碱性蛋白酶水解制备蛋黄降压肽工艺条件优化

以经超临界CO2萃取除去大部分蛋黄油和卵磷脂的鸡蛋蛋黄蛋白质为原料,选用碱性蛋白酶水解该蛋白质制备蛋黄降压肽(ACEI),用高效液相色谱(HPLC)测定酶解产物对血管紧张素酶(ACE)的抑制活性(IP)。研究了不同水解温度、酶用量([E]/[S])、底物浓度([S])和pH值时蛋白质水解度(DH)随时间的变化规律,并进一步考察了不同DH产物的氮溶解指数(NSI)及对ACE抑制活性(IP)。结果表明,获得具有较高活性和较好溶解性的产物需控制蛋白质DH在16%～20%之间,以IP为考察指标得到该碱性蛋白酶水解鸡蛋蛋黄蛋白质制备降压肽的适宜条件为:水解时间300min,水解温度45℃,[E]/[S]为50AU/kg,[S]为7%,pH值9.5,此时DH为16.3%,NSI值为89.09%,水解物对ACE的IP值可达到68.28%。     

三酶法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽及活性研究

为了探索制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的最佳工艺,在碱性蛋白酶和胰蛋白酶酶解的基础上,以酶解温度、酶解时间、酶解pH值和酶与底物质量比([E]/[S])为试验因素,以水解度和DPPH自由基清除率为响应值,采用响应面分析法优化Orientase 20A酶的酶解条件。结果表明:最优工艺参数为:酶解温度为41.74℃、pH3.97、酶解时间为6h、[E]/[S]为1.5%,酶解液水解度和DPPH自由基清除率的预测值分别为9.42%和35.01%,验证值分别为9.57%和35.21%。响应面对酶解法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的酶解条件的优化是可行的,可以用于实际预测。抗氧化活性实验表明,酶解肽具有较强的清除DPPH自由基和ABTS+.能力,其IC50值分别为10.78mg/mL和8.26mg/mL。     

酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

为获取酶解蛋清蛋白制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的工艺参数,研究4种蛋白酶酶解蛋清蛋白所得产物对ACE的抑制活性,筛选出胰蛋白酶作为制备蛋清蛋白ACE抑制肽的适宜用酶。运用响应曲面法研究酶解时间、底物浓度([S])和酶与底物质量比([E]/[S])对制备ACE抑制肽工艺的影响,建立以上3因素与ACE抑制率关系的数学模型。结果确定胰蛋白酶酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的适宜酶解条件为酶解时间4.87h、[S]3.06%、[E]/[S]2.91%、酶解温度45℃、pH7.4,此条件下制备的蛋清蛋白酶解产物ACE抑制率达到50.73%。     

泥鳅蛋白酶解工艺条件的优化

以泥鳅蛋白为原料,酶解制备具有降血压活性的短肽。从9种蛋白酶中筛选出菠萝蛋白酶的酶解液具有较高降压活性,IC50值为0.65mg/mL。在单因素试验的基础上,采用和Box-Behnken和响应面法(RSM)优化了酶解泥鳅蛋白的工艺条件,以ACE抑制率为指标,探讨酶与底物的比值([E]/[S])、酶解温度和酶解时间对ACE抑制率的影响。结果表明：制备降血压肽的最佳酶解条件为[E]/[S]4.9‰、酶解时间5.9h、酶解温度54.4℃、pH6.5、底物质量分数30%,该条件下制备的泥鳅蛋白酶解产物的ACE抑制率为88.92%。     

酶解牛乳酪蛋白制备ACE抑制肽的研究

目的利用酶技术制备酪蛋白源ACE抑制肽.方法以ACE抑制活性为指标,筛选最佳用酶,优化酶解反应条件,并研究酶解过程中水解度和游离氨基酸含量的变化.结果通过对5种蛋白酶的筛选,最终确定AS1.398中性蛋白酶为水解用酶,制备酪蛋白源ACE抑制肽,其最佳反应条件为pH 7、温度45℃、底物质量分数7.5%、酶用量([E]/[S])5%,水解6 h.在酶解过程中,随着时间的延长,水解度略有增加,而游离氨基酸含量大幅度增加.酪蛋白ACE抑制肽的半抑制浓度(IC50值)为0.68mg/mL.结论牛乳酪蛋白用蛋白酶水解可制备高活性的ACE抑制肽,是获得ACE抑制肽的良好来源.     

