纯水为流动相进行梯度洗脱,柱温为37℃,检测波长为248 nm,外标法定量。结果表明,17种游离氨基酸线性关系良好,其中16种游离氨基酸在0.002 5~0.5μmol/mL范围内具有良好的线性关系,胱氨酸浓度在0.006 3~1.25μmol/mL范围内线性关系良好,相关系数在0.999 1~0.999 9之间,回收率为95.10%~105.21%,RSD为1.36%~4.39%。该方法灵敏度高、重现性好、操作简单,可用于检测玉米蛋白粉中游离氨基酸含量。     

柱前衍生-超高效液相色谱法同时测定虫草酒中17种游离氨基酸

建立一种快速、灵敏的柱前衍生-超高效液相色谱法同时测定虫草酒中17种游离氨基酸的方法。酒样经氮吹除醇,然后以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯(AQC)为衍生试剂在硼酸盐缓冲溶液中衍生化。色谱柱为Waters Acc Q·Tag TM Ultra C18(1.7μm,2.1×100mm),Acc Q·Tag Ultra Eluent A及Acc Q·Tag Ultra Eluent B梯度洗脱,流速为0.7 m L/min,检测器为二极管阵列检测器,检测波长260nm。结果表明:17种氨基酸在25~400μmol/L内有浓度范围内,峰面积与浓度之间具有良好的线性关系(r2≥0.9950),回收率在83.21%~119.82%。该方法在10min内17种氨基酸能够完全分离,具有准确、快速、重复性好的特点。     

柱后衍生-高效液相色谱法测定青稞黄酒中的18种氨基酸

采用茚三酮柱后衍生,高效液相色谱法测定了青稞黄酒中的18种氨基酸.结果表明,18种氨基酸回收率为95.1 %～102.5 %,相关系数0.9962～0.9999,检出限0.25～4.00 μmol/L.在所分析的4种青稞黄酒样品中,氨基酸含量为456.10～760.18 mg/L.青稞黄酒中的呈味氨基酸以甜味氨基酸和涩味氨基酸为主,占76 %以上.     

GC-FID测定黄酒中17种游离氨基酸

建立以N-(特丁基二甲基硅烷)-N-甲基三氟乙酰胺(MTBSTFA)为衍生试剂测定黄酒中17种游离氨基酸的气相色谱(GC)方法。比较了衍生温度、时间、及辅助试剂等对衍生效率的影响,确定N,N-二甲基甲酰胺(DMF)为辅助衍生试剂,衍生温度80℃,衍生时间60 min,可以定量检测黄酒中主要的游离氨基酸。各氨基酸在50～500 mg/L内线性良好(相关系数均大于0.99)。对黄酒样品的测定结果与高效液相色谱测定结果相比皮尔逊相关系数为0.998,样品的平均加标回收率为87.11%～119.47%。结果表明:GC-FID方法操作简便、准确、重现性好,适用于黄酒中17种游离氨基酸的分离检测。该测定方法将为开发气相-燃烧-同位素比率质谱(GC-C-IRMS)测定黄酒中氨基酸13C稳定同位素丰度以及分析黄酒酿造过程中的代谢实验提供研究基础。     

AccQ-Tag柱前衍生反相高效液相色谱法测定谷物及食糜中氨基酸含量

用AccQ-Tag法测定不同谷物及食糜中氨基酸的含量,并优化原料与酸解剂的比例。采用内标法定量,6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯为柱前衍生剂,用反相高效液相色谱仪,2475荧光检测器（激发波长250nm、发射波长395nm）,Waters AccQ-Tag Nova-PakTMC18柱（3.9mm×150mm,4μm）,柱温37℃,以醋酸钠（pH4.95）缓冲液为流动相A,纯乙腈为流动相B,水为流动相C进行梯度洗脱,进样量为10μL。结果发现,5mg原料的最优酸解剂为500μL;17种氨基酸线性回归方程在25～500μmol/L范围内线性良好（胱氨酸（Cys）浓度在12.5～250μmol/L之间）,相关系数r为0.9996～0.9999,测定的平均回收率为97.56%～103.92%（n=3）,相对标准偏差为0.31%～2.75%（n=3）。本法快速简便,能够适用于谷物及食糜中氨基酸含量的测定。     

一测多评法测定羊肚菌中17种氨基酸的含量

目的:建立以谷氨酸为内参物,同时测定羊肚菌中17种氨基酸含量的一测多评法。方法:采用高效液相色谱,以乙腈-乙酸铵水溶液为流动相,梯度洗脱,以谷氨酸为内参物,建立其与其他16种氨基酸的相对校正因子（RCF）,并用相对校正因子计算16种氨基酸的含量;同时采用内标法对羊肚菌中17种氨基酸进行测定,比较一测多评法与内标法结果的差异,并对方法耐用性进行考察。结果:17种氨基酸在线性范围内线性关系良好,线性相关系数R2>0.9990,平均加标回收率在92.42%~101.16%之间,RSD在0.25%~1.94%,在不同实验条件下重现性良好（RSD<2.0%）;一测多评法和内标法测定结果的对比分析,无显著性差异（P>0.05）。在不同色谱柱、色谱体系中的相对校正因子、相对保留时间的RSD均小于2.0%,耐用性良好。结论:本文建立的一测多评法简单易操作,结果准确,节约了测定成本,为羊肚菌中氨基酸的测定提供了一种新的模式,为羊肚菌的质量评价提供有价值的参考。     