贻贝中ACE抑制活性肽的酶解制备及表征

以贻贝为原料,制备具有血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)抑制作用的活性肽.采用水解度DH、蛋白质回收率及ACE抑制活性为指标,筛选水解贻贝粗蛋白的最适酶种;通过响应面分析(RSM)对水解贻贝粗蛋白的工艺条件进行优化;探讨水解度(DH)与ACE抑制活性的关系;利用HPLC方法分析活性肤的相对分子质量分布.试验结果表明碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L是水解贻贝粗蛋白的最适酶种;碱性蛋白酶在[E]/[S]1.64、pH 9.12、温度57 ℃水解条件下,酶解物的ACE抑制作用最强,其DH26.41%,IC50 34.64g/mL.就贻贝粗蛋白的水解而言,控制水解度为25%～30%为宜.碱性蛋白酶水解贻贝粗蛋白所得活性肤,主要是以相对分子质量较小的短肽组成,其中,相对分子质量在1 000 Da以内的占90.42%.本研究结果表明以贻贝为原料,可以开发具有显著ACE抑制活性的降血压肤.     

复合酶水解蚕蛹蛋白制备功能性寡肽的工艺研究

为了制备分子量低、肽含量高的蚕蛹功能性寡肽,本文采用单素实验与响应面分析法,对不同蛋白酶及其不同组合、温度、pH值、底物浓度、酶的添加量等因素对蚕蛹分离蛋白水解工艺的影响进行了研究.研究结果表明,多酶复合水解可显著提高蚕蛹蛋白的水解度和寡肽得率,其中胰酶、风味蛋白酶与中性蛋白酶是最佳多酶组合,其最佳水解条件为底物浓度7.33％、酶添加量[E]/[S]3.62％、pH7.38、水解温度54.6℃、水解时间6h.在此条件下,蚕蛹蛋白的水解度高达29.2％,寡肽得率高达为81.14％.酶解后产品数均分子量为665.5 Da,重均分子量为726.9 Da,肽含量高达74.6％,而游离氨基酸含量仅为7.33％,表明复合酶解虽然提高了蚕蛹蛋白的水解度,但主要产物仍然是低分子寡肽,并没有大量生成游离氨基酸.     

具有抗氧化活性的骨蛋白肽水解条件优化的研究

对骨蛋白水解物的水解条件进行优化,并对其不同水解条件下水解物的抗氧化性进行了研究.本实验采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶三种酶,分别选择2%、5%和7%的骨蛋白底物浓度,酶与底物浓度比([E]/[S])分别采用0.5:100、1:100、1.5:100、2:100对骨蛋白进行水解,用pH-Stat法测定其水解度,并且将水解物应用于卵磷脂脂质氧化体系中,测定其TBARS值,研究其抗氧化性.通过测定三种酶水解产物的水解度以及在Liposome体系中的TBARS值,表明碱性蛋白酶的酶解产物具有较高的水解度和抗氧化活性,故选择碱性蛋白酶对骨蛋白进行水解;通过测定不同底物浓度、不同的[E]/[S]的酶解产物的水解度和TBARS值,得出底物浓度为7%:[E]/[S]为1:100的酶解产物具有较高的抗氧化能力.     

具ACE抑制活性的大豆肽的制备及精制研究

采用酶解技术制备具ACE抑制活性的大豆肽混合物。选择了最佳水解用酶,优化了反应条件。确定碱性蛋白酶解最佳条件为:pH9.0,温度50℃,底物浓度6%,酶用量([E]/[S])3%,作用时间4h。选择D3520型大孔树脂对水解产物进行脱盐精制,脱盐率91.2%,肽回收率89.3%,ACE抑制活性提高了28.5%,大豆分离蛋白ACE抑制肽混合物分子质量主要分布为200-720,在pH3-10,溶解性达98.1%以上,且稳定性好。     

金针菇蛋白酶解制备抑菌肽的工艺优化及功能评价

为了研究金针菇蛋白质的最佳酶解工艺和抑菌活性,在单因素试验的基础上,采用响应面设计,研究酶解时间、酶与底物比([E]/[S])和酶解温度对工艺的影响。以大肠杆菌为指示菌,以水解度和抑菌圈直径为响应值,最终确定酶解金针菇蛋白制备抑菌肽的最佳条件是:酶解时间4.59h,[E]/[S]4.73%,温度58.62℃。在此条件下,水解度为45.94%,抑菌圈直径为17.58mm,与理论预测值(水解度45.27%,抑菌圈直径17.45mm)的误差均在1%以内,说明所建模型具有较好的拟合性。酶解液经SephadexG-50凝胶层析法分析,抑菌肽相对分子质量主要分布在260.9～2538.6之间。