柱后衍生高效阳离子交换色谱法测定宁夏枸杞及枸杞花粉中氨基酸含量

采用酸水解、离子交换色谱分离及茚三酮柱后衍生法测定宁夏当年产枸杞及枸杞花粉中17种氨基酸含量,建立宁夏枸杞中蛋白水解氨基酸的测定方法。结果表明：枸杞干果中17种氨基酸总量为7.788%～8.820%,其中人体必需氨基酸占氨基酸总量的28.9%～30.0%,半必需氨基酸占氨基酸总量的4.5%～4.8%。枸杞鲜果中氨基酸总量为1.960%～2.036%,必需氨基酸占总氨基酸含量的29.2%～30.3%,半必需氨基酸约占总量的5.2%。枸杞花粉中氨基酸总量为21.62%～22.08%,人体必需氨基酸约占总量的37.9%,半必需氨基酸约占总量的4.9%。     

柱前衍生反相高效液相色谱法测定柞蚕蛹蜕中氨基酸

建立一种反相高效液相色谱同时测定柞蚕蛹蜕中17 种氨基酸的分析方法。以正亮氨酸为内标物,异硫氰酸苯酯(PITC)作为Venusil-AA 氨基酸分析专用柱柱前衍生试剂,采用二元梯度洗脱,波长254nm 处检测柞蚕蛹蜕中氨基酸含量。17 种氨基酸在0.5～0.0125μmol 的范围内,具有良好的线性关系,加样回收率在96.2%～101.9%。柞蚕蛹蜕中氨基酸含量为21.9%,其中精氨酸含量最高。人体必需氨基酸占总氨基酸的33.62%。柱前衍生反相高效液相色谱法简单、高效,可以用于柞蚕蛹蜕氨基酸含量测定。     

氨基酸分析仪检测牛乳中掺入的大豆蛋白

利用氨基酸分析仪对牛乳和大豆分离蛋白中的17 种氨基酸进行分离测定,氨基酸浓度在0.025～0.350 μmol/mL时,其峰面积和氨基酸浓度的线性相关系数均不小于0.988,重复性较好,牛乳加标回收率范围在94.2%～103.1%,相对标准偏差在0.89%～3.31%。通过对比分析牛乳和大豆的氨基酸图谱找到含量差异较大的6 种氨基酸,并根据模拟掺假实验样品的氨基酸分析6 种氨基酸含量和掺假量的线性关系,相关系数R2达0.889,建立牛乳中大豆蛋白掺假的定性定量检测方法。     

高效液相色谱法检测食品中17种游离氨基酸

目的使用异硫氰酸苯酯衍生-高效液相色谱法对食品中17种游离氨基酸进行检测。方法对17种游离氨基酸及其苯胺硫甲酰基衍生物稳定性的分析,研究游离氨基酸的最佳衍生条件。同时,对盐沉淀法和C_(18)固相萃取(solid phase extraction, SPE)小柱法2种样品除杂方法的加标回收率进行测定。结果胱氨酸加热干燥5h后,回收率为68.46%±4.01%,热稳定性差;其它16种氨基酸加热1～5h后回收率均在90%～110%之间,热稳定性较好。胱氨酸的苯胺硫甲酰基衍生物,6h后回收率仅为11.04%±1.65%,稳定性差;其它氨基酸的苯胺硫甲酰基衍生物24 h后回收率均大于90%,比较稳定。另外,前处理中使用C_(18) SPE除杂时,样品中游离氨基酸的加标回收率均大于70%,而使用水杨酸和三氯乙酸除蛋白后苯胺硫甲酰基衍生物降解严重。结论除胱氨酸外,其余16种氨基酸的热稳定性均较好,且生成的苯胺硫甲酰基衍生物比较稳定,可以通过异硫氰酸苯酯衍生进行定量分析。相比于水杨酸和三氯乙酸沉淀法, C_(18) SPE柱是游离氨基酸除杂方法的首选,而无机盐影响异硫氰酸苯酯与氨基酸衍生,因此此方法不适用于含盐样品的衍生。     

不同产地地参中17 种氨基酸的测定与分析

以全国6 个产地地参为研究对象,建立一种异硫氰酸苯酯柱前衍生,超高效液相色谱法同时测定地参中17 种氨基酸含量的方法,并对不同产地地参中氨基酸类成分进行分析评价。采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（2.1 mm×150 mm,1.7 μm）分离,流动相为0.1 mol/L乙酸钠-80%乙腈溶液梯度洗脱（冰醋酸调pH 6.5）,检测波长254 nm,柱温40 ℃,流速0.2 mL/min,可在19 min内实现17 种氨基酸衍生物的分离。结果表明,17 种氨基酸在各自质量浓度范围内线性关系良好（r≥0.999 0）,平均回收率为89.69%～106.02%,相对标准偏差为0.44%～2.60%,检出限为0.020～0.110 μg/mL,定量限为0.067～0.368 μg/mL。地参水解溶液中均检出17 种氨基酸,其中7 种必需氨基酸和9 种药用氨基酸,氨基酸种类丰富;必需氨基酸占总氨基酸比例为23.99%～29.36%,药用氨基酸占总氨基酸比例为68.44%～74.16%;不同产地间氨基酸种类无差异,但含量差异较大,各产地均以天冬氨酸和谷氨酸含量为最高,平均含量分别为13.338 mg/g和8.478 mg/g,分别占总氨基酸含量的26.32%和16.73%。聚类分析将6 个产地分为3 类,山东菏泽样品总氨基酸含量最高,达到81.663 mg/g;重庆万州样品总氨基酸含量最低,仅19.463 mg/g。氨基酸成分含量差异可能与地域有关。综上所述,地参氨基酸具有重要的营养价值和药用价值,本研究可为深入研究地参药材的品质评价和资源开发利用提供基础资料。     

基于统计学和营养学的三种藻粉蛋白质营养价值评价与方法分析

采用主成分分析法、模糊识别法、氨基酸含量比值法和氨基酸比值系数法,分析了丝路寒旱区的小球藻、螺旋藻和杜氏盐藻藻粉蛋白质的营养价值,并对4种分析方法进行了比较。结果表明:丝路寒旱区的小球藻、螺旋藻和杜氏盐藻藻粉蛋白含量差异显著(P<0.05),以小球藻藻粉蛋白含量最高为70.77 g/100 g·DW,且均含有17种氨基酸,包括除色氨酸外的7种人体必需氨基酸,必需氨基酸占总氨基酸的质量分数均接近FAO/WHO氨基酸模式谱。三种藻粉蛋白质的贴近度分别为0.879、0.982和0.906;第一限制氨基酸均为甲硫氨酸;氨基酸比值系数分由高到低为小球藻（82.89）>螺旋藻（81.78）>杜氏盐藻（74.46）。主成分分析提取出4个主成分,累计方差贡献率为98.305%,可较好反映藻粉蛋白质氨基酸综合品质。综合四种评价方法的特点,氨基酸比值系数法和模糊识别法均对蛋白质中必需氨基酸从生物吸收的角度开展分析,但就计算方法而言,氨基酸比值系数法更严谨。本研究中模糊识别法与主成分分析法的结果虽然是一致的,但采用主成分分析法分析蛋白质中代表性氨基酸种类可能更好些。FAO/WHO推荐的蛋白质E/N和E/T值分析法,仅关注的是必需氨基酸的量,没考虑生物吸收必需氨基酸的特点。综上,丝路寒旱区三种藻粉蛋白质的营养价值依次为小球藻>螺旋藻>杜氏盐藻。     

不同品种荔枝果实游离氨基酸分析

为探明荔枝果实中游离氨基酸组成及含量,采用AccQ ·Tag柱前衍生反相高效液相色谱法测定紫娘喜、大丁香、黑叶、兰竹和甜眼荔枝果实中的17种游离氨基酸含量。结果表明：测定方法重现性好,精密度高;甜眼果实中的人体必需氨基酸含量占氨基酸总量的36.4%,人体必需氨基酸含量与非必需氨基酸含量之比为0.57,较接近理想蛋白质的标准要求;紫娘喜、大丁香、黑叶、兰竹和甜眼荔枝果实均含有丰富的药效氨基酸、鲜味氨基酸、甜味氨基酸以及少量的芳香族氨基酸,但不同品种间的含量及比例差异较大。因此,不同荔枝品种的口感和风味明显不同。     

黑老虎茎叶营养成分检测及评价

本文采用凯氏定氮法、苯酚-硫酸法、高效液相色谱法、气相色谱法、气相色谱-质谱法、电感耦合等离子体发射光谱法、等离子体质谱法检测五味子科南五味子属植物黑老虎茎叶的水分、灰分、蛋白质、总糖、多糖、总氨基酸、游离氨基酸、脂肪酸、挥发性物质和矿质元素等营养成分,并进行营养评价。结果表明,黑老虎茎叶蛋白质、总糖和多糖含量较高,分别为19.74%、18.90%和4.47%;并含有17种氨基酸,且富含人体所需的7种必需氨基酸;游离氨基酸总量为2.198 mg/g,其中鲜味氨基酸占比达45.72%。脂肪酸含量丰富,其中不饱和脂肪酸占比为65.37%,且多不饱和脂肪酸占比达52.06%,单不饱和脂肪酸占比为13.31%,脂肪酸组成比例较合理。茎叶中含有的挥发性物质主要是萜烯类（64.70%）和醇类（32.63%）。矿质元素含量丰富,呈现高钾低钠的特点,且锌/铜、锌/铁比值均较为合理。本文的研究结果为药食两用植物资源黑老虎的综合开发利用提供参考